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人结直肠癌中Evi-1及TRAPPC9表达水平对肿瘤进展影响的初步探索

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人结直肠癌中Evi-1及TRAPPC9表达水平对肿瘤进展影响的初步探索

作者：朱晔广西医科大学

学位级别：硕士

目的:第一部分检测Evi-1、JNK、c-Jun在结直肠癌中表达水平,并分析Evi-1、JNK、c-Jun蛋白表达与结直肠癌患者临床病理特征之间的关系,评估Evi-1在直肠癌c-Jun N末端激酶（JNK）/c-Jun通路的调控作用,探索Evi-1在结直肠癌凋亡过程中的作... 详细信息

目的:第一部分检测Evi-1、JNK、c-Jun在结直肠癌中表达水平,并分析Evi-1、JNK、c-Jun蛋白表达与结直肠癌患者临床病理特征之间的关系,评估Evi-1在直肠癌c-Jun N末端激酶（JNK）/c-Jun通路的调控作用,探索Evi-1在结直肠癌凋亡过程中的作用。第二部分检测TRAPPC9、JNK、LC3在结直肠癌中表达水平,并分析TRAPPC9、JNK、LC3与结直肠癌患者临床病理特征之间的关系,探索TRAPPC9通过JNK信号通路对结直肠癌自噬的影响。方法:第一部分从癌症基因组图谱下载了394例结直肠癌患者的临床病理资料和基因Evi-1 mRNA表达量。并且,在96例结直肠癌组织及癌旁正常粘膜组织中,使用免疫组织化学方法检测Evi-1,JNK和c-Jun蛋白表达水平。运用t检验和卡方检验对数据进行统计学分析,P＜0.05被认为差异具有统计学意义。第二部分在人结肠癌细胞株HCT116和人正常结肠粘膜上皮细胞株NCM460中,使用实时荧光定量PCR检测TRAPPC9 mRNA表达量;免疫组织化学法检测TRAPPC9、JNK和LC3蛋白在80例结直肠癌/癌旁正常组织中表达水平。运用t检验和双尾卡方检验对数据进行分析,P＜0.05被认为差异具有统计学意义。结果:第一部分TCGA数据表明Evi-1 mRNA在结直肠癌中高表达,并且,Evi-1 mRNA表达与淋巴结转移,T分期,远处转移和TNM分期显著相关（P＜0.05）;免疫组织化学染色结果显示,Evi-1、JNK和c-Jun的Remmele免疫反应评分在结直肠癌组织中表达高于癌旁正常粘膜上皮组织,Evi-1在结直肠癌组织和癌旁正常粘膜上皮组织中的阳性表达率分别为65.6%（62/96）和11.5%（11/96）,JNK在结直肠癌组织和癌旁正常粘膜上皮组织中的阳性表达率分别为59.4%（57/96）和18.9%（18/96）;c-Jun在结直肠癌组织与癌旁正常粘膜上皮组织中的阳性表达率分别为55.2%（53/96）和21.9%（21/96）;此外,结直肠癌组织中的Evi-1与JNK蛋白表达呈负相关（r=-0.435,p=0.00002）,结直肠癌组织中的Evi-1与c-Jun蛋白表达呈负相关（r=-0.448,p=0.00001）;结直肠癌组织中Evi-1,JNK和c-Jun的表达与结直肠癌的分化程度,T分期,淋巴结转移,远处转移和TNM分期显著相关（P＜0.05）;与患者性别、患者年龄、和浸润深度无统计学意义。第二部分免疫组织化学结果显示TRAPPC9在结直肠癌组织与癌旁正常粘膜上皮组织中的阳性表达率分别为65%（52/80）和26.3%（21/80）,JNK在结直肠癌组织与癌旁正常组织中的阳性表达率分别为68.8%（55/80）和20%（16/80）;LC3在结直肠癌组织与癌旁正常粘膜上皮组织中的阳性表达率分别为61.3%（49/80）和23.8%（19/80）。结直肠癌组织中TRAPPC9与JNK表达呈正相关（r=0.693,p=0.0000）、TRAPPC9与LC3表达呈正相关（r=0.331,p=0,0031）、JNK与LC3表达呈正相关（r=0.405,p=0.0003）,分析TRAPPC9、JNK及LC3表达水平与临床病理参数的相关性,与分化程度、T分期、淋巴结转移、远处转移和TNM分期显著相关（P＜0.05）;与患者性别、患者年龄、和浸润深度无统计学意义。实时荧光定量PCR结果提示结肠癌细胞株HCT116中TRAPPC9 mRNA表达量高于正常结肠细胞株NCM460,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论:第一部分Evi-1在人结直肠癌组织中高表达,并与人结直肠癌的临床进展密切相关;Evi-1联合JNK和c-Jun可以作为评估结直肠癌预后的指标,靶向Evi-1可能是治疗结直肠癌的新方法。第二部分TRAPPC9在人结直肠癌中高表达,并与结直肠癌临床进展密切相关;TRAPPC9有望成为结直肠癌预测生物标志物以及联合治疗中的潜在靶标。

