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SD大鼠孕期及哺乳期肝脏hepcidin的表达变化及调节机制的研究

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SD大鼠孕期及哺乳期肝脏hepcidin的表达变化及调节机制的研究

作者：王惠杰河北师范大学

学位级别：硕士

铁在血氧转运及维持整个机体功能中起重要作用,它广泛参与机体的代谢过程,如电子传递、氧的运输和ATP的合成等。肝脏和脾脏是动物体内重要的储铁器官,在铁代谢中扮演十分重要的角色。随着研究的深入,肝脏内与铁转运相关的分子陆续被发现... 详细信息

铁在血氧转运及维持整个机体功能中起重要作用,它广泛参与机体的代谢过程,如电子传递、氧的运输和ATP的合成等。肝脏和脾脏是动物体内重要的储铁器官,在铁代谢中扮演十分重要的角色。随着研究的深入,肝脏内与铁转运相关的分子陆续被发现,如与铁摄取有关的转铁蛋白受体1、2、二价金属转运蛋白1;与铁释放有关的膜铁转运蛋白1、铜蓝蛋白、膜铁转运蛋白辅助蛋白,以及与铁储存相关的铁蛋白等。怀孕与哺乳是女性生命中重要的生理过程,其对整个机体铁代谢影响,以往的报道多集中在此过程中血常规和血清铁蛋白的变化规律的检测,而对此过程中铁代谢变化的调控机制缺乏研究。随着机体内重要的铁调节蛋白铁调素hepeidin被发现,以及hepcidin对机体铁代谢调控机制研究的不断深入,为我们认识孕期、哺乳期铁代谢变化的调控机制奠定了基础。本研究利用不同孕龄及哺乳期SD雌性大鼠,随机分为：未怀孕且年龄相同的雌鼠对照组(no pregnancy, NP),妊娠9天雌鼠组(9 days pregnancy,9dP),妊娠18天雌鼠(18 dayspregnancy,18dP),哺乳1天组(1 day lactation,1 dL),哺乳7天组(7 days lactation,7dL),哺乳14天组(14 days lactation,14dL),哺乳21天组(21 days lactation,21dL)。测定其血清铁水平,肝脏非血红素铁的含量。通过RT-PCR和Western-blot检测大鼠肝脏hepcidin mRNA、epor mRNA、BMP6 mRNA表达变化和肝、脾铁转运相关蛋白TfR2、P-ErK、TfR1、Ferritin-L、DMT1、FPN1、Cp表达。结果显示： 1血清铁与转铁蛋白饱和度测定结果显示,9dP组、18dP组、1dL组、7dL组、14dL组、21dL组较NP组相比血清铁水平与转铁蛋白饱和度均有不同程度上升。 2与NP组相比,9dP组中肝脏非血红素铁水平有显著上升;18dP组有极显著下降,1dL组、7dL组、14dL组、21dL组较NP组相比均有显著下降,随着哺乳期延长,1dL组、7dL组、14dL组、21dL组肝脏非血红素铁水平又开始缓慢上升。 3 RT-PCR检测肝脏hepcidin mRNA表达的结果显示,与NP组相比,9dP组hepcidin mRNA表达水平明显升高,18dP组、1dP组、7dP组均明显下降。18dP组、1dL组、7dL组中肝脏epor mRNA较NP组均明显增加。western blot检测TfR2与P-ErK变化结果显示,与NP组相比,孕期TfR2呈现先增加后减少的趋势,1dL组、7dL组TfR2表达减少,而P-ErK在孕期各组呈现先减少后增加的趋势,在哺乳期7dL组表达减少。 4 Western blot检测肝脾铁转运相关蛋白表达变化结果显示,与NP组相比,9dP组肝、脾中Ferritin-L表达升高,而18dP组、哺乳期各组均明显减少,21dL组肝脏Ferritin-L水平恢复正常。9dP组肝、脾中TfR1表达均减少,而18dP组、哺乳期各组中表达均升高,7dP组表达量最高。各组肝、脾中Cp的表达均明显升高。孕期大鼠脾脏中DMT1(+IRE)表达呈升高趋势,哺乳期各组间无明显变化,孕期肝脏DMT1(+IRE)表达无明显变化,哺乳期各组DMT1(+IRE)表达呈升高趋势。FPN1肝、脾中各组表达均有不同程度升高。结论： 1母体内铁在怀孕9天时升高,孕后期及哺乳期机体铁持续降低。 2孕期及哺乳前期hepcidin的下调与EPO有关,TfR2参与孕期及哺乳期hepcidin的下调过程,首次提出孕期及哺乳期hepciodin调节机制可能不同。 3 Cp可能参与孕期及哺乳期肝、脾中铁的释放,在孕期及哺乳期肝、脾的铁摄取都主要通过经典的Tf-TfR方式。哺乳期DMT1(+IRE)在肝脏铁摄取中发挥一定作用。本实验首次从分子水平研究了怀孕与哺乳对机体铁代谢的影响,提出了孕期及哺乳期不同的hepcidin调节机制,及铁的摄取与释放机制。这些研究为今后更全面的了解在孕期及哺乳期的发生铁代谢的异常提供了实验基础和理论依据。

关键词：大鼠孕期哺乳期 Hepcidin epor DMT1 FPN1 TfR

Akt/eNOS信号通路在EPO促进慢性缺氧心肌细胞线粒体生物合成中作用的实验研究

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Akt/eNOS信号通路在EPO促进慢性缺氧心肌细胞线粒体生物合成中作...

