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加味四君子汤对脾虚犬小肠紧密连接蛋白表达及erk/mapk通路的影响

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云南农业大学学报（自然科学版） 2019年第6期34卷 971-979页

作者：冯士彬李成贺濛初桂雪儿何嫣婷李玉王希春吴金节安徽农业大学动物科技学院

【目的】从erk/mapk通路的角度探讨加味四君子汤对脾虚犬小肠紧密连接蛋白表达的影响。【方法】将24只1岁龄健康比格犬随机均分为对照组、脾虚组、自然恢复组和加味四君子汤组。采用番泻叶药液复制脾虚模型犬,模型构建成功后,脾虚组犬... 详细信息

【目的】从erk/mapk通路的角度探讨加味四君子汤对脾虚犬小肠紧密连接蛋白表达的影响。【方法】将24只1岁龄健康比格犬随机均分为对照组、脾虚组、自然恢复组和加味四君子汤组。采用番泻叶药液复制脾虚模型犬,模型构建成功后,脾虚组犬处死采样,对照组和自然恢复组犬饲喂基础日粮,加味四君子汤组犬在基础日粮中添加2%(以生药计)加味四君子汤。试验期14 d。试验结束时各组试验犬解剖采集十二指肠、空肠和回肠,应用免疫组织化学(IHC)、荧光定量PCR、蛋白质印迹法(Western-blot,WB)检测相关指标。【结果】脾虚组试验犬小肠ZO-1和Occludin蛋白阳性表达水平,ZO-1和Occludin mRNA相对表达量,ZO-1、Occludin及erk/mapk相关通路蛋白表达量均显著低于对照组试验犬(Perk/mapk通路来实现。

关键词：脾虚加味四君子汤紧密连接蛋白 erk/mapk通路

南蛇藤提取物对erk/mapk通路介导的人胃癌MKN45细胞侵袭转移的研究

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中医学报 2021年第6期36卷 1241-1245页

作者：马霜向亮亮文佩宇刘延庆扬州大学医学院江苏扬州225009

目的:探索南蛇藤乙酸乙酯提取物(celastrus orbiculatus extract,COE)对人胃癌MKN45细胞增殖、侵袭与转移的影响及其可能的分子机制。方法:采用MTT法检测COE对人胃癌MKN45细胞生长增殖的影响;细胞划痕实验及体外侵袭实验检测COE对MKN45... 详细信息

目的:探索南蛇藤乙酸乙酯提取物(celastrus orbiculatus extract,COE)对人胃癌MKN45细胞增殖、侵袭与转移的影响及其可能的分子机制。方法:采用MTT法检测COE对人胃癌MKN45细胞生长增殖的影响;细胞划痕实验及体外侵袭实验检测COE对MKN45细胞侵袭和转移能力的影响;Western Blot法检测经COE作用后的MKN45细胞中金属基质蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMPs)家族蛋白MMP2、MMP9、上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)相关蛋白及erk/mapk信号通路相关蛋白的表达。结果:COE可明显抑制MKN45细胞增殖;划痕实验显示COE可降低细胞迁移运动能力;体外侵袭实验显示,经不同浓度(20 mg·L^(-1)、40 mg·L^(-1)、80 mg·L^(-1))COE处理过的MKN45细胞透膜数目显著下降;Western Blot结果显示,经不同浓度的COE处理后,细胞中MMP2、MMP9、N-cadherin、Vimention、Ras、Raf、MEK、MEK1/2蛋白表达下调,E-cadherin蛋白表达上调,且呈浓度依赖性。结论:南蛇藤提取物明显抑制人胃癌MKN45细胞的侵袭与转移,其作用机制可能与下调MMP2、MMP9蛋白水平,抑制erk/mapk信号通路有关。

关键词：南蛇藤提取物胃癌金属基质蛋白酶 erk/mapk通路侵袭转移

小白菊内酯通过erk/mapk通路诱导乳腺癌MCF-7细胞自噬的研究

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中国药师 2019年第7期22卷 1236-1239页

作者：苏洁之郑立平钟军华范平明陈峙霖海南医学院第一附属医院乳腺胸部肿瘤外科海口570102 海南医学院第一附属医院中医科海口570102

目的:探究小白菊内酯(PTL)诱导乳腺癌MCF-7细胞自噬的作用,并初步分析其分子机制。方法:分别用5,10,20μmol·L-1PTL处理MCF-7细胞,以等体积DMSO为空白对照,采用MTT法检测细胞增殖情况,采用AO染色法、MDC流式检测法检测细胞自噬情况;利... 详细信息

目的:探究小白菊内酯(PTL)诱导乳腺癌MCF-7细胞自噬的作用,并初步分析其分子机制。方法:分别用5,10,20μmol·L-1PTL处理MCF-7细胞,以等体积DMSO为空白对照,采用MTT法检测细胞增殖情况,采用AO染色法、MDC流式检测法检测细胞自噬情况;利用Western blot检测自噬体模型蛋白(LC3-Ⅱ)、erk1/2、p-erk1/2表达情况;以等体积PBS为空白对照,加入erk/mapk通路抑制剂PD98059(50μmol·L-1)预处理MCF-7细胞0.5 h,再加入10μmol·L-1PTL处理24 h,利用MTT法检测细胞增殖抑制率。结果:与对照组比较,5,10,20μmol·L-1PTL组MCF-7细胞增殖抑制率显著升高(P erk水平显著降低(Perk/mapk通路抑制剂PD98059处理后,自噬细胞率显著降低(Perk/mapk信号转导途径激活,促进MCF-7乳腺癌细胞自噬发生。

关键词：小白菊内酯 erk/mapk通路乳腺癌 MCF-7细胞自噬

纹状体D2型中等多棘神经元erk信号通路：运动改善帕金森病的重要途径

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生物化学与生物物理进展 2024年

作者：高博赖一宁葛一彤陈巍河北师范大学体育学院河北省人体运动生物信息测评重点实验室

帕金森病（PD）是一种神经退行性疾病，其核心特征是黑质致密部多巴胺能神经元的退行性凋亡，导致纹状体多巴胺（DA）水平的持续下降，主要表现为静止性震颤、肌强直和运动迟缓等运动功能障碍。纹状体作为皮层下调控躯体运动的重要中枢... 详细信息

帕金森病（PD）是一种神经退行性疾病，其核心特征是黑质致密部多巴胺能神经元的退行性凋亡，导致纹状体多巴胺（DA）水平的持续下降，主要表现为静止性震颤、肌强直和运动迟缓等运动功能障碍。纹状体作为皮层下调控躯体运动的重要中枢，其功能受多条信号通路的精细调控。中等多棘神经元（MSNs）是纹状体内的主要神经元，其中表达多巴胺2型受体的MSNs（D2-MSNs）的功能异常与PD的运动障碍密切相关。PD患者中，纹状体细胞外信号调节激酶/丝裂原活化蛋白激酶（erk/mapk）信号通路活性发生改变，进而影响D2-MSNs的功能活动，引发基底神经节运动功能调节障碍。运动干预作为PD的潜在治疗策略，已被证明可以通过抑制erk/mapk信号通路调控D2-MSNs功能活动。然而，erk/mapk信号通路在D2-MSNs运动依赖可塑性中的作用，以及对PD运动功能障碍改善的具体调控机制仍不明确。本文综述了纹状体erk/mapk信号通路在PD运动防治中的作用及其生物学机制，旨在为PD治疗新靶点的发现提供科学依据。

关键词：纹状体运动控制 erk/mapk通路帕金森病

白藜芦醇对银屑病细胞生长的影响及其作用机制的探讨

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中国现代医学杂志 2022年第9期32卷 41-48页

作者：韩乌日罕郭果香丽丽闫静茹张婷郝玉琴包头市第四医院皮肤科内蒙古包头014000 内蒙古医科大学第三附属医院皮肤科内蒙古包头014000 北京大学第三医院皮肤科北京100191

目的探讨白藜芦醇对银屑病细胞生长的影响及其作用机制。方法不同浓度的角质细胞生长因子(KGF)诱导人永生角质形成细胞(HaCaT),显微镜观察及四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测HaCaT细胞增殖。选出最佳浓度作用HaCaT细胞复制银屑病模型,采... 详细信息

目的探讨白藜芦醇对银屑病细胞生长的影响及其作用机制。方法不同浓度的角质细胞生长因子(KGF)诱导人永生角质形成细胞(HaCaT),显微镜观察及四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测HaCaT细胞增殖。选出最佳浓度作用HaCaT细胞复制银屑病模型,采用不同浓度白藜芦醇作用HaCaT细胞,计算半抑制浓度(IC50),根据IC50选出后续实验白藜芦醇的浓度;将银屑病模型细胞分为阴性对照组(30μg/L生理盐水),2.5μmol/L、5.0μmol/L、7.5μmol/L白藜芦醇组,阳性对照组(5.0μg/mL维A酸)及空白对照组(未加任何药物),MTT法检测各组银屑病模型细胞的增殖,流式细胞术检测各组银屑病模型细胞的凋亡率,Western blotting检测各组银屑病模型细胞Caspase-3、p-erk1/2、p-P38蛋白的表达。结果不同KGF浓度组HaCaT细胞0 h、12 h、24 h、48 h的OD值比较,采用重复测量设计的方差分析,结果:①不同时间点的OD值有差异(Perk1/2、p-P38蛋白相对表达量降低(Perk/mapk和/或P38/mapk通路发挥作用进而抑制银屑病细胞增殖并促进其凋亡,具体作用机制还有待更深入研究。

关键词：银屑病白藜芦醇 erk/mapk通路 P38/mapk通路

门冬胰岛素和赖脯胰岛素对人乳腺癌细胞生长的影响及机制

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西安交通大学学报（医学版） 2013年第3期34卷 410-412页

作者：张晓娟赵琳汤喻王守俊郑州大学第一附属医院内分泌科河南郑州450052

目的探讨门冬胰岛素和赖脯胰岛素对人乳腺癌MCF-7细胞生长的影响及其与PI3K/Akt、erk/mapk信号通路的关系。方法使用不同浓度的门冬胰岛素和赖脯胰岛素及联合丝裂原活化蛋白激酶激酶1(mapkK1)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)抑制剂以不同的... 详细信息

目的探讨门冬胰岛素和赖脯胰岛素对人乳腺癌MCF-7细胞生长的影响及其与PI3K/Akt、erk/mapk信号通路的关系。方法使用不同浓度的门冬胰岛素和赖脯胰岛素及联合丝裂原活化蛋白激酶激酶1(mapkK1)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)抑制剂以不同的时间刺激人乳腺癌MCF-7细胞,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期的分布,Western blot检测细胞外信号调节蛋白激酶1/2(erk1/2)和蛋白激酶B(Akt)磷酸化程度。结果 0.1、1、10、100IU/L门冬胰岛素和赖脯胰岛素在刺激MCF-7细胞12、24、36、48h后,均可促进细胞增殖,比较各浓度间增殖效应的差异有统计学意义(Perk1/2磷酸化程度较对照组均升高,差异有统计学意义(PmapkK1抑制剂PD98059及PI3K抑制剂LY294002可抑制MCF-7细胞增殖,但并非完全抑制。结论门冬胰岛素和赖脯胰岛素对人乳腺癌MCF-7细胞增殖具有轻度促进作用,且呈时间和浓度依赖关系,其可能与erk/mapk和PI3K/Akt信号通路的激活有关。

关键词：乳腺癌胰岛素 MCF-7细胞 erk/mapk通路 PI3K/Akt通路门冬胰岛素赖脯胰岛素

整合素β1介导的erk/mapk通道在人晶状体上皮细胞转分化中的作用

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眼科新进展 2012年第4期32卷 318-321页

作者：朱艳朱玉广张立华钟莹莹杜孝楠张荣王杰潍坊医学院附属医院眼科中心山东省潍坊市261031

目的研究转化生长因子-β2(transforming growth factor β2,TGF-β2)对培养的人氉晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLEC)整合素β1、磷酸化erk(perk)及F-actin表达的影响,探讨整合素β1介导的erk/mapk通路在HLEC转分化中的作用。方法体外培养的HLEC,加入不同浓度(0ng·L-1和10ng·L-1、33ng·L-1、100ng·L-1、333ng·L-1、1000ng·L-1)的TGF-β2处理不同时间(12h、24h、48h、72h),采用MTT法测定TGF-β2对HLEC增殖的影响,并确定最佳干涉浓度和时间用于后续实验。实验分2组,实验组用含最佳干涉浓度TGF-β2的培养基培养HLEC,对照组使用无血清培养基培养,于最佳干涉时间对2组细胞行免疫细胞化学染色检测HLEC中整合素β1、perk及F-actin的表达,RT-PCR检测整合素β1、perk及F-actin mRNA的表达。结果 TGF-β2抑制HLEC的增殖,呈浓度和时间依赖性,TGF-β2的最佳干涉终浓度为100ng·L-1,作用48h后达到最大抑制效果。TGF-β2增加HLEC整合素β1、perk及F-actin的表达,相对表达量分别为0.116±0.031、0.123±0.028、0.140±0.033,均较对照组(0.045±0.011、0.025±0.009、0.079±0.024)明显升高(均为Perk mRNA及F-actin mRNA的表达,相对表达量分别为0.658±0.146、0.582±0.171、0.760±0.193,较对照组(0.246±0.051、0.338±0.092、0.138±0.027)明显升高(均为Perk及F-actin的表达,整合素β1介导的erk/mapk信号通路可能参与了HLEC转分化过程,导致后囊膜混浊。

关键词：转化生长因子-β2 整合素β1 erk/mapk通路 F-actin 晶状体上皮细胞

TGF-β1诱导RMMCs脑膜纤维化信号通路的研究

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TGF-β1诱导RMMCs脑膜纤维化信号通路的研究

作者：岳学静郑州大学

学位级别：硕士

背景:脑积水(external hydrocephalus,EH)是临床常见颅脑疾病,严重影响到患者生活质量,成为沉重的家庭与社会负担。脑积水一旦形成,致残率很高。目前脑积水的临床治疗手段大多仅能缓解症状,并不能彻底治愈,因此,脑积水的治疗是神经病学... 详细信息

背景:脑积水(external hydrocephalus,EH)是临床常见颅脑疾病,严重影响到患者生活质量,成为沉重的家庭与社会负担。脑积水一旦形成,致残率很高。目前脑积水的临床治疗手段大多仅能缓解症状,并不能彻底治愈,因此,脑积水的治疗是神经病学科的一大难题。各种类型脑积水的共同原因是蛛网膜下腔纤维增生,粘连,软脑膜纤维化是其主要病理改变,主要表现为脑膜间皮细胞(meningeal mesothelial cells,MMCs)大量增殖以及细胞外基质的堆积。原代脑膜间皮细胞分离困难,体外培养要求条件较高,传代难度大,传多代后细胞贴壁率大幅下降,这些缺陷给体外研究带来困难,成为阻碍脑膜间皮细胞相关研究的重要技术难题。因此,体外培养脑膜间皮细胞并建立永生化细胞系可为脑膜相关疾病的研究提供方便可靠的细胞模型,对于了解脑膜间皮细胞在脑膜纤维化中的作用和功能意义重大。同时,有关脑膜纤维化的研究大多局限于影像学和组织学层面,对其分子水平的发病机制研究甚少。引起器官纤维化的细胞因子众多,近年来研究较广泛、深入的是TGF-β1(transforming growth factor-beta 1,转化生长因子-β1)。有研究结果证实,TGF-β1可引起脑膜间皮细胞CTGF(connective growth factor,结缔组织生长因子)的m RNA和蛋白表达上调,促使脑膜间皮细胞增殖并合成多种胶原等细胞外基质,导致脑膜纤维化的形成,因此阻断TGF-β1通路对抑制脑膜纤维化具有重要意义。但因TGF-β1还具有免疫调节和抑制炎性反应等重要生理功能,使直接阻断TGF-β1的治疗缺乏临床可行性,故应找寻TGF-β1下游新的治疗靶点以单纯阻断TGF-β1促纤维化的过程。p38 mapk(p38 mitogen-activated protein kinase,p38丝裂原活化蛋白激酶)和erk/mapk通路(mitogen-activated protein kinases,mapks,丝裂原活化蛋白激酶;extracellular signal-regulated kinase,erk,细胞外信号调节激酶)是信号转导的两条重要通路,有学者证明在多种细胞,如肺成纤维细胞,肾系膜细胞及肾成纤维细胞中p38信号通路和erk/mapk都可介导TGF-β1诱发的纤维化,但是两者是否参与TGF-β1对脑膜间皮细胞纤维化的诱导并不清楚。本课题尝试建立大鼠脑膜间皮细胞永生化细胞系并以外源TGF-β1为刺激因子建立体外脑膜纤维化的细胞模型,从基因转录和蛋白合成两个方面探讨p38mapk和erk/mapk信号通路在TGF-β1诱导脑膜间皮细胞纤维化的具体作用,试图为脑积水的防治寻到有效的干预位点。目的:1.建立大鼠脑膜间皮细胞永生化细胞系。2.以TGF-β1为刺激因子建立体外脑膜纤维化的细胞模型,观察RMMCs中有无参与组织纤维化的p38 mapk及erk/mapk的表达,并应用p38mapk特异性抑制剂SB203580、erk/mapk的抑制剂U0126处理细胞,观察CTGF的表达,探讨脑膜纤维化的发生机制,为今后防治脑膜纤维化寻求有效的靶点。方法:1.大鼠原代脑膜间皮细胞的分离和培养:用胰酶消化组织块法收集大鼠原代脑膜间皮细胞;2.构建表达SV40LT的慢病毒载体并转染大鼠脑膜间皮细胞;3.应用扫描电镜、细胞免疫荧光化学、RT-PCR等技术从细胞形态、特异性标志物、目的基因的表达等方面对野生及转染SV40LT后的大鼠脑膜间皮细胞进行鉴定。4.用不同浓度的TGF-β1分别孵育培养RMMCs 24 h,采用q PCR测定CTGF的相对表达量,采用Western blotting测定p-p38mapk、p-erk1/2的信号强度;预先用不同浓度的SB203580或U0126处理RMMCs,观察TGF-β1诱导的CTGF表达是否受影响。采用q PCR测定CTGF m RNA的相对表达量,采用Western blotting测定CTGF蛋白质表达水平。结果:1.体外成功培养大鼠原代脑膜间皮细胞。分离培养的RMMCs在倒置显微镜下观察:细胞为多边形,汇合时呈铺路石样排列;扫描电镜下可见细胞表面有大量密集突起的绒毛;免疫细胞化学鉴定结果显示RMMCs抗波形蛋白抗原阳性,抗细胞角蛋白抗原阳性,抗第VIII因子相关抗原阴性,流式细胞术检测培养细胞的纯度达90%以上。2.构建含SV40LT基因的慢病毒表达载体,并成功转染RMMCs。转染后挑选单克隆RMMCs鉴定,扫描电镜下可见细胞表面有大量密集突起的绒毛;免疫细胞化学鉴定结果显示抗波形蛋白抗原阳性,抗细胞角蛋白抗原阳性,抗第VIII因子相关抗原阴性;RT-PCR鉴定目的基因SV40LT成功整合入RMMCs基因组。***-β1

