检索结果-南通市图书馆

遵义医科大学学报 2024年第5期47卷 508-512,521页

作者：冯俊霞陈锦峰崔晓虎夏语嫣薛冠华袁静首都儿科研究所细菌学研究室北京100020 北京大学首都儿科研究所教学医院北京100020

目的建立猴痘病毒(mpox virus)的实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测方法。方法以猴痘病毒f3l基因为靶序列,设计特异性引物和探针,建立猴痘病毒RT-PCR检测方法,并对方法的灵敏度、特异性和重复性进行检测;对疑似猴痘阳性的人脓拭子临床样本核... 详细信息

目的建立猴痘病毒(mpox virus)的实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测方法。方法以猴痘病毒f3l基因为靶序列,设计特异性引物和探针,建立猴痘病毒RT-PCR检测方法,并对方法的灵敏度、特异性和重复性进行检测;对疑似猴痘阳性的人脓拭子临床样本核酸进行检测,对RT-PCR方法检测临床样本能力进行评价。结果本研究建立的RT-PCR检测方法可实现猴痘病毒的特异性检测,与天花、痘苗、牛痘等其他正痘病毒无交叉反应,检测重复性好,最低检测限为103copies/μl。可以对人皮肤拭子样本中的猴痘病毒进行准确检测。结论本研究建立了猴痘病毒的RT-PCR检测方法,可在临床样本中快速、特异、灵敏的检测猴痘病毒。

关键词：猴痘病毒实时荧光定量PCR 快速检测方法 f3l基因

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

牛结节性皮肤病广西流行毒株生物学特性和检测方法的研究

牛结节性皮肤病广西流行毒株生物学特性和检测方法的研究

引用

作者：赵钟毅广西大学

学位级别：硕士

牛结节性皮肤病(lSD)是由牛结节性皮肤病病毒(lSDV)引起牛发热、粘膜水肿及皮表广泛性的结节为特征的急性或亚急性传染病,自从2019年8月在我国新疆地区首次确诊以来,在一年之内便从我国西北部蔓延至东南部多个省区,对我国的牛养殖业造... 详细信息

牛结节性皮肤病(lSD)是由牛结节性皮肤病病毒(lSDV)引起牛发热、粘膜水肿及皮表广泛性的结节为特征的急性或亚急性传染病,自从2019年8月在我国新疆地区首次确诊以来,在一年之内便从我国西北部蔓延至东南部多个省区,对我国的牛养殖业造成了巨大的危害和威胁。接种弱毒疫苗是预防lSD的有效手段,我国批准在lSD流行地区使用山羊痘病毒(GTPV)弱毒疫苗开展免疫,但弱毒疫苗在使用中存在毒力返强、毒株重组等安全性问题。对于lSDV而言,现阶段迫切需要对新发现未知的流行毒株进行监测、掌握基因序列和追踪病毒遗传进化方向,探究lSDV在传播过程中可能出现的毒力返强现象;同时开发lSDV和羊痘病毒属(Ca PV)其他成员的鉴别诊断方法,以实现对牛群健康状况的监测。本研究利用高通量测序技术对我国广西地区患病牛的皮肤结节中分离鉴定到的lSDV进行第二代全基因组测序,并对其基因序列、遗传进化和基因重组进行分析;针对lSDV表达毒力相关基因lSDV f3l,以痘苗病毒(VACV)天坛株(VTT)为研究载体,分别构建重组转移载体,利用VTT共转染至BHK-21细胞,并在BHK-21细胞中成功筛选重组病毒;基于lSDV 010基因、Ca PV 068基因,建立可以同时鉴别诊断lSDV与Ca PV其余成员的双重荧光定量PCR检测方法,并应用建立的检测方法对广西各地区采集的牛、羊临床样品进行流行病学调查研究。结果显示:(1)应用全基因组测序获得lSDV/lYGN/2020株的全基因组序列,lYGN/2020株全长150678 bp,与2019～2020年我国各省区分离鉴定的毒株同源性为99.8～99.9%。遗传进化树分析表明lYGN/2020株同我国各省区报道的毒株以及2020年后在东南亚各国陆续报道的毒株分在同一群,都属于lSDV Recombinant群。重组分析显示,lYGN/2020株有13个潜在的重组事件,是一株疫苗重组型毒株;(2)构建了携带有VACV p E/l早晚期复合强启动子、EGfP绿色荧光蛋白基因以及黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶gpt基因的重组转移中间载体p VTT-d f3l-EGfP-gpt。其载体内再分别插入lSDV f3l和VTT f3l基因表达盒,得到重组转移载体p VTT-d f3l-EGfP-gptlf3lr和p VTT-d f3l-EGfP-gpt-v f3l,通过与VTT共转染和筛选纯化最终获得重组病毒r VTT-lf3lr和r VTT-v f3l;(3)建立的鉴别lSDV的双重荧光定量PCR检测方法,可同时鉴别lSDV与Ca PV其余成员,检测下限(lOD)均为15 copies/μl,组内与组间试验结果变异系数均小于2.0%,建立的方法特异性好、灵敏度高、重复性好。应用该方法检测广西牛、羊临床样品共2122份,其中牛临床样品1520份,山羊临床样品602份。检测出lSDV和Ca PV阳性率分别为1.08%和1.41%,检测结果与参考方法检测结果的符合率在99.0%以上。综上所述:本研究从我国西南部省区检测分离到一株疫苗重组型毒株lSDV毒株并引起重视。根据lSDV f3l毒力相关基因成功构建重组病毒,为今后开展lSDV f3l蛋白的生物学特性研究提供试验条件和前期准备工作。针对lSDV特异性位点建立的鉴别lSDV检测方法为lSDV精准防控和流行病学调查提供快捷高效的技术手段。

关键词：牛结节性皮肤病病毒痘苗病毒全基因组测序 f3l基因同源重组双重荧光定量PCR

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：