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ephrinb2基因工程的骨髓间质干细胞对分化成血管内皮细胞的影响

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南方医科大学学报 2008年第5期28卷 790-794页

作者：徐新唐良秋马绍椿高凌俊黄幸青范文茂马燕琳汕头大学医学院附属粤北人民医院心内科广东韶关512026 海南医学院附属医院生殖医学中心海南海口570102

目的观察研究ephrinb2基因转染对体外诱导环境大鼠骨髓间质干细胞(BMSCs)分化成血管内皮细胞的促进作用。方法采用密度梯度离心-贴壁培养法从Wistar大鼠骨髓中得到BMSCs。采用lenti-virus载体装载人ephrinb2基因转染大鼠BMSCs。采用流... 详细信息

目的观察研究ephrinb2基因转染对体外诱导环境大鼠骨髓间质干细胞(BMSCs)分化成血管内皮细胞的促进作用。方法采用密度梯度离心-贴壁培养法从Wistar大鼠骨髓中得到BMSCs。采用lenti-virus载体装载人ephrinb2基因转染大鼠BMSCs。采用流式细胞计数测定CD105、CD73、CD44、八因子(VWF)和血管内皮生长因子受体(KDR)等标志物在ephrinb2-BMSCs中的表达,并探讨其向成骨细胞及脂肪细胞体外分化的多向分化潜能。以2%FBS和50ng/ml血管内皮生长因子(VEGF)的培养条件,体外诱导ephrinb2-BMSCs向血管内皮细胞分化,并测定相应标志物的表达。结果未经诱导分化的ephrinb2-BMSCs表达CD105、CD73和CD44,不表达血管内皮细胞特异性标志物VWF和KDR。转染后的ephrinb2-BMSCs依然具有分化成脂肪细胞和成骨细胞的多向分化潜能。经诱导,ephrinb2-BMSCs表达VWF与KDR,并且其生成血管内皮细胞的比率及在Matrix基质上形成毛细血管样结构的比率均显著高于未转染ephrinb2的BMSCs。结论ephrinb2基因工程的BMSCs具有极高的向血管内皮细胞分化的潜能。这种基因工程细胞为建立冠心病患者的临床治疗新方法提供了有意义的资源。

关键词：骨髓间质干细胞 ephrinb2 血管内皮细胞基因转染细胞分化

非小细胞肺癌组织中EphB4和ephrinb2的表达与CT肺灌注成像的关系

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中华肿瘤杂志 2011年第3期33卷 192-196页

作者：熊曾刘进康周漠玲胡成平周晖陈伟中南大学湘雅医院放射科长沙410008 中南大学湘雅医院呼吸科长沙410008

目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）组织中EphB4和ephrinb2的表达及其与CT肺灌注成像的关系。方法对31例NSCLC患者的肺内单发结节行CT灌注成像，获得血流量（BF）、血容量（BV）和最高增强值（PEI）数据。采用免疫组化SP法检测EphB4和ephri... 详细信息

目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）组织中EphB4和ephrinb2的表达及其与CT肺灌注成像的关系。方法对31例NSCLC患者的肺内单发结节行CT灌注成像，获得血流量（BF）、血容量（BV）和最高增强值（PEI）数据。采用免疫组化SP法检测EphB4和ephrinb2在肿瘤细胞与问质血管中的表达。运用Spearman相关分析与趋势检验探讨EphB4和ephrinb2蛋白表达与NSCLC临床病理特征、灌注参数的关系。结果31例NSCLC组织中，22例（71．0％）Ephl34表达阳性，26例（83．9％）ephrinb2表遗阳性，明显高于内对照（分别为24．0％和20．3％，P〈0．01）。EphB4和ephrinb2的表达在肿瘤细胞中有一致性，在肿瘤间质血管中有差异性。EphB4和ephrinb2蛋白表达强度与淋巴结转移均呈低度正相关（r=0．370，P=0．045；r=0．362，P=0．047）。31例NSCLC患者BF为（42．3±10．2）ml·100mg^-1·min^-1，BV为（9．0±3．9）ml／100g，PEI为（21．6±8．4）HU。相关分析显示，在NSCLC肿瘤细胞中，EphB4的表达强度分别与BF和BV呈负相关（r=-0．452，P=0．011；r=-0．408，P=0．023），与PEI无关。ephrinb2的表达强度分别与BF和BV呈正相关（r=0．516，P=0．003；r=0．448，P=0．013），与PEI无关。EphB4表达强阳性组和阳性组的BF与BV值均显著低于EphB4表达阴性组（均P〈0．01）。ephrinb2表达强阳性组的BF值显著高于ephrinb2表达阳性组和阴性组（均P〈0．01），ephrinb2表达强阳性组的BV值显著高于ephrinb2表达阴性组（P〈0．01）。结论灌注成像反映功能性管腔化血管的密度差异，这种差异同时取决于管腔化血管的数量与质量。

