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epha2基因腺病毒感染树突状细胞诱导CTL对胶质瘤细胞的杀伤作用

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中国肿瘤生物治疗杂志 2012年第1期19卷 35-39页

作者：陈宏颉袁邦清王守森郑兆聪高进喜王如密南京军区福州总医院神经外科福建福州350000 南京军区福州总医院476医院神经外科福建福州350002

目的:研究epha2基因修饰的树突状细胞(dendritic cell,DC)疫苗诱导细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lympho-cyte,CTL)对U251胶质瘤细胞的杀伤效应,为胶质瘤的免疫治疗提供新的方法。方法:将重组epha2腺病毒rAd-epha2感染HLA-A2阳性的人... 详细信息

目的:研究epha2基因修饰的树突状细胞(dendritic cell,DC)疫苗诱导细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lympho-cyte,CTL)对U251胶质瘤细胞的杀伤效应,为胶质瘤的免疫治疗提供新的方法。方法:将重组epha2腺病毒rAd-epha2感染HLA-A2阳性的人外周血来源的DC,制备epha2基因修饰的DC疫苗,Western blotting和FACS方法检测感染后DC的epha表达。以DC疫苗体外刺激HLA-A2阳性的单个核细胞,酶联免疫斑点实验(enzyme-linked immunospot assay,ELISPOT)和标准51Cr释放实验分别检测DC疫苗所诱导的CTL活性和对HLA-A2阳性的U251细胞的杀伤作用(另设rAd-Lac Z感染的DC组和PBS组作为对照)。结果:成功制备了epha2基因修饰的DC疫苗,其可有效表达epha2蛋白。与感染rAd-LacZ的DC和PBS组相比,感染rAd-epha2的DC疫苗能有效激发CTL活性[(187±21)vs(12±4)、(18±5)个,P251细胞有明显的杀伤效应[(45.7±6.8)%vs(7,1±4.5)%,Pepha2基因修饰的DC疫苗能有效激发CTL活性,并对胶质瘤U251细胞有明显的杀伤活性。

关键词： epha2基因树突状细胞胶质瘤

epha2基因缺失导致小鼠听力损失及其机制

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EphA2基因缺失导致小鼠听力损失及其机制

作者：陈鹏南方医科大学

学位级别：硕士

目的听力障碍是严重影响人类健康和生活质量的常见疾病之一。近年来临床上用于防治听力障碍的方法都有一定的发展和成果,如安装听觉辅助装置、干细胞移植和基因治疗技术等。其中基因治疗技术的基础是对听力相关基因进行筛查及其机制研究... 详细信息

目的听力障碍是严重影响人类健康和生活质量的常见疾病之一。近年来临床上用于防治听力障碍的方法都有一定的发展和成果,如安装听觉辅助装置、干细胞移植和基因治疗技术等。其中基因治疗技术的基础是对听力相关基因进行筛查及其机制研究[1],本实验主要目的即是探究epha2基因缺失小鼠的听力损失及其机制。方法(1)将epha2基因全身性敲除C57 BL/6J雄性成年小鼠与相同遗传背景的适孕雌鼠合笼并对其子代进行繁育,对其基因组通过聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)和琼脂糖电泳的方法确认子代的基因型。用于实验动物的基因型包括epha2(+/+)、epha2(+/-)和epha2(-/-)。(2)对三种基因型小鼠的听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)进行跟踪检测。(3)通过蛋白免疫印记法(Western Blot,WB)来探究epha2蛋白在小鼠耳蜗中的表达。(4)对三种基因型成年小鼠的耳蜗内电位(endocochlear potential,EP)进行检测。(5)对三种基因型小鼠在成年和老年阶段的耳蜗内相关组织结构进行研究:对血管纹平铺组织片进行伊红染色;对耳蜗冰冻切片的苏木青伊红(HE)染色和尼式染色(Nissl);对耳蜗基底膜进行免疫荧光染色:内外毛细胞(MYOSINⅦA)、内毛细胞上的带状突触(CtBP2)。结果 epha2基因杂合子和纯合子的C57 BL/6J小鼠(可统称为实验组)的表型基本相同:(1)ABR检测结果表明实验组小鼠在成年阶段高频听力损失严重,到老年阶段累及至中低频,即呈年龄相关的听力损失。(2)epha2蛋白于耳蜗组织有表达。(3)二到四月龄时的实验组血管纹毛细血管密度与对照组相比有所降低,且血管直径变大。六到八月龄的实验组的毛细血管密度无进一步变化,但其血管发生萎缩。(4)二到四月龄的实验组EP异常。(5)二到四月龄的实验组内外毛细胞无丢失现象,六到八月龄的实验组底部外毛细胞几乎全部丢失且底部内毛细胞有一定程度丢失。(6)二到四月龄的实验组中、底部内毛细胞的带状突触数量低于对照组,六到八月龄的实验组顶部内毛细细胞的带状突触也开始低于对照组。(7)实验组与对照组在两个年龄阶段的血管纹横截厚度和螺旋神经节密度均无明显差异。结论epha2基因的缺失使得C57小鼠在其成年时期,血管纹中毛细血管密度下降且直径增大,底部耳蜗内电位异常,中部和底部内毛细胞带状突触数量降低,从而出现严重的高频听力损失。在其老年时期,血管纹毛细血管出现萎缩,底部外毛细胞大量丢失及内毛细胞部分丢失,且顶部内毛细胞带状突触同样减少,最终听觉损失累及到中低频。

关键词： epha2基因血管纹耳蜗内电位毛细胞带状突触年龄相关性听力损失

湖北汉族epha2基因多态性与年龄相关性白内障遗传易感性的关联研究

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中华医学遗传学杂志 2019年第4期36卷 380-383页

作者：黄玉婵李青春吴峰湖北科技学院五官医学院湖北咸宁437100 湖北科技学院附属第二医院耳鼻咽喉头颈外科湖北咸宁437100

目的分析湖北省汉族人群促红素人肝细胞受体酪氨酸激酶A2(Eph-receptor tyrosine kinase-type A2,epha2)基因多态性与年龄相关性白内障(age-related cataract,ARC)发病的相关性。方法选择280例皮质性ARC患者以及200例健康对照,采集其外... 详细信息

目的分析湖北省汉族人群促红素人肝细胞受体酪氨酸激酶A2(Eph-receptor tyrosine kinase-type A2,epha2)基因多态性与年龄相关性白内障(age-related cataract,ARC)发病的相关性。方法选择280例皮质性ARC患者以及200例健康对照,采集其外周血样,用PCR-限制性片段长度多态性法(PCR-restriction fragment length polymorphism,PCR-RELP)检测epha2基因的rs3768293、rs3754334、rs477558、rs7548209等4个位点,比较两组的等位基因及基因型频率,并分析其与ARC易感性的相关性。结果ARC组rs3768293位点AA型基因型分布高于对照组,AC型基因分布低于对照组(P基因型及等位基因频率与对照组相似(P>0.05)。ARC组rs477558位点AA型基因型频率高于对照组,AG型基因频率低于对照组(P基因型频率高于对照组,CG型基因型频率低于对照组(P0.05)。结论epha2基因rs3768293、rs477558、rs7548209位点多态性与湖北汉族人群ARC的发病存在相关性。

关键词：年龄相关性白内障 epha2基因遗传多态性易感性

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牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Pg-LPS)对破骨细胞epha2基因表达的调控

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口腔医学研究 2015年第3期31卷 268-271,275页

作者：高爱超于海燕李娜侯玉帛戚欣于小琳于维先吉林大学口腔医学院牙周病科吉林长春130021 北华大学吉林大学口腔医学院吉林省牙发育及颌骨重塑与再生重点实验室

目的:研究小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7在破骨分化过程中,Pg-LPS对破骨细胞epha2表达的影响。方法:用终浓度10mg/L的Pg-LPS刺激RAW264.7细胞后,分别在1、3、5d,应用RT-PCR检测破骨细胞中epha2基因和破骨细胞相关基因(破骨细胞内基质金属... 详细信息

目的:研究小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7在破骨分化过程中,Pg-LPS对破骨细胞epha2表达的影响。方法:用终浓度10mg/L的Pg-LPS刺激RAW264.7细胞后,分别在1、3、5d,应用RT-PCR检测破骨细胞中epha2基因和破骨细胞相关基因(破骨细胞内基质金属蛋白酶(MMP9)、ACP5、c-fos、组织蛋白酶K(CtsK)、NFATc1)的表达,并且通过酒石酸抗酸性磷酸酶(TRAP)染色观察实验组和对照组破骨细胞的分化成熟情况。结果:RT-PCR检测10mg/L的Pg-LPS在第3天和5天,实验组比对照组epha2基因表达分别增高2.4倍和1.2倍,两组之间存在显著差异(P基因c-fos、NFATc1、CtsK、ACP5、MMP9的表达,实验组与对照组相比差异有显著性;TRAP染色结果显示:实验组比对照组的TRAP阳性多核细胞数目明显增多。结论:10mg/L的Pg-LPS对小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7,在破骨分化的中期和晚期均能够促进epha2基因的表达,但是在破骨分化早期对epha2基因的表达无明显作用。

关键词： Pg-LPS 破骨细胞 epha2基因

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epha2基因与先天性白内障

国际眼科纵览 2018年第3期42卷 174-178页

作者：杨佩瑶赵军青岛大学 266071 青岛大学第十一临床学院、临沂市人民医院临沂276000

先天性白内障多因与晶状体发育相关基因突变造成，其中epha2基因位于人类染色体1p36，其编码的epha2酪氨酸激酶受体是一种存在于哺乳动物细胞中的特异性激酶受体，在人类许多组织细胞中都有表达。epha2酪氨酸激酶受体与晶状体细胞间交... 详细信息

先天性白内障多因与晶状体发育相关基因突变造成，其中epha2基因位于人类染色体1p36，其编码的epha2酪氨酸激酶受体是一种存在于哺乳动物细胞中的特异性激酶受体，在人类许多组织细胞中都有表达。epha2酪氨酸激酶受体与晶状体细胞间交流、细胞内蛋白质结构稳定性等多方面相关，其内的SAM结构域可调控晶状体纤维细胞内蛋白募集过程有序。同时，ephrin 配体-epha2受体复合物正常结合是晶状体纤维细胞纵向排列的先决条件。只有晶状体纤维细胞内蛋白质稳定，相互间规则排列，晶状体才能维持透明性；反之先天性白内障形成。

关键词：先天性白内障 epha2基因酪氨酸激酶受体 SAM结构域钙黏蛋白

乳腺癌epha2,EphrinA1,ERα,ERβ和PR的表达及RNAi沉默epha2基因的实验研究

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世界最新医学信息文摘 2017年第81期 115-115页

作者：张楠周福有杨海军王新森河南科技大学临床医学院\河南科技大学第一附属医院河南省安阳市肿瘤医院\河南省科技大学第四附属医院

目的对乳腺癌epha2,Ephrin A1,ERα,ERβ和PR的表达及RNAi沉默epha2基因的实验研究予以探讨。方法随机选取我院2016年1月至2016年8月收治的乳腺癌根治术患者60例,选择其组织石蜡标本作为研究对象,对其实施4纳米厚的连续切片之后,对其实... 详细信息

