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Endocan敲低对胃癌细胞迁移能力的影响及其潜在机制

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Endocan敲低对胃癌细胞迁移能力的影响及其潜在机制

作者：张军安徽医科大学

学位级别：硕士

目的初步研究Endocan敲低对胃癌细胞SGC7901迁移能力的影响及其潜在相关分子机制。方法设计Endocan干扰序列,进行慢病毒载体的制备,再进行慢病毒包装后感染人胃癌SGC7901细胞株,构建出Endocan敲低的稳定人胃癌SGC7901细胞株,载体中携带... 详细信息

目的初步研究Endocan敲低对胃癌细胞SGC7901迁移能力的影响及其潜在相关分子机制。方法设计Endocan干扰序列,进行慢病毒载体的制备,再进行慢病毒包装后感染人胃癌SGC7901细胞株,构建出Endocan敲低的稳定人胃癌SGC7901细胞株,载体中携带荧光信号,过程中用荧光显微镜观察细胞,确定转染效率,用Western blot实验检测Endocan蛋白表达水平和RT-q PCR实验检测Endocan m RNA表达水平来确定其转染结果。利用划痕实验检测Endocan低表达对胃癌SGC7901迁移能力的影响。我们发现Endocan表达水平与TGF-α表达水平呈负相关,加入EGFR特异性抑制剂(AG1478)和TGF-α中和抗体,再次检测各细胞组的细胞迁移能力;Western blot检测迁移相关蛋白的表达情况及MAPK信号通路相关蛋白的磷酸化水平。我们又发现Endocan表达水平与Cav-1表达水平呈负相关,Cav-1的表达又与胆固醇水平密切相关,LSS基因调控胆固醇的合成,我们将针对于LSS基因的sh RNA转染至Endocan敲低的胃癌细胞SGC7901中,使LSS基因低表达,检测迁移相关蛋白和表达情况和MAPK信号通路相关蛋白的磷酸化水平。结果在荧光倒置显微镜下进行观察,发现转染效率良好,RT-q PCR结果显示Endocan敲低的SGC7901细胞组相较于野生型的SGC7901细胞Endocan的m RNA表达水平明显降低。Western blot结果显示Endocan敲低的SGC7901细胞组相较于野生型的SGC7901细胞Endocan的蛋白表达水平明显降低,TGF-α的蛋白水平明显升高;发现各Endocan敲低细胞组的Claudin1和E-cadherin蛋白表达水平都明显低于各野生型细胞组。而ERK磷酸化水平和Src磷酸化水平又都高于野生型细胞组;LSS低表达的Endocan敲低细胞组的Cav-1和N-cadherin蛋白表达水平较Endocan敲低细胞组降低,Src和ERK磷酸化水平也相对降低;划痕实验结果显示各Endocan敲低的SGC7901细胞组相较于各野生型的SGC7901细胞迁移能力增强,加入EGFR特异性抑制剂后,迁移能力减弱。结论Endocan低表达会增强胃癌细胞SGC7901的迁移能力。其潜在机制是:Endocan低表达会上调TGF-α表达进而激活TGF-α/Src/ERK信号通路下调调节E-cadherin、Claudin1表达,也有可能会上调Cav-1表达,激活Cav-1/Src/ERK信号通路,上调调节N-cadherin表达,使最终增强其迁移能力。

关键词： Endocan 肿瘤 LSS MAPK信号通路迁移

Endocan促进巨噬细胞HECTD1表达下调ABCA1促动脉粥样硬化

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Endocan促进巨噬细胞HECTD1表达下调ABCA1促动脉粥样硬化

作者：陈金智南华大学

学位级别：硕士

【背景与目的】:动脉粥样硬化(Atherosclerosis,As)是冠心病、脑梗死以及大多数外周血管病的主要病理学基础。大量研究表明,As主要在脂质代谢和炎症两方面作用下形成,其中脂质代谢障碍是其发生发展的主要危险因素,巨噬细胞脂质蓄积形成... 详细信息