关键词：癌,非小细胞肺 EphB4 ephrinb2 多层螺旋CT 血液灌注

EphB4/ephrinb2逆向信号对RAW264.7破骨细胞分化中PDZ结构域蛋白表达变化的研究

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生物化学与生物物理进展 2011年第5期38卷 464-472页

作者：毛英杰黄旭赵鹃史月华谷志远浙江大学医学院附属口腔医院杭州310006 浙江大学医学院附属第一医院杭州310000 浙江中医药大学杭州310006

Eph受体是酪氨酸蛋白激酶受体家族中最大的亚家族,ephrin(Eph受体相互作用蛋白)是其配体,它们是膜结合蛋白,相互依赖进行信号转导.内居蛋白(syntenin)与Pick1属于PDZ结构域(PSD-95/Dlg-/Zo-1 domain)蛋白,报道称能与ephrinb配体结合,但... 详细信息

Eph受体是酪氨酸蛋白激酶受体家族中最大的亚家族,ephrin(Eph受体相互作用蛋白)是其配体,它们是膜结合蛋白,相互依赖进行信号转导.内居蛋白(syntenin)与Pick1属于PDZ结构域(PSD-95/Dlg-/Zo-1 domain)蛋白,报道称能与ephrinb配体结合,但是否受Eph受体调控尚未见报道.以RAW264.7细胞株为研究对象,通过蛋白质印迹及/或免疫荧光分析显示RAW264.7细胞经RANKL诱导的破骨细胞表达ephrinb2、内居蛋白(syntenin)和Pick1三个蛋白质.将提前成簇的可溶性EphB4蛋白加入培养液,与ephrinb2配体结合,用来研究EphB4/ephrinb2逆向信号对syntenin和Pick1表达水平变化的影响.免疫印迹及Real-time RT-PCR分析结果显示,在EphB4-Fc实验组中Pick1的蛋白质及mRNA水平都有明显增加,然而在EphB4-Fc实验组与Fc对照组别间syntenin的蛋白质及mRNA水平未见明显变化.免疫共沉淀结果显示,syntenin和Pick1不能与ephrinb2共沉淀.以上结果初步探索了体外破骨细胞分化过程中,EphB4/ephrinb2逆向信号对PDZ结构域蛋白(ephrinb2配体潜在的下游信号分子)表达变化的调控.

关键词： EphB4 ephrinb2 内居蛋白(syntenin) Pick1 RAW264.7细胞株

血府逐瘀胶囊调控EphB4/ephrinb2促血管适度生长的实验研究

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中国中西医结合杂志 2017年第2期37卷 209-214页

作者：胡雅琼张静思林凡王一铮高冬宋军福建中医药大学中西医结合学院福州350122 中国中医科学院医学实验中心北京100700

目的研究血府逐瘀胶囊适度促血管新生的作用及其对EphB4/ephrinb2表达的影响。方法通过检测血府逐瘀胶囊含药血清对人微血管内皮细胞(human microvascular endothelial cell line 1,HMEC-1)活性、细胞周期、迁移、黏附和体外成血管的影... 详细信息

目的研究血府逐瘀胶囊适度促血管新生的作用及其对EphB4/ephrinb2表达的影响。方法通过检测血府逐瘀胶囊含药血清对人微血管内皮细胞(human microvascular endothelial cell line 1,HMEC-1)活性、细胞周期、迁移、黏附和体外成血管的影响,明确药物具有适度促血管新生的作用,并运用实时定量PCR、Western blot技术检测药物对EphB4/ephrinb2表达的影响。结果血府逐瘀含药血清对内皮细胞活性及S期细胞比例均无影响。细胞迁移方面,1.25%含药血清作用24、48、72 h均显著增加细胞迁移能力;但2.50%含药血清在最初24 h抑制细胞迁移,随后显著促进迁移,与5.00%含药血清的影响趋势正好相反。细胞黏附方面,1.25%含药血清作用72 h时显著减少黏附细胞数;2.50%药物血清在前两个时间段增加细胞黏附数,随后在72 h抑制细胞黏附;5%含药血清在24 h表现出抑制作用,而在48 h转为促进,随后作用消失。成血管方面,仅2.50%含药血清表现出促进作用,而5.00%含药血清作用48 h和72 h均出现抑制现象。2.50%含药血清组的实时定量PCR和Western blot结果显示,药物作用12 h上调EphB4的表达,作用24 h下调EphB4表达的同时上调ephrinb2的表达。结论仅2.50%含药血清作用48 h对HMEC-1的迁移、黏附和体外成血管均有促进作用,为最佳促血管生长条件,提示血府逐瘀胶囊促血管新生作用具有一定的条件限制,而药物调控EphB4/ephrinb2的表达是其重要因素之一。

关键词：血府逐瘀胶囊血管新生 EphB4 ephrinb2

ephrinb2失调对宫颈癌细胞增殖的影响

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中国现代医学杂志 2013年第16期23卷 20-24页

作者：唐雄志谢秋群杨炜广西桂林市人民医院妇科广西桂林541002

目的明确ephrinb2在宫颈癌细胞中的表达规律及临床意义,探讨ephrinb2基因在宫颈癌侵袭转移中的生物学效应及作用机制。方法运用基因工程技术构建人ephrinb2正义及反义真核表达质粒,并转染宫颈癌Hela细胞,通过RT-PCR及Western blot检测... 详细信息

目的明确ephrinb2在宫颈癌细胞中的表达规律及临床意义,探讨ephrinb2基因在宫颈癌侵袭转移中的生物学效应及作用机制。方法运用基因工程技术构建人ephrinb2正义及反义真核表达质粒,并转染宫颈癌Hela细胞,通过RT-PCR及Western blot检测干扰效应,MTT和流式细胞仪分析细胞增殖和凋亡变化。结果成功构建了pEGFPN1-ephrinb2正义及pEFNB2-shRNA反义真核表达载体。RT-PCR及Westernblot检测结果提示,转染pEGFPN1-ephrinb2后EFNB2的mRNA和蛋白表达水平均上升;转染pEFNB2-shRNA后EFNB2的mRNA和蛋白表达水平均降低;MTT和流式细胞仪分析提示,与对照组细胞相比,转染后Hela细胞凋亡率明显升高(Pephrinb2与宫颈癌细胞侵袭转移密切相关,探讨该基因发挥效应的作用机制,可为宫颈癌治疗提供新的作用靶点。

关键词： ephrinb2 宫颈癌细胞表达

ephrinb2/EphB4在牙槽骨吸收-重建过程中的作用

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第三军医大学学报 2013年第21期35卷 2331-2335页

作者：雷利红黄玫吴燕岷陈莉丽浙江大学医学院附属第二医院口腔内科杭州310009

目的初步探讨ephrinb2/EphB4信号在牙槽骨吸收及骨重建过程中的表达及其意义。方法采用RT-PCR及Western blot方法分别检测小鼠RAW264.7细胞体外诱导前后、小鼠MC3T3-E1细胞骨吸收上清处理前后ephrinb2及EphB4的表达情况。以免疫组化(S-P... 详细信息

目的初步探讨ephrinb2/EphB4信号在牙槽骨吸收及骨重建过程中的表达及其意义。方法采用RT-PCR及Western blot方法分别检测小鼠RAW264.7细胞体外诱导前后、小鼠MC3T3-E1细胞骨吸收上清处理前后ephrinb2及EphB4的表达情况。以免疫组化(S-P)法、免疫荧光等方法检测大鼠实验性牙槽骨吸收模型牙体牙周联合标本中ephrinb2、EphB4的表达情况。结果 ephrinb2和EphB4在小鼠RAW264.7细胞、MC3T3-E1细胞中均有明显的表达,骨吸收上清作用于MC3T3-E1细胞后,分化的成骨细胞ephrinb2表达量(17.53±0.43)较阴性对照组(15.67±0.45)有显著升高(Pephrinb2分别在牙槽骨缘成骨细胞及破骨细胞存在区的高信号。结论 ephrinb2/EphB4信号参与了骨吸收-重建过程,成骨细胞和破骨细胞均可共表达ephrinb2/EphB4并可能存在成骨细胞间的ephrinb2/EphB4传导完成促进成骨活动。

关键词：成骨细胞破骨细胞 ephrinb2 EphB4 牙槽骨吸收动物模型

实验性正畸牙移动过程中EphB4/ephrinb2促成骨作用的研究进展

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吉林大学学报（医学版） 2013年第6期39卷 1294-1297页

作者：齐慧川张祎胡敏吉林大学口腔医院正畸科吉林长春130021

正畸治疗过程中,对牙齿施加相对缓慢而持久的轻力可通过牙周膜组织传导至牙槽骨,从而引起骨改建,达到牙齿移动的目的。机械张力作用于牙周膜成纤维细胞(PDLF)后激活ephrinb2,随后PDLF与邻近PDLF和成骨细胞通过EphB4/ephrinb2相互作用,... 详细信息

正畸治疗过程中,对牙齿施加相对缓慢而持久的轻力可通过牙周膜组织传导至牙槽骨,从而引起骨改建,达到牙齿移动的目的。机械张力作用于牙周膜成纤维细胞(PDLF)后激活ephrinb2,随后PDLF与邻近PDLF和成骨细胞通过EphB4/ephrinb2相互作用,两者协同促进成骨。本文简要介绍PDLF对张力产生应答后激活EphB4/ephrinb2并促进成骨相关机制的最新进展。

关键词： EphB4 ephrinb2 机械张力牙周膜成纤维细胞整合素骨形成牙移动

ephrinb2基因转染脱落乳牙来源的牙髓干细胞提高其成骨/成牙本质分化的研究

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安徽医科大学学报 2019年第4期54卷 564-569页

作者：胡晓燕朱绍跃徐建光李午丽张菁安徽医科大学口腔医学院安徽医科大学附属口腔医院安徽省口腔疾病研究重点实验室合肥230032 徐州医科大学附属徐州口腔医院徐州221002

目的观察促红细胞生成素肝细胞激酶受体B4/促红细胞生成素肝细胞激酶受体配体B2 (EphB4/ephrinb2)信号通路在调控过表达ephrinb2的脱落乳牙来源牙髓干细胞(SHEDs)成骨/成牙本质分化中的作用。方法从滞留乳牙中分离出SHEDs,用hEfnB2-GFP-... 详细信息

目的观察促红细胞生成素肝细胞激酶受体B4/促红细胞生成素肝细胞激酶受体配体B2 (EphB4/ephrinb2)信号通路在调控过表达ephrinb2的脱落乳牙来源牙髓干细胞(SHEDs)成骨/成牙本质分化中的作用。方法从滞留乳牙中分离出SHEDs,用hEfnB2-GFP-Bsd载体和空载体(GFP-Bsd)转染后进行成骨/成牙本质分化诱导。用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、碱性磷酸酶实验(ALP)实验、茜素红S染色实验来检测EfnB2-SHEDs组、空载体对照组(Vector-SHEDs)的成骨分化效果,并用Western blot、免疫沉淀和免疫共沉淀试验来检测ephrinb2和EphB4磷酸化蛋白表达水平。结果 ALP实验和茜素红S染色实验证实:EfnB2-SHEDs组比Vector-SHEDs组表现出更高的ALP活性和矿化能力。RT-PCR显示:EfnB2-SHEDs组成牙本质/成骨标志物的表达明显高于Vector-SHEDs组,在成骨分化中,EphB4受体通过磷酸化被活化。结论基因转染ephrinb2能够通过刺激ephrinb2和EphB4的磷酸化来提高SHEDs的成骨/成牙本质分化。

关键词：乳牙牙髓干细胞 ephrinb2 基因转染成骨分化

慢病毒介导ephrinb2基因转染骨髓间充质干细胞对脑瘫大鼠脑损伤的保护作用

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中华物理医学与康复杂志 2018年第11期40卷 814-820页

作者：朱敏张跃汤健杜森杰华裕傅大林陆芬李红英赵晓科南京医科大学附属儿童医院康复科南京210008

目的观察慢病毒介导ephrinb2基因转染骨髓间充质干细胞(BMSCs)对脑瘫大鼠脑损伤的保护作用及相关机制。方法从大鼠中分离、培养BMSCs,以慢病毒为载体介导ephrinb2转染BMSCs。采用随机数字表法将96只大鼠分为假手术组、溶剂对照组(简称PB... 详细信息

目的观察慢病毒介导ephrinb2基因转染骨髓间充质干细胞(BMSCs)对脑瘫大鼠脑损伤的保护作用及相关机制。方法从大鼠中分离、培养BMSCs,以慢病毒为载体介导ephrinb2转染BMSCs。采用随机数字表法将96只大鼠分为假手术组、溶剂对照组(简称PBS组)、空载慢病毒组(简称EGFP/BMSCs组)及ephrinb2重组慢病毒组(简称ephrinb2/BMSCs组)。选用改良缺氧缺血脑病(HIE)造模方法将PBS组、EGFP/BMSCs组及ephrinb2/BMSCs组大鼠制成脑瘫模型,于术后7 d时分别将PBS溶液、BMSCs或慢病毒介导ephrinb2基因转染BMSCs注射到PBS组、EGFP/BMSCs组、ephrinb2/BMSCs组大鼠侧脑室内。于脑损伤28 d后采用免疫组织化学法检测各组大鼠海马组织ephrinb2蛋白表达;采用HE染色方法观察细胞移植后大鼠海马CA1区神经元密度;采用TUNEL法检测大鼠海马神经元凋亡情况;采用免疫荧光法检测大鼠海马区Nestin及CD31表达水平。于脑损伤28 d后采用Morris水迷宫检测各组大鼠学习、记忆能力变化。结果脑损伤28 d后,发现ephrinb2/BMSCs组海马组织ephrinb2蛋白表达均显著高于假手术组、PBS组及EGFP/BMSCs组,组间差异均具有统计学意义(Pephrinb2/BMSCs组海马CAl区病理改变明显轻于PBS组及EGFP/BMSCs组;ephrinb2/BMSCs组海马区神经元凋亡率明显低于其它各组(Pephrinb2/BMSCs组海马Nestin及CD31阳性率均显著高于其它各组。远期行为学测试结果显示ephrinb2/BMSCs组Morris水迷宫实验平均潜伏期明显优于PBS组及EGFP/BMSCs组(Pephrinb2转染BMSCs移植到脑瘫大鼠侧脑室海马区能高效表达ephrinb2基因,有助于神经元细胞分化及血管新生,抑制细胞凋亡,加速受损神经功能恢复。

关键词： ephrinb2 骨髓间充质干细胞神经元细胞脑瘫大鼠