目的对乳腺癌epha2,Ephrin A1,ERα,ERβ和PR的表达及RNAi沉默epha2基因的实验研究予以探讨。方法随机选取我院2016年1月至2016年8月收治的乳腺癌根治术患者60例,选择其组织石蜡标本作为研究对象,对其实施4纳米厚的连续切片之后,对其实施HE染色及免疫组织化学检测。结果 epha2,EphrinA1有少量存在于炎细胞胞浆当中,大部分处于血管内皮细胞胞浆及肿瘤细胞的胞浆当中;ERα,ERβ和PR主要分布于细胞核当中。蛋白等级表达不同的样本之间的mRNA表达水平没有显著差异;EphrinA1蛋白表格与EphrinA1 mRNA的表格水平并不完全一致。结论在乳腺癌组织当中,epha2,EphrinA1,ERα,ERβ和PR的蛋白表达,提示其余乳腺癌的发展发展存在一定的关联性;通过逆转录病毒载体介导的RNAi其对于MCF-7中的epha2的蛋白表格具有一定的抑制作用,通过对传染siRNA逆转录病毒表达载体进行观察,对于乳腺癌细胞恶性生物学相关研究具有一定的促进作用,这能够为以epha2为靶向的乳腺癌基因治疗提供参考依据。

关键词： epha2 EphrinA1 RNAi沉默 epha2基因

遗传性白内障两家系致病基因的筛查及相关表型研究

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遗传性白内障两家系致病基因的筛查及相关表型研究

作者：季亚男青岛大学

学位级别：硕士

目的通过对中国两个常染色体显性遗传的先天性白内障家系进行致病基因的筛查,并研究其临床表型,分析其基因型与表型的相关性。进而明确先天性白内障的发病机制,扩展致病基因突变谱。为先天性白内障患儿的产前诊断及早诊早治提供真实可... 详细信息

目的通过对中国两个常染色体显性遗传的先天性白内障家系进行致病基因的筛查,并研究其临床表型,分析其基因型与表型的相关性。进而明确先天性白内障的发病机制,扩展致病基因突变谱。为先天性白内障患儿的产前诊断及早诊早治提供真实可靠的分子遗传学依据,进而采取积极有效的措施预防出生缺陷,提高人口出生质量。方法收集在临沂市人民医院就诊的两个被诊断为先天性白内障的家系,对所有家系成员进行详细的眼部检查及全身查体,排除全身疾病。裂隙灯显微镜观察先天性白内障患者晶状体的混浊类型。经患者及家属知情同意后采集所有家系成员外周静脉血各3ml,并提取基因组DNA。采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增先天性白内障相关候选基因目的片段,对扩增产物进行高通量测序(Highthroughput sequencing,HTS)分析,筛选候选基因突变位点。并用Sanger测序在两个家系内进行共分离验证。进而应用Polyphen-2、SIFT、PROVEAN及Mutation taster等相关生物信息学蛋白功能预测软件对筛查出的突变进行生物信息学分析,并预测分析蛋白质的致病性。结果通过检查发现家系一:患者双眼晶状体呈后极部混浊,白内障表型为后极性白内障,在所有患者中发现酪氨酸激酶受体基因epha2的16号内含子区存在一处剪接突变c.2826-9G>A。该突变在家系正常成员及正常对照者中均未发现,与白内障表型共分离。分析蛋白的致病性发现突变可影响外显子的剪接,导致氨基酸链提前终止,并影响蛋白质的功能,是造成该家系发生先天性后极性白内障的原因。在此之前,国内外均有过对该突变的报道。家系二:患者双眼晶状体呈中央核性混浊,白内障表型为核性白内障,在所有患者中发现晶状体蛋白基因CRYBB1第3号外显子第209个碱基发生A>C点突变(c.209A>C)。导致相应的编码产物晶状体蛋白βB1第70个氨基酸由谷氨酰胺(Q)突变为脯氨酸(P)。该突变在家系正常成员及正常对照者中均未发现,与白内障表型共分离,生物信息学蛋白功能预测软件预测此突变为有害突变。在人类基因突变数据库(The Human Gene Mutation Database,HGMD)中没有发现该位点,这是一个未报道过的新突变。结论本研究在先天性后极性白内障家系中发现酪氨酸激酶受体基因epha2内含子16区的1个剪接突变c.2826-9G>A。在先天性核性白内障家系中发现晶状体蛋白基因CRYBB1一处新的错义突变c.209A>C,外显子3区域的第209位碱基A被C取代,导致翻译的βB1蛋白第70位氨基酸由谷氨酰胺变异为脯氨酸p.Q70P,这是首次报道此突变位点导致先天性白内障。上述两种突变不仅明确了先天性白内障患者的致病基因及致病位点,也拓宽了CRYBB1基因的致病突变谱。为先天性白内障患儿的早期发现、早期诊断及治疗提供了科学依据。