【背景与目的】:动脉粥样硬化(Atherosclerosis,As)是冠心病、脑梗死以及大多数外周血管病的主要病理学基础。大量研究表明,As主要在脂质代谢和炎症两方面作用下形成,其中脂质代谢障碍是其发生发展的主要危险因素,巨噬细胞脂质蓄积形成泡沫细胞是其发生发展的病理特征,而ABCA1介导的胆固醇流出减少是泡沫细胞形成的主要因素。ABCA1作为膜蛋白能够利用ATP通过载脂蛋白a-1从细胞中去除脂质,在介导细胞内胆固醇流出以及胆固醇逆转运中起着重要作用。因此探究ABCA1的调控机制对动脉粥样硬化的发生及防治机制具有重要意义。Endocan是一种分泌蛋白,参与炎症发生、细胞黏附及迁移,在内皮功能障碍发生中起着重要作用。研究发现apo E小鼠在动脉粥样硬化斑块早期阶段Endocan水平明显升高。Endocan能够促进IL-1β、TNF-α等炎性因子和VCAM-1、ICAM-1、E-选择素等细胞黏附分子的表达,促进白细胞与内皮细胞粘附。Endocan还能够增加巨噬细胞中i NOS和CRP表达,参与动脉粥样硬化的发生发展。但是Endocan是否能够通过脂质代谢影响动脉粥样硬化的发生目前并不清楚,因此本研究从脂质代谢方面探究Endocan对胆固醇逆向转运及动脉粥样硬化的作用及其机制。【方法】:采用人重组蛋白Endocan孵育巨噬细胞,胆固醇流出试剂盒检测细胞内胆固醇流出情况,细胞油红O染色及相应试剂盒检测巨噬细胞内脂质蓄积情况;q PCR和Western Blot检测Endocan孵育后对ABCA1、ABCG1表达的影响;分别加入钙蛋白酶抑制剂、溶酶体抑制剂和蛋白酶体抑制剂处理细胞,观察对Endocan作用的影响;转染HECTD1si RNA,验证Endocan通过HECTD1影响ABCA1蛋白水平。最后,在apo E小鼠中腹腔注射Endocan重组蛋白,相应试剂盒检测小鼠血浆胆固醇水平;小鼠心脏做冰冻切片并染色评估小鼠动脉粥样斑块形成情况;Western Blot检测小鼠主动脉和腹腔巨噬细胞中ABCA1蛋白水平。【结果】:1.Endocan能够明显增加细胞内TC、FC和CE含量,降低细胞内胆固醇流出;2.Endocan能够降低ABCA1的蛋白水平,但是不影响ABCG1水平;3.分别使用钙蛋白酶抑制剂Calpeptin、溶酶体抑制剂NHCL和蛋白酶抑制剂MG132处理,结果表明MG132能够挽救Endocan对ABCA1的抑制作用,Calpeptin和NHCL则没有该效应;4.沉默HECDT1后检测发现其能够抑制Endocan对ABCA1的调节作用;5.Apo E小鼠腹腔注射Endocan,油红O染色发现小鼠主动脉内斑块明显增多,心脏冰冻切片染色发现小鼠主动脉瓣斑块面积明显增加,检测发现Endocan能够下调主动脉和腹腔巨噬细胞中ABCA1表达,降低小鼠血浆HDL-C水平。【结论】:Endocan能够促进动脉粥样硬化的发生发展,其机制是通过上调HECTD1,促进ABCA1降解,降低ABCA1蛋白水平,抑制巨噬细胞内胆固醇流出,降低apo E小鼠血浆中HDL-C水平。

关键词： Endocan 动脉粥样硬化 ABCA1 HECTD1

肝硬化腹水患者的腹水Endocan水平在自发性腹膜炎诊断中的作用

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第三军医大学学报 2020年第13期42卷 1338-1344页

作者：伍先梅罗俊力黄文祥贾蓓重庆医科大学附属第一医院感染科重庆市传染病寄生虫病学重点实验室重庆400016

目的探索肝硬化腹水患者的腹水Endocan水平在自发性腹膜炎(spontaneous bacterial peritonitis,SBP)诊断中的作用。方法纳入2018年1月至2019年6月在我院住院的失代偿性肝硬化腹水患者161例,其中SBP组35例,非SBP组126例,留取入院时腹水标... 详细信息