关键词：脑膜纤维化脑膜间皮细胞永生化转化生长因子-β1 结缔组织生长因子 p38丝裂原活化蛋白激酶 erk/mapk通路

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Surfactin体外抗肿瘤机理研究

Surfactin体外抗肿瘤机理研究

作者：赵思思天津科技大学

学位级别：硕士

实验采用的枯草芽孢杆菌Bacillus natto TK-1发酵产生的脂肽——surfactin,被广泛认为是一种安全高效的生物表面活性剂。它具有显著的抗菌,抗肿瘤,抗病毒及溶解血栓等功能,其中关于抗肿瘤和抗病毒功能的研究较少。课题组经过前期实验发... 详细信息

实验采用的枯草芽孢杆菌Bacillus natto TK-1发酵产生的脂肽——surfactin,被广泛认为是一种安全高效的生物表面活性剂。它具有显著的抗菌,抗肿瘤,抗病毒及溶解血栓等功能,其中关于抗肿瘤和抗病毒功能的研究较少。课题组经过前期实验发现,surfactin能够通过线粒体途径诱导MCF-7乳腺癌细胞发生凋亡。线粒体通透性转换孔(MPTP,简称PT孔)作为细胞的“生命闸门”,在细胞凋亡过程中发挥着至关重要的作用。本文主要探讨PT孔在surfactin诱导的MCF-7乳腺癌细胞凋亡过程中的作用机理,以及erk/mapk通路与细胞增殖和凋亡的关系。 surfactin诱导MCF-7乳腺癌细胞的PT孔开放与细胞凋亡的关系及作用机理,以及,erk/mapk通路对于肿瘤细胞生长增殖的影响。本论文以体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞株为研究对象,探讨surfactin对肿瘤细胞增殖和凋亡的作用,并深入探讨相关的作用机理。体外增长抑制实验表明,surfactin能显著抑制MCF-7乳腺癌细胞的增殖,这种抑制作用呈现出浓度和时间依赖关系,作用24h的IC50是40.2μg/mL,作用48h的IC50是32.3μg/mL。HE染色法和AO/EB、Hoechst33342/PI荧光双染发现,surfactin诱导MCF-7细胞发生典型的凋亡形态学改变。实验采用激光共聚焦显微镜(LSCM)观察发现,经surfactin作用后,MCF-7细胞内的活性氧(ROS)水平和胞内游离钙离子(Ca2+)水平显著升高,这一趋势分别可被ROS抑制剂NAC和胞内Ca2+螯合齐BAPTA-AM所抑制,且Ca2+水平的升高是由ROS的大量生成所致。同时发现,ROS的升高将会导致PT孔的开放,PT孔专一性抑制剂CsA可以抑制其开放,PT孔的开放直接引起线粒体跨膜电位(△Ψm)的显著降低,这一趋势可被NAC、BAPTA-AM和CsA所抑制。通过免疫印迹(Western blotting)实验发现,PT孔开放后,线粒体内细胞色素C(Cyt C)减少,而胞浆内的Cyt C则逐渐增多,胞内caspase-9蛋白的表达量也随之增加。此外,p-erk蛋白表达量降低,Bcl-2蛋白表达量也随之下调。综上所述,surfactin具有诱导MCF-7肿瘤细胞发生凋亡的作用,其凋亡机制可能与线粒体途径及PT孔的开放有关。另外,erk/mapk通路参与了surfactin对MCF-7细胞的增殖抑制作用。

关键词： Surfactin PT孔 Ca2+ ROS erk/mapk通路