关键词：结直肠癌凋亡自噬 Evi-1 TRAPPC9

c-ski及MDS1／Evi-1与胃癌超声内镜分期及病理分级的相关性

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中华消化杂志 2012年第9期32卷 636-637页

作者：张锦华丁向萍庄剑波高武袁菊霞陈丽张富花缪连生赵钰张俐花甘肃省第二人民医院消化科兰州730000

据统计，我国胃癌发病率为29．9／10万，病死率为22．3／10万。我国甘肃省胃癌发病率为67／10万，病死率为96．6／10万。胃癌的发生是一个多步骤、多因素的进行性发展过程。早期胃癌可行内镜治疗或手术治疗。晚期胃癌患者生存期较短，... 详细信息

据统计，我国胃癌发病率为29．9／10万，病死率为22．3／10万。我国甘肃省胃癌发病率为67／10万，病死率为96．6／10万。胃癌的发生是一个多步骤、多因素的进行性发展过程。早期胃癌可行内镜治疗或手术治疗。晚期胃癌患者生存期较短，生存质量较低。基因诊断及靶向治疗已成为胃癌诊断及治疗的重要手段之一。

关键词：早期胃癌 Evi-1 病理分级内镜分期 MDS1 相关性超声癌发病率

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急性髓系白血病预后相关的分子标志

中国实验血液学杂志 2009年第4期17卷 1083-1087页

作者：孙超张苏江李建勇沈云峰南京医科大学附属无锡人民医院血液科江苏无锡214023 南京医科大学第一附属医院血液科江苏南京210029

众多的无法被细胞遗传学方法检测出来的基因异常(如基因突变及表达异常等)已越来越多的被发现。这使得对不同预后的急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)的分析进入分子水平。例如:存在转录因子C/EBPα(CCAAT enhancer binding f... 详细信息

众多的无法被细胞遗传学方法检测出来的基因异常(如基因突变及表达异常等)已越来越多的被发现。这使得对不同预后的急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)的分析进入分子水平。例如:存在转录因子C/EBPα(CCAAT enhancer binding factoralpha,CCAAT增强结合因子α亚单位)或核磷蛋白(nucleophosmin-1,NPM)基因突变的AML往往提示有较好的预后,而有着MLL基因(mixed-lineage leukemia,混合系白血病基因)部分串联重复突变(MLL-PTD),FLT3(FLM样酪氨酸激酶3)基因串联重复突变(FLT3-ITD)以及WT-1(Wilms′Tumor1,肾母细胞瘤1)基因突变的AML却提示不良预后。本文将探讨这些异常基因分子的特点,联系及其对AML预后的影响。

关键词：急性髓系白血病分子标志 Evi-1 ERG BAALC MNI WTI NPMI C—Kit MLL—PTD FLT3 CCAAT GATA-2

小鼠卵巢Evi-1表达水平与卵泡发育的相关性研究

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小鼠卵巢Evi-1表达水平与卵泡发育的相关性研究

作者：李扬山东师范大学

学位级别：硕士

Evi-1（the ecotropic viral integration site-1）基因作为一个逆转录病毒常见的插入位点,首先是在由逆转录病毒诱发的急性髓系白血病小鼠（AKXD）中被发现的。正常情况下,Evi-1基因在人的造血细胞上不表达,但在逆转录病毒诱导的伴染色... 详细信息

Evi-1（the ecotropic viral integration site-1）基因作为一个逆转录病毒常见的插入位点,首先是在由逆转录病毒诱发的急性髓系白血病小鼠（AKXD）中被发现的。正常情况下,Evi-1基因在人的造血细胞上不表达,但在逆转录病毒诱导的伴染色体3q26异常的人类髓系白血病细胞上过度表达,3q26染色体也是Evi-1定位的染色体。研究发现Evi-1是转化生长因子β（TGF-β）超家族信号通路中重要的调节因子,在TGF-β信号通路中发挥抑制作用。缺失Evi-1基因的小鼠将在胚胎发育的前几周因多种生理缺陷而死亡。多项研究证实Evi-1在小鼠的胚胎组织和成体组织中均有表达。但是Evi-1在卵巢中的研究甚少。TGF-β信号通路在卵泡发育过程中的作用以及Evi-1在其通路中的抑制作用使得我们推测Evi-1在卵泡的发育过程中可能发挥某些功能。因此,本实验的目的在于定位Evi-1在卵巢中的位置并进一步研究其在卵泡发育过程中的生物学功能。本实验结果显示: 1. Evi-1蛋白定位于卵母细胞质中,在颗粒细胞,膜细胞,以及卵母细胞核中均未见其表达。 2.早期卵泡发育组,Evi-1呈现出高表达的状态。在出生后1天和4天的小鼠卵巢中,Evi-1的表达量最高。随着卵泡的发育,Evi-1在卵母细胞质中的表达量逐渐降低,在出生10天和16天的卵巢中呈现出一个中间级的表达量水平。最后在23天的小鼠卵巢中表现出一个最低量的表达。由此可见,随着卵泡的发育,Evi-1的表达表现出一个逐级下降的趋势。 3.促性腺激素处理组,Evi-1依旧表达与卵母细胞质中,并且随着卵泡的发育其表达水平继续呈现下降的趋势。在大的有腔卵泡中,Evi-1的表达已经非常低,但是在一些小卵泡中表现出高表达状态,大小卵泡的对比明显。在PMSG24小时处理组中,大的有腔卵泡中可以看到其表达,但是在HCG4小时和HCG11小时的处理组中,大的有腔卵泡中Evi-1的表达已经非常非常弱了。最后,在黄体中未见Evi-1的表达。 4.发情周期检测组,Evi-1主要表达于小卵泡的卵母细胞质中。其中,发现Evi-1在间情期和发情期中的表达量要略高于发情前期和发情后期,提示Evi-1的表达可能受到激素的调节。 5.排卵相关基因的检测,real-time PCR检测Evi-1 mRNA水平和排卵相关基因（Ptgs2, Tnfaip6, Has2, Cd44, C1qbp）mRNA的水平。在HCG处理4小时后检测发现,Evi-1 mRNA的表达水平下调而上述排卵相关基因的水平却上调。总结:Evi-1在卵泡发育的早期过程中呈现高表达状态,随着卵泡的发育表达水平逐渐降低。这种特定的表达方式表明Evi-1分子在早期的卵泡发育过程中可能发挥一定的作用。

关键词： Evi-1 转化生长因子-β超家族卵母细胞卵泡发育发情周期排卵相关基因

三氧化二砷诱导K562细胞凋亡与其抑制Evi-1表达有关

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癌变．畸变．突变 2006年第4期18卷 323-326页

作者：章圣辉韩义香尹丽慧熊术道吴建波温州医学院第一附属医院医学科学研究所浙江温州32500

背景与目的:探讨三氧化二砷(As2O3)诱导K562细胞凋亡的分子机制。材料与方法:分别以1、2、4、8μmol/L的As2O3诱导K562细胞凋亡,每隔24h采用光镜和电镜观察细胞形态变化,MTT观察细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR检测evi-... 详细信息

背景与目的:探讨三氧化二砷(As2O3)诱导K562细胞凋亡的分子机制。材料与方法:分别以1、2、4、8μmol/L的As2O3诱导K562细胞凋亡,每隔24h采用光镜和电镜观察细胞形态变化,MTT观察细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR检测Evi-1mRNA表达率,ELISA检测细胞内JNK蛋白。结果:As2O3对K562细胞增殖具有明显的抑制作用,且呈剂量-时间关系;1、2、4、8μmol/L的As2O3可使K562细胞发生凋亡,在本实验时间段内随着作用时间的延长细胞凋亡逐渐升高,诱导细胞凋亡的最佳浓度为4μmol/L;在此过程中K562细胞的Evi-1基因表达下调,JNK蛋白表达增多,两者跟As2O3浓度存在剂量-时间关系。结论:As2O3通过抑制K562细胞Evi-1表达,从而激活JNK信号传导途径,促进细胞凋亡,这可能是As2O3促进K562细胞凋亡的机制之一。

关键词：三氧化二砷慢粒细胞系 K562 Evi-1 JNK

Evi-1反义寡核苷酸对人红白血病细胞系HEL的抑制作用

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中华血液学杂志 2003年第12期24卷 658-659页

作者：徐开林李振宇鹿群先杜冰潘秀英李慧韩俊领王立郝玉书徐州医学院附属医院血液科 221002 中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院

Evi-1（ecotropic virus integration site 1）定位于染色体3q26，为一原癌基因，与髓系恶性肿瘤的发生密切相关。Evi-1基因编码含两个锌指区的蛋白，能特异地结合基因启动子DNA序列，发挥转录调节作用。正常人骨髓和外周血细胞evi-mRN... 详细信息

Evi-1（ecotropic virus integration site 1）定位于染色体3q26，为一原癌基因，与髓系恶性肿瘤的发生密切相关。Evi-1基因编码含两个锌指区的蛋白，能特异地结合基因启动子DNA序列，发挥转录调节作用。正常人骨髓和外周血细胞evi-mRNA表达阴性。我们的初步研究结果表明，近50%的骨髓增生异常综合征（MDS）患者Evi-1基因表达阳性，Evi-1的表达水平与MDS向急性髓系白血病（AML）演变有关。为进一步探讨Evi-1在AML发生和发展中可能的作用，我们观察了Evi-1反义核苷酸（Evi-1-AS）对人红白血病细胞系HEL增殖的抑制作用。

关键词： Evi-1 反义寡核苷酸人红白血病细胞系 HEL 抑制作用急性髓系白血病

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MDS中Evi-1基因的表达

国际输血及血液学杂志 1995年第6期 380-380页

作者：杨娟

人类Evi-1基因定位在染色体3q25～q28,在正常造血细胞不表达。Evi-1基因转录激活发生在与3q26区域相关的染色体易位或倒位的AML中。体外试验证实,Evi-1基因高度表达可阻断细胞集落刺激因子,促进粒细胞分化。Evi-1基因产物具有锌指

关键词： MDS Evi-1 基因