目的探索肝硬化腹水患者的腹水Endocan水平在自发性腹膜炎(spontaneous bacterial peritonitis,SBP)诊断中的作用。方法纳入2018年1月至2019年6月在我院住院的失代偿性肝硬化腹水患者161例,其中SBP组35例,非SBP组126例,留取入院时腹水标本,同时收集人口学资料及实验室检查资料,用ELISA方法检测腹水中Endocan浓度,采用logstic回归模型分析SBP的独立影响因素,ROC曲线分析腹水Endocan对SBP的诊断价值。结果腹水Endocan水平在SBP组显著高于非SBP组[398.451(318.762~460.673)pg/mL vs 199.838(133.366~303.226)pg/mL,PEndocan为SBP的独立危险因素[OR=1.008(95%CI为1.004~1.012),PEndocan诊断SBP的曲线下面积(AUC)为0.822(PEndocan诊断SBP的AUC分别为0.852和0.789。结论腹水Endocan水平是肝硬化腹水患者SBP的独立危险因素,是SBP有价值的诊断指标,且在年龄大于等于60岁患者的诊断价值更大。

关键词：肝硬化腹水 Endocan 诊断自发性腹膜炎

解毒化痰祛瘀法对医院获得性肺炎并发呼吸衰竭患者Endocan、PCT、血气分析的影响及评分观察

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解毒化痰祛瘀法对医院获得性肺炎并发呼吸衰竭患者endocan、PCT、...

作者：罗颖安徽中医药大学

学位级别：硕士

目的:观察解毒化痰祛瘀法对医院获得性肺炎(hospital acquired pneumonia,HAP)并发呼吸衰竭中医辨证为痰热瘀阻型患者的临床疗效,为中西医结合治疗HAP并发呼吸衰竭探索新方法、开拓新思路。方法:选择2020年12月至2021年12月期间入住安... 详细信息

目的:观察解毒化痰祛瘀法对医院获得性肺炎(hospital acquired pneumonia,HAP)并发呼吸衰竭中医辨证为痰热瘀阻型患者的临床疗效,为中西医结合治疗HAP并发呼吸衰竭探索新方法、开拓新思路。方法:选择2020年12月至2021年12月期间入住安徽省中医院重症监护病房和综合重症监护病房的HAP并发呼吸衰竭痰热瘀阻型患者63例,按照随机数字表法分为两组,其中对照组31例,采用常规西医治疗,治疗组32例,在对照组的基础上加用解毒化痰祛瘀法,疗程为7天。在治疗前和治疗7天后分别记录两组患者的内皮细胞特异性分子-1(endothelial cell-specific molecule-1,Endocan)、降钙素原(procalcitonin,PCT)、白细胞计数(white blood cell,WBC)、超敏C反应蛋白(high-sensitivity C reactive protein,hs-CRP)、氧分压(oxygen partial pressure,PaO?)、二氧化碳分压(carbon dioxide partial pressure,PaCO?)、氧合指数(oxygenation index,OI)、血乳酸(blood lactate,LAC)、临床肺部感染评分(clinical pulmonary infection scores,CPIS)、中医症状积分、急性生理学及慢性健康状况评分Ⅱ(acute physiology and chronic health evaluationⅡ,APACHEⅡ),并计算出中医症候疗效有效率,进行比较。数据使用SPSS21.0软件进行统计分析。结果:1 Endocan、PCT、WBC、hs-CRP比较:两组患者治疗后均较前下降,但治疗组比对照组下降的更为明显,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。2 PaO、PaCO、OI、LAC比较:两组患者治疗后PaO、OI较前均升高,但治疗组升高的程度优于对照组,组间比较差异有统计学意义(P<0.05);PaCO、LAC较治疗前均降低,治疗组降低的更为明显,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。3评分比较:两组患者治疗后的CPIS评分、中医症状积分、APACHE-Ⅱ评分均有所下降,但治疗组比对照组下降的更为明显,治疗后两组组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。4中医证候疗效有效率比较:治疗7天后治疗组的有效率为81.3%,对照组的有效率58.1%,两组患者有效率的比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:解毒化痰祛瘀法联合西医治疗可能通过进一步减轻HAP并发呼吸衰竭患者肺部炎症反应、改善呼吸功能、缓解组织灌注不足与缺氧,从而更好的改善患者的临床症状、减轻肺部感染程度及整体病情严重程度,临床疗效优于单纯西医治疗。

关键词：解毒化痰祛瘀法医院获得性肺炎呼吸衰竭 Endocan

儿童急性淋巴细胞白血病血清GPAA1、Endocan mRNA表达及临床意义

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疑难病杂志 2022年第10期21卷 1075-1080页

作者：卫雪利费英山张银娟刘静马金海宁夏医科大学总医院儿内科银川750003 宁夏医科大学总医院新生儿科银川750003

目的探讨儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)血清糖基磷脂酰肌醇锚附着蛋白1(GPAA1)和Endocan mRNA表达及临床意义。方法选取2018年1月—2021年1月宁夏医科大学总医院儿内科收治ALL患儿86例为ALL组,根据1年后是否复发分为未复发亚组70例与... 详细信息

目的探讨儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)血清糖基磷脂酰肌醇锚附着蛋白1(GPAA1)和Endocan mRNA表达及临床意义。方法选取2018年1月—2021年1月宁夏医科大学总医院儿内科收治ALL患儿86例为ALL组,根据1年后是否复发分为未复发亚组70例与复发亚组16例,另选取医院同期体检健康儿童54例为健康对照组,采用qPCR法检测血清GPAA1、Endocan mRNA表达。采用Pearson相关性分析ALL患儿血清GPAA1 mRNA与Endocan mRNA表达的相关性,多因素Logistic回归分析ALL患儿复发的影响因素,受试者工作特征曲线(ROC)分析血清GPAA1、Endocan mRNA表达对ALL患儿复发的预测价值。结果 ALL组血清GPAA1、Endocan mRNA表达高于健康对照组(t=13.375、17.485,P均Endocan mRNA表达水平高于未复发亚组(t=4.069、3.791,P均Endocan mRNA表达呈正相关(r=0.564,PEndocan mRNA高表达为ALL患儿复发的独立危险因素[OR(95%CI)=1.958(1.612~4.748)、1.465 (1.076~1.995)、1.979 (1.094~3.581)、2.854 (2.327~5.916)、1.512 (1.054~2.170)、2.133 (1.080~4.214)]。ROC曲线分析显示,血清GPAA1、Endocan mRNA表达及二者联合预测ALL患儿复发的曲线下面积(AUC)分别为0.786、0.784、0.866,二者联合预测ALL患儿复发的AUC大于单独预测(Z=2.574、2.919,P=0.010、0.004)。结论儿童ALL血清GPAA1、Endocan mRNA表达上调,为ALL患儿复发的独立危险因素,可作为ALL患儿复发的预测指标。

关键词：急性淋巴细胞白血病糖基磷脂酰肌醇锚附着蛋白1 Endocan 复发儿童

血清Endocan水平与心血管疾病关联性的Meta分析

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临床心血管病杂志 2017年第10期33卷 983-987页

作者：赵天明倪吉祥胡学华雷焦姚克铖宜昌市三峡大学人民医院呼吸与危重症医学科湖北宜昌443000

目的:评价血清Endocan与心血管疾病(CVD)的关联性。方法:计算机检索Pubmed、Embase、Web of Science、中国知网(CNKI)、万方、维普、中国生物医学文献服务系统(SinoMed),检索自建库以来至2017年3月1日发布的国内外相关文献,提取数据后,... 详细信息

目的:评价血清Endocan与心血管疾病(CVD)的关联性。方法:计算机检索Pubmed、Embase、Web of Science、中国知网(CNKI)、万方、维普、中国生物医学文献服务系统(SinoMed),检索自建库以来至2017年3月1日发布的国内外相关文献,提取数据后,采用Stata 12软件进行Meta分析。结果:共13篇研究符合纳入标准,累计病例数1 356例,对照组946例。Meta分析结果表明,高血压、冠心病、冠状动脉(冠脉)血流缓慢患者血清Endocan水平较对照组升高,其合并标准化均数差值及其95%CI分别为0.69(0.30~1.09)、0.99(0.51~1.39)、0.62(0.45~0.78)(均PEndocan水平高于单纯高血压患者[0.61(0.30~0.92),PEndocan水平可能是CVD发病的危险因素,但其病因关联性仍需随机对照试验研究进一步验证。

关键词： Endocan 心血管疾病关联性 Meta分析

社区中老年人群血清Endocan水平及与血压的关系

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社区中老年人群血清Endocan水平及与血压的关系

作者：薛林莹福建医科大学

学位级别：硕士

目的调查漳州市芗城区社区中老年人群血清Endocan水平,探讨其与心血管危险因素血压、血糖、血脂、颈动脉内膜中层厚度(CIMT)之间的关系。方法本研究于2016年5月至2017年5月在漳州市芗城区对年龄≥40岁的常驻社区居民进行现况调查,通过... 详细信息

目的调查漳州市芗城区社区中老年人群血清Endocan水平,探讨其与心血管危险因素血压、血糖、血脂、颈动脉内膜中层厚度(CIMT)之间的关系。方法本研究于2016年5月至2017年5月在漳州市芗城区对年龄≥40岁的常驻社区居民进行现况调查,通过横断面调查获得人口学资料、体格检查、实验室检查,并进行颈动脉超声检查,通过酶联免疫吸附法试验测定血清Endocan水平。采用独立样本t检验、非参数秩和检验、卡方检验等进行不同血清Endocan水平间一般临床特征的比较,通过血压的分层分析研究不同血压水平中血清Endocan水平的变化,二分类logistic回归分析血清Endocan与心血管危险因素的关系。结果1、本研究共纳入489例研究对象,男性199例,女性290例,男女比例为1:1.5,平均年龄51.0(46.0,59.0)岁;总研究人群中血清Endocan水平为151.39(102.84,215.32)pg/ml。将血清Endocan按ROC曲线切点分组,发现高水平和低水平Endocan组间年龄及性别无差别,而低Endocan水平组中舒张压、空腹血糖、高血压病患病率高于高Endocan水平组(PEndocan水平组的腰围、CIMT高于高血清Endocan水平组,虽未具有统计学意义,但P值接近0.05。体质量指数、收缩压、糖化血红蛋白、血脂、吸烟、饮酒、缺乏运动、糖尿病患病率、血脂异常患病率等在两组间无明显差别。2、血清Endocan水平与腰围呈负相关(P0.05)。3、血清Endocan与血压:与高血压组相比,非高血压组的血清Endocan水平更高(PEndocan在不同血压水平组间存在显著差别,且在血压、收缩压、舒张压中血清Endocan水平均呈现先下降后升高的非线性趋势。将总研究人群分为正常血压及正常高值血压组与高血压组,logistics回归分析表明在正常血压及正常高值血压组人群中,收缩压每升高1个单位Endocan水平升高的OR值是1.043(95%CI=1.006.081),在高血压组人群中,收缩压每升高1个单位Endocan水平升高的OR值是1.033(95%CI=1.009.058),P均Endocan水平升高的OR值是0.7(95%CI=0.943.998,PEndocan水平均无明显统计学意义上的差别。4、血清Endocan与血糖、CIMT、血脂:血清Endocan水平在糖尿病组及非糖尿病组间、内膜增厚组及非内膜增厚组间均不具有显著差别(P>0.05)。不同血清Endocan水平间血脂谱水平均不存在差别,同时血清Endocan与血脂谱也不存在相关性(P>0.05)。结论社区中老年人群血清Endocan水平为151.39(102.84,215.32)pg/ml。血清Endocan水平与腰围呈负相关,与性别、年龄、血糖、血脂、CIMT无关。血清Endocan水平在总人群中随着血压的变化呈现非线性趋势,表现为在正常血压人群到正常高值血压人群中,血清Endocan水平呈上升趋势;在正常高值血压人群到1级高血压人群中,血清Endocan水平下降,在1级及2级高血压人群到3级高血压人群中,血清Endocan水平再次呈上升趋势。

关键词： Endocan 心血管危险因素中老年人社区

MIF、Vaspin及Endocan与稳定型心绞痛合并高血压发生MACE的相关性

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分子诊断与治疗杂志 2022年第2期14卷 325-328页

作者：王尚明马丽英杨璐唐山弘慈医院心内二科河北唐山063000 唐山弘慈医院呼吸内科河北唐山063000

目的分析巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)、内皮细胞特异分子-1(Endocan)、脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(Vaspin)水平与稳定型心绞痛(SAP)合并高血压发生主要不良心血管事件(MACE)的相关性。方法选取2020年1月至2021年1月唐山弘慈医院收治的... 详细信息

目的分析巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)、内皮细胞特异分子-1(Endocan)、脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(Vaspin)水平与稳定型心绞痛(SAP)合并高血压发生主要不良心血管事件(MACE)的相关性。方法选取2020年1月至2021年1月唐山弘慈医院收治的124例SAP合并高血压患者临床资料(观察组),另选取115例单纯SAP(对照组)。比较两组MIF、Vaspin、Endocan水平;比较两组MACE发生率;分析影响MACE发生的危险因素。结果观察组患者MIF、Endocan水平明显高于对照组,Vaspin水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P0.05),发生MACE患者FPG、TG、TC、LDL-C、MIF、Endocan水平明显高于未发生MACE组,Vaspin低于未发生MACE组,差异有统计学意义(PEndocan、Vaspin为影响SAP合并高血压患者发生MACE的独立危险因素(PEndocan水平与SAP合并高血压发生MACE密切相关,或可作为预测MACE发生的新型分子标志物,对患者预后风险也有重要的参考价值。

关键词： MIF Vaspin Endocan 稳定型心绞痛合并高血压不良心血管事件

Endocan、VEGF、MMP-9在卒中垂体瘤中的表达及意义

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中华神经医学杂志 2018年第3期17卷 222-226页

作者：于明圣阎晓玲张学斌黄楹天津市环湖医院神经外科 300350 天津市环湖医院病理科 300350

目的探讨Endocan、血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）蛋白在垂体瘤组织中的表达情况及其临床意义。方法（1）选取天津市环湖医院神经外科自2005年1月至2014年12月手术切除并经病理检测证实的垂体瘤标本80例（病理科... 详细信息

目的探讨Endocan、血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）蛋白在垂体瘤组织中的表达情况及其临床意义。方法（1）选取天津市环湖医院神经外科自2005年1月至2014年12月手术切除并经病理检测证实的垂体瘤标本80例（病理科存档的石蜡包埋标本），其中发生垂体瘤卒中40例（卒中组），未发生卒中40例（非卒中组）。免疫组织化学染色检测标本Endocan、VEGF、MMP-9蛋白的表达。（2）选取天津市环湖医院神经外科自2015年1月至2015年10月手术切除并经病理检测证实的垂体瘤标本20例（新鲜组织标本），其中发生垂体瘤卒中10例（卒中组1，未发生卒中10例（非卒中组）。RT-PCR检测标本Endocanm RNA表达。结果（1）卒中组标本中endoan、VEGF、MMP-9蛋白阳性表达分别为31、33、30例；非卒中组标本中三者阳性表达分别为24、26、20例。与非卒中组比较，卒中组标本中endoan、VEGF、MMP-9蛋白的免疫反应分值（IRS）均较高，差异均有统计学意义（P〈0．05）；卒中组标本中Endocan与VEGF蛋白的表达呈正相关关系（r=0．555．P=0．000），Endocan与MMP-9蛋白的表达呈正相关关系（r=0．423，P=0．006）；VEGF与MMP，9蛋白的表达呈正相关关系（r=0．621，P=0．000）；（2）卒中组标本中Endocan mRNA的表达[（17．53±8．95）×10^-3]高于非卒中组[（4．67±3．03）×10^-3]，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论Endocan、VEGF、MMP-9蛋白在垂体瘤卒中的发生过程中发挥了重要作用。

关键词：垂体瘤卒中 Endocan 血管内皮生长因子基质金属蛋白酶-9