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限制性内切酶KpnⅠ和ecorⅰ双酶切条件的优化

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吉林医药学院学报 2014年第4期35卷 250-253页

作者：朱杭飞姜晓明藏雨轩张雲乔向国艳张中新郝峰吉林医药学院生物化学检验教研室吉林吉林132013 吉林医药学院免疫教研室吉林吉林132013

目的探讨KpnⅠ和ecorⅰ双酶切的优化条件。方法 KpnⅠ和ecorⅰ不同的酶切体系,酶切含有上述两种限制性内切酶酶切位点的载体pEGFP-Ano2,DNA琼脂糖凝胶电泳检测酶切结果,以获取KpnⅠ和ecorⅰ双酶切的优化条件。结果 50μL酶切体系,KpnⅠ... 详细信息

目的探讨KpnⅠ和ecorⅰ双酶切的优化条件。方法 KpnⅠ和ecorⅰ不同的酶切体系,酶切含有上述两种限制性内切酶酶切位点的载体pEGFP-Ano2,DNA琼脂糖凝胶电泳检测酶切结果,以获取KpnⅠ和ecorⅰ双酶切的优化条件。结果 50μL酶切体系,KpnⅠ和ecorⅰ双酶切的适宜条件:首先在1×L缓冲液情况下,应用1μL KpnⅠ酶切1μg质粒1 h,再加入1×H缓冲液和0.01%BSA,应用1μL ecorⅰ继续酶切1 h。结论获取KpnⅠ和ecorⅰ双酶切质粒的适宜条件,为今后应用KpnⅠ和ecorⅰ双酶切实验提供科学的参考依据。

关键词： KpnⅠ ecorⅰ 双酶切优化 DNA琼脂糖凝胶电泳

胃癌患者L-myc基因的ecor Ⅰ多态性

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世界感染杂志 2003年第2期3卷 115-115页

作者：邱毓马霜潘伯荣

L-myc是一个核癌基因，它在癌生成的晚期被激活。有记录表明L-myc基因的ecorⅰ多态性与个体对恶性肿瘤的易感性有关。一些研究提示癌症患者出现S等位基因和转移危险性较高相关。尽管已有很多研究，但是此情况是否见于胃癌仍不清楚。我... 详细信息

L-myc是一个核癌基因，它在癌生成的晚期被激活。有记录表明L-myc基因的ecorⅰ多态性与个体对恶性肿瘤的易感性有关。一些研究提示癌症患者出现S等位基因和转移危险性较高相关。尽管已有很多研究，但是此情况是否见于胃癌仍不清楚。我们研究的目的是明确白人中L-myc多态性是否与胃癌的易感性相关，并且就癌组织学、分期和位置以及患者的年龄及性别评价胃癌患者中S等位基因的存在。我们研究100名胃癌患者和65a健康人。

关键词：胃癌 L-myc基因 ecorⅰ 多态性

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限制性内切酶ecorI的分离纯化

军事医学科学院院刊 1995年第2期19卷 132-135页

作者：池木根军事医学科学院毒物药物研究所

以大肠杆菌ＲＹ＿（１３），Ｋ＿（１２１１００）为酶源菌株，采用聚乙烯亚胺分离纯化了限制性内切酶ＥｃｏＲＩ，并对λ－ＤＮＡ有５个专一的切割位点，将λ－ＤＮＡ切割成６个分子量不同的片段，经琼脂糖凝胶电泳后，可得６个迁移位... 详细信息

以大肠杆菌ＲＹ＿（１３），Ｋ＿（１２１１００）为酶源菌株，采用聚乙烯亚胺分离纯化了限制性内切酶ＥｃｏＲＩ，并对λ－ＤＮＡ有５个专一的切割位点，将λ－ＤＮＡ切割成６个分子量不同的片段，经琼脂糖凝胶电泳后，可得６个迁移位置不同的条带。这些特性使它特别适合于作为ＤＮＡ结构功能等方面研究的工具酶。在遗传工程研究中，限制酶更起了决定性作用。

关键词：内切酶限制性内切酶 ecorⅰ 聚乙烯亚胺纯化

基因重组免疫毒素白细胞介素18-PE38融合基因治疗类风湿性关节炎的初步研究

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中国修复重建外科杂志 2005年第4期19卷 306-309页

作者：吴瑕杨春蕾张林李虹陶大昌屈艺四川大学基础医学与法医学院生物化学与分子生物学实验室成都610041 四川大学基础医学与法医学院生命科学院医学细胞生物学教研室成都610041 华西医院生物治疗国家重点实验室四川大学基础医学与法医学院病原生物学教研室成都610041

目的　构建白细胞介素18(interleukin18,IