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Ultrasensitive Label-free Detection of miRNA with Asymmetric Hairpin Probe, exonuclease i and SYBR Green i

Chemical Research in Chinese Universities 2015年第2期31卷 244-248页

作者： LiU Yingxin SU Hongyan LONG Jiabao CAO Qingfeng YAN Shuya MENG Xiangxian CAi Qingyun College of Biology State Key Laboratory of Chemo/Biosensing and Chemometrics Hunan University Changsha 410082 P. R. China Department of Bioengineering and Environment Science Changsha University Changsha 410003 P. R. China

Detection of miRNAs presents a particular challenge because of their limited size, high sequence homo- logy and greatly various expression level. in this work, an ultrasensitive, label-free and isothermal miRNA detection was developed based on asymmertric hairpin probe, exonuclease i（Exo i） and SYBR Green i. The method employed asymmetric hairpin probe to perform cycled polymerization and Exo i to reduce background signal. in the presence of the target miRNA, the target triggers probe-mediated cycled polymerization reactions to generate lots of dsDNA products. The dsDNA product effectively prevents itself from being degraded by Exo i and permitted the insertion of more fluorescence dye into it to enlarge the fluorescence signal. in the absence of the target miRNA, there was no probe-mediated polymerization reaction, and the probe was digested by Exo i added, which minimized the intercala- tion of fluorescence dye to reduce the background signal. The combination of the probe-mediated cycled polymeriza- tion with the Exo 1-assisted background reduction allows us to achieve a detection limit of 5× 10^-18 mol/L. Owing to its ultrasensitivity, excellent specificity, convenience and low-cost, this method might hold out great promise in miRNA detection.

关键词： Ultrasensitive miRNA Asymmetric hairpin probe exonuclease i

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