作者：周胜凯第三军医大学

学位级别：硕士

背景：紫绀型先天性心脏病仍旧严重威胁着人类的生命健康。慢性缺氧是这类病人的共同病理生理过程，但心肌细胞的慢性缺氧机制尚不完全清楚。在缺氧时EPO受HIF-1α的调节分泌增加，以往认为EPO水平升高，主要是通过其造血作用进而增加... 详细信息

背景：紫绀型先天性心脏病仍旧严重威胁着人类的生命健康。慢性缺氧是这类病人的共同病理生理过程，但心肌细胞的慢性缺氧机制尚不完全清楚。在缺氧时EPO受HIF-1α的调节分泌增加，以往认为EPO水平升高，主要是通过其造血作用进而增加循环血液中成熟红细胞数量和血红蛋白含量，提高血液携氧能力应对缺氧。但近期发现，epor能够表达于包括心肌在内的多种非造血组织，EPO可以通过作用于心肌epor产生不依赖造血的直接效应，显著减轻有害应激如缺血、缺氧所导致的心肌损伤，但其机制尚不清楚。Akt是EPO/epor信号通路下游重要的信号分子之一，而eNOS(endothelial nitric oxide synthase，内皮型一氧化氮合酶)作为Akt的下游信号，可以调节NO(nitric oxide，一氧化氮)的合成进而调节线粒体生物合成。我们的前期研究发现紫绀型先心病患者心肌epor蛋白较非紫绀型先心病患者表达增加，提示慢性缺氧心肌EPO/epor信号增强。因此，我们推测：慢性缺氧条件下，EPO与epor结合后，可能通过激活其下游Akt/eNOS通路参与了线粒体生物合成作用，从而参与了心肌慢性缺氧适应。目的：观察EPO在慢性缺氧条件下对心肌线粒体生物合成的影响及其可能的机制。方法： 1．观察EPO对慢性缺氧心肌细胞线粒体生物合成的影响将H9c2细胞株置入缺氧培养箱(94%N2，5%CO2，1%O2)，培养1周后建立慢性缺氧模型;采用不同浓度的rhEPO(recombinant human erythropoietin;重组人促红细胞生成素)对缺氧培养H9c2细胞株进行干预处理，未经rhEPO处理的慢性缺氧细胞组为空白对照;用荧光探针标记线粒体，观察线粒体数目的变化;RT-PCR技术检测线粒体DNA的相对拷贝数变化;Western blot技术检测Akt、eNOS及其磷酸化蛋白水平的变化。 2．观察Akt/eNOS信号通路的介导作用Wortmannin为Akt磷酸化的特异性阻断剂;向慢性缺氧培养的心肌细胞细胞株内分别加入20U/mL rhEPO，20U/mLrhEPO+Wortmannin100nmol/mL，检测Akt、P-Akt、eNOS、P-eNOS蛋白水平的变化及线粒体拷贝数的变化;构建shRNA质粒，将带有荧光蛋白标记的质粒转染至慢性缺氧心肌细胞株;一组质粒中带有eNOS基因干扰片段，另一组空载体质粒设为阴性对照;将两组细胞株经rhEPO20U/mL处理后，检测eNOS、P-eNOS蛋白表达水平并观察线粒体拷贝数的变化。结果： ***干预后慢性缺氧心肌细胞株线粒体数目及拷贝数增加(P0.05);2．特异性阻断Akt磷酸化后，Akt、eNOS磷酸化水平较未阻断组均减弱(P0.05);线粒体拷贝数较未阻断组亦减少(P<0.05);shRNA干扰eNOS表达后，eNOS及P-eNOS的蛋白表达水平减弱(P<0.05)，线粒体的拷贝数亦减少(P<0.05)。结论：慢性缺氧条件下，EPO介导Akt/eNOS信号通路参与了心肌细胞线粒体生物合成作用。

关键词： EPO epor Akt eNOS 线粒体慢性缺氧

肝细胞肝癌组织中促红细胞生成素受体的表达及其与微血管密度的相关性研究

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肝细胞肝癌组织中促红细胞生成素受体的表达及其与微血管密度的相...

作者：黄文泉南昌大学

学位级别：硕士

目的:探讨肝细胞肝癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)微血管密度(Microvessel Density,MVD)与促红细胞生成素受体(epor)表达之间的关系,以及此二者与临床病理学特征之间的关系。方法:应用免疫组织化学法检测46例HCC、20例肝硬化和10例... 详细信息

目的:探讨肝细胞肝癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)微血管密度(Microvessel Density,MVD)与促红细胞生成素受体(epor)表达之间的关系,以及此二者与临床病理学特征之间的关系。方法:应用免疫组织化学法检测46例HCC、20例肝硬化和10例正常肝组织内epor的表达情况,并以CD34单抗体标记血管内皮细胞,计算MVD,观察与HCC病理学特点及微血管密度(micmvessel density,MVD)之间的关系结果:epor及MVD值在HCC中的阳性表达率和强度显著高于肝硬化和正常肝脏组织( Pepor在有包膜侵犯组、病理组织学分化为低分化组及有转移HCC中的阳性表达率及强度明显高于无包膜侵犯组(x2=6.40,P5 cm、有包膜侵犯、有转移、病理组织学分化为低分化组的MVD值高于肝癌≤5 cm(t=2.82,Pepor阳性表达HCC中的MVD值明显高于epor阴性表达HCC中的MVD值(t=5.43,Pepor在HCC组织中的表达上调与其血管生成和浸润转移有关

关键词：癌,肝细胞转移 epor 微血管密度

不同妊娠时期人类胎盘EPO和EPO-R在胎盘绒毛中表达的研究

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不同妊娠时期人类胎盘EPO和EPO-R在胎盘绒毛中表达的研究

作者：张蕾青岛大学

学位级别：硕士

目的探讨促红细胞生成素(EPO)和促红细胞生成素受体(epor)在胎盘的表达情况及不同孕周的变化趋势。方法胎盘组织的检测用免疫组化法和蛋白免疫印迹法(Western blotting),以三塔公司提供的阳性对照片为阳性对照,以缓冲液代替一抗作为阴... 详细信息

目的探讨促红细胞生成素(EPO)和促红细胞生成素受体(epor)在胎盘的表达情况及不同孕周的变化趋势。方法胎盘组织的检测用免疫组化法和蛋白免疫印迹法(Western blotting),以三塔公司提供的阳性对照片为阳性对照,以缓冲液代替一抗作为阴性对照。收集2010年6月到2011年10月期间在青岛市立医院产科住院的正常妊娠孕妇,孕龄在12周-40周的胎盘共60例进行分组检测。分为三组：流产组(12-27周),早产组(28-36)周,足月产组(37-40)周,每组各20例,均为经阴道分娩胎盘。结果(1)免疫组化法结果显示三组胎盘绒毛的合体滋养层细胞、细胞滋养层细胞、毛细血管内皮细胞的胞浆均成阳性染色,位于绒毛最外层的合体滋养层细胞和内层的细胞滋养层细胞阳性染色最强,血管内皮细胞次之,绒毛间质无阳性染色。且随着妊娠的进展,染色逐渐增强了。(2) Western blotting(蛋白免疫印迹法)检测EPO及epor在妊娠早、中、晚孕期胎盘组织均有免疫反应性,且随着妊娠的进展,免疫反应逐渐增强。定量分析显示在早孕组、中孕组、晚孕组各组胎盘绒毛的表达,差异均有统计学意义(pepor在胎盘绒毛的表达与妊娠时间成正相关关系。结论(1)不同孕龄胎盘均有EPO、epor表达,推测胎盘可能是妊娠期EPO生成的新位点。(2)EPO与epor二者在胎盘滋养细胞的表达随孕龄增加有增强的趋势,推测与妊娠的维持及胎儿的生长发育有一定关系。

关键词： EPO epor 胎盘妊娠

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细胞因子受体-嵌合抗体真核表达载体的构建

四川生理科学杂志 2008年第3期30卷 97-99页

作者：吴静张平周昌华赵宗容魏大鹏章崇杰四川大学华西基础与法医学院免疫学教研室成都市血液中心成都610041

目的:构建细胞因子受体-抗人AFP嵌合抗体基因真核表达载体。方法:用RT-PCR方法从人胚肝组织中扩增epor胞外区基因及gp130跨膜区基因,并用限制性酶切连接方法拼接。用PCR方法从抗人AFP单链抗体表达载体中扩增VL、VH基因,分别与人kappa轻... 详细信息

目的:构建细胞因子受体-抗人AFP嵌合抗体基因真核表达载体。方法:用RT-PCR方法从人胚肝组织中扩增epor胞外区基因及gp130跨膜区基因,并用限制性酶切连接方法拼接。用PCR方法从抗人AFP单链抗体表达载体中扩增VL、VH基因,分别与人kappa轻链和人gammal重链恒定区基因重组,获得人鼠嵌合轻链和重链,再将epor-gp130与嵌合重链连接,最后将嵌合轻链和H-epor-gp130分别连接到质粒pVITRO上,构建pVITRO-E-g-Ig载体。结果:获得epor胞外区基因750bp,gp130跨膜区基因900bp。重组真核表达载体经限制性酶切鉴定示epor、gp130基因、嵌合重链基因和嵌合轻链基因正确连接到载体pVITRO。结论:成功构建细胞因子受体-抗人AFP嵌合抗体基因表达载体。

关键词： epor gp130 嵌合抗体克隆

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促红细胞生成素与脑保护

国外医学（神经病学．神经外科学分册） 2004年第5期31卷 494-497页

作者：侯红梅董文斌泸州医学院附属医院新生儿科 646000

促红细胞生成素(EPO)是一种多功能细胞因子。各种脑细胞有EPO及EPO受体(epor)的表达,是一种新的神经保护因子,通过神经营养、抗凋亡、抗兴奋性氨基酸毒性、内源性保护、抗炎症反应等作用实现对脑损伤的保护。其胞内机制涉及到激活JAK-S... 详细信息

促红细胞生成素(EPO)是一种多功能细胞因子。各种脑细胞有EPO及EPO受体(epor)的表达,是一种新的神经保护因子,通过神经营养、抗凋亡、抗兴奋性氨基酸毒性、内源性保护、抗炎症反应等作用实现对脑损伤的保护。其胞内机制涉及到激活JAK-STAT和磷酸肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI-3K);激活核因子κB(Nuclear Factor,NF-κB);抑制一氧化氮(Nitric oxide,NO)毒性等信号途径;EPO在临床上具有广阔的应用前景。

关键词：脑保护促红细胞生成素激活核因子KB 抗炎症反应 epor JAK-STAT 激酶信号途径磷酸肌醇

促红细胞生成素受体在骨髓增生异常综合征中的表达及意义

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中国药物与临床 2008年第2期8卷 129-131页

作者：闫文林杨林花刘秀娥张睿娟李亚妮张岚乔娜山西医科大学第二医院血液科太原030001

促红细胞生成素（erythropoietin，EPO）与红细胞表面EPO受体（epor）结合后，epor形成二聚体，再通过JAK／STAT和RAS／MAP激酶等信号传导途径调节红系的增生和分化。E—POR不仅存在于幼红细胞，在其他细胞中也发现了epor。近年来对急... 详细信息

促红细胞生成素（erythropoietin，EPO）与红细胞表面EPO受体（epor）结合后，epor形成二聚体，再通过JAK／STAT和RAS／MAP激酶等信号传导途径调节红系的增生和分化。E—POR不仅存在于幼红细胞，在其他细胞中也发现了epor。近年来对急性白血病及实体肿瘤患者中epor表达的研究较多，而对红细胞生成索受体在骨髓增生异常综合征（MDS）中的表达及其意义的研究较为少见。

关键词：促红细胞生成素受体骨髓增生异常综合征 JAK/STAT epor 信号传导途径 EPO受体红细胞表面 MAP激酶

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红细胞生成素受体和信号传递

日本医学介绍 2000年第3期21卷 137-138页

作者：樊华翟明中国医科大学第一临床学院血液科

肝细胞肝癌组织中促红细胞生成素受体的表达及其与微血管密度的相关性研究

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江西医药 2009年第3期44卷 211-214页

作者：黄文泉万仁华李学明南昌大学医学院第一附属医院普外科南昌330006

目的探讨肝细胞肝癌(HCC)微血管密度(MVD)与促红细胞生成素受体(epor)表达之间的关系,以及此二者与临床病理学特征之间的关系。方法应用免疫组织化学法检测46例HCC、20例肝硬化和10例正常肝组织内epor的表达情况,观察与HCC病理学特点及... 详细信息

目的探讨肝细胞肝癌(HCC)微血管密度(MVD)与促红细胞生成素受体(epor)表达之间的关系,以及此二者与临床病理学特征之间的关系。方法应用免疫组织化学法检测46例HCC、20例肝硬化和10例正常肝组织内epor的表达情况,观察与HCC病理学特点及MVD之间的关系。结果(1)epor及MVD值在HCC中的阳性表达率和强度显著高于肝硬化和正常肝脏组织(Pepor在有包膜侵犯组、低分化组及有转移HCC中的阳性表达率及强度明显高于无包膜侵犯组(χ2=6.40,P5cm、有包膜侵犯、有转移、低分化组的MVD值明显高于肝癌≤5cm(t=2.82,Pepor阳性表达HCC中的MVD值明显高于epor阴性表达HCC中的MVD值(t=5.43,Pepor在HCC组织中的表达上调与其血管生成和浸润转移有关。

关键词：癌肝细胞 epor 微血管密度