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微小扇头蜱enolase基因序列特征及其编码蛋白结构与抗原表位预测

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中国血吸虫病防治杂志 2023年第2期35卷 163-170页

作者：白玲李中波怀化职业技术学院湖南怀化418000 龙岩学院生命科学学院福建龙岩364012

目的分析微小扇头蜱enolase基因序列特征,并预测其所编码enolase蛋白二、三级结构及抗原表位。方法 2022年6月25日在湖南省怀化市芷江县某黄牛养殖场采集62只雌性饱血微小扇头蜱,提取其DNA,PCR扩增其enolase基因,PCR扩增产物克隆、测... 详细信息

目的分析微小扇头蜱enolase基因序列特征,并预测其所编码enolase蛋白二、三级结构及抗原表位。方法 2022年6月25日在湖南省怀化市芷江县某黄牛养殖场采集62只雌性饱血微小扇头蜱,提取其DNA,PCR扩增其enolase基因,PCR扩增产物克隆、测序并表达。采用软件Clustal X分析enolase基因序列特征,并将基因序列翻译成氨基酸序列。采用PRABI软件推导出enolase蛋白二、三级结构,并对其理化性质进行分析;采用ABCpred Prediction、Scratch、IEDB和NetCTL软件预测enolase蛋白B、T细胞抗原表位。结果微小扇头蜱enolase基因序列全长1 323 bp,碱基A、T、G、C含量分别为24.5%、22.5%、27.0%、26.0%,A+T含量为47.0%、G+C含量为53.0%。该基因共编码434个氨基酸;enolase蛋白分子量大小为47.12 k Da,其二级结构含186个(42.86%)α-螺旋、32个(7.37%)β-转角、144个(33.18%)无规卷曲、72个(16.59%)扩展链。enolase蛋白存在于细胞质中的概率最大(76.7%),其次是线粒体(39.1%)和细胞核(21.7%),该蛋白无信号肽和跨膜结构域。enolase蛋白预计有14个B细胞优势抗原表位和8个T细胞优势抗原表位。结论微小扇头蜱enolase基因序列呈GC偏好;其所编码的enolase蛋白为酸性亲水性蛋白,以α-螺旋和无规卷曲为主要结构,且具有B、T细胞优势抗原表位,是微小扇头蜱疫苗研发的一种理想靶标。

关键词：微小扇头蜱 enolase基因 enolase蛋白蛋白结构抗原表位

奶牛源无乳链球菌enolase重组蛋白制备及其免疫保护性研究

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中国兽医科学 2023年第7期53卷 902-910页

作者：曾严张保海芦彪韩光丽张洁如姚学萍王印杨泽晓罗燕曹随忠四川农业大学动物医学院四川成都611130 动物疫病与人类健康四川省重点实验室四川成都611130

奶牛乳房炎是奶牛养殖场常见疾病,为了有效预防奶牛乳房炎,降低药物残留,提高奶牛养殖的生产效益,为牛源无乳链球菌亚单位疫苗的制备提供一定的依据,本研究选取无乳链球菌免疫原性较好的enolase蛋白为靶标,克隆enolase基因、构建重组表... 详细信息

奶牛乳房炎是奶牛养殖场常见疾病,为了有效预防奶牛乳房炎,降低药物残留,提高奶牛养殖的生产效益,为牛源无乳链球菌亚单位疫苗的制备提供一定的依据,本研究选取无乳链球菌免疫原性较好的enolase蛋白为靶标,克隆enolase基因、构建重组表达质粒。经过诱导、表达和纯化获得重组enolase蛋白。用纯化的蛋白加以佐剂对小鼠进行二次免疫,测定免疫后小鼠的血清抗体水平,评价enolase蛋白亚单位疫苗的免疫效果和安全性。最终,成功从无乳链球菌分离株MN686586中扩增出enolase基因,构建出重组表达质粒pET-32a-enolase,经IPTG体外诱导表达,获得分子质量大小为67 ku的重组蛋白。用enolase亚单位疫苗免疫小鼠,间接ELISA检测小鼠血清抗体水平显示,二免后第14天小鼠血清抗体水平效价达到1∶25 600,并且相对免疫保护率(RPS)为100%。结果表明,enolase亚单位疫苗能够刺激小鼠产生一定的免疫应答和产生特异性抗体,已初步制备出针对牛源无乳链球菌的亚单位疫苗。

关键词：奶牛乳房炎无乳链球菌 enolase蛋白亚单位疫苗

华支睾吸虫间接ELISA检测方法的建立及初步应用

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中国兽医学报 2015年第11期35卷 1792-1798页

作者：潘辰杨怡陈学秋杜爱芳浙江大学动物科学学院浙江杭州310058

RT-PCR扩增华支睾吸虫(Clonorchis sinensis)的enolase基因后,进行原核表达,采用SDS-PAGE和Western blot检测表达产物;以纯化后的蛋白为包被抗原建立ELISA方法,并对工作条件进行优化。结果表明,ELISA最佳工作条件为:抗原最佳包被质量浓... 详细信息

RT-PCR扩增华支睾吸虫(Clonorchis sinensis)的enolase基因后,进行原核表达,采用SDS-PAGE和Western blot检测表达产物;以纯化后的蛋白为包被抗原建立ELISA方法,并对工作条件进行优化。结果表明,ELISA最佳工作条件为:抗原最佳包被质量浓度为5mg/L,37℃1h再4℃过夜;5%脱脂奶粉,37℃封闭1h;待检血清1∶100稀释37℃孵育1h;酶标二抗1∶5 000稀释,37℃孵育45min;TMB显色作用时间10min;确定的阴阳性血清临界值为0.253。所建立的ELISA方法特异性较好,可检测犬华支睾吸虫病阳性血清,与犬卫氏并殖吸虫病阳性血清、犬蛔虫病阳性血清、犬弓形虫病阳性血清、犬新孢子虫病阳性血清均不发生反应。该方法敏感性为1∶3 200。批间批内重复性试验变异系数均小于10%。在临床应用中,对浙江地区353多份犬血清的检测表明,样品阳性率为1.13%。本研究建立的间接ELISA方法可以用于临床病例的血清学快速检测,为华支睾吸虫的血清流行病学调查提供了有效手段。

关键词：华支睾吸虫 enolase蛋白间接ELISA