关键词：先天性白内障后极性白内障核性白内障 epha2基因 CRYBB1基因

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先天性白内障转基因小鼠动物模型的建立

中文科技期刊数据库（引文版）医药卫生 2022年第1期 108-111页

作者：李靖岩张铭阳沈阳医学院基础医学院辽宁沈阳110034

采用C57BL/6J小鼠及含有突变基因cDNA序列的转基因载体建立先天性白内障转基因动物模型。方法:利用含有突变型epha2基因cDNA全长的转基因载体,经限制性内切酶对载体线性化后注入小鼠受精卵雄原核,后将受精卵植入代孕母鼠子宫。在转基因... 详细信息

采用C57BL/6J小鼠及含有突变基因cDNA序列的转基因载体建立先天性白内障转基因动物模型。方法:利用含有突变型epha2基因cDNA全长的转基因载体,经限制性内切酶对载体线性化后注入小鼠受精卵雄原核,后将受精卵植入代孕母鼠子宫。在转基因载体序列选取两个跨功能片段设计2对鉴定引物用于整合鉴定。对转基因阳性小鼠与阴性对照小鼠晶体组织做mRNA表达分析,证实转基因在整合阳性小鼠晶体组织确有特异性表达。结果:首建系小鼠共75只,经整合鉴定确定3只转基因阳性founder小鼠,经与野生C57BL/6J小鼠杂交传代后,产生3代共279只小鼠,其中阳性鼠106 只,阳性率为37.99% 。所有转基因阳性鼠均经裂隙灯检查诊断为先天性白内障表型。提取转基因阳性小鼠晶体组织总RNA,经RT-PCR检测结果为阳性。结论:先天性白内障转基因小鼠动物模型成功建立,转基因在小鼠晶体组织有特异性表达。

关键词：先天性白内障转基因小鼠 epha2基因

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后极性白内障家系致病基因的筛查及表型研究

中国优生与遗传杂志 2020年第1期28卷 77-78,112,F0004页

作者：季亚男赵军张娟美田春柳张丹张琳琳青岛大学山东青岛266000 临沂市人民医院山东临沂276000

目的对中国一个具有常染色体显性遗传特点的先天性后极性白内障家系进行疾病相关候选基因筛查,并研究其相关表型。方法抽取该家系患者及健康者外周静脉血并提取基因组DNA,通过靶向高通量测序技术筛查出先证者的致病突变,再通过Sanger测... 详细信息

目的对中国一个具有常染色体显性遗传特点的先天性后极性白内障家系进行疾病相关候选基因筛查,并研究其相关表型。方法抽取该家系患者及健康者外周静脉血并提取基因组DNA,通过靶向高通量测序技术筛查出先证者的致病突变,再通过Sanger测序进行家系验证以及家系内的共分离检验分析。结果高通量测序筛查发现先证者epha2基因存在可疑致病突变(c.2826-9G>A,IN 16,Het)。通过家系验证,确定该家系所有患者在epha2基因16号内含子区均有1个剪接突变c.2826-9G>A。结论此家系的致病基因为epha2,突变为c.2826-9G>A,该突变可造成晶状体的先天性异常,可确定为该后极性白内障家系的致病突变。

关键词：后极性白内障遗传性基因突变 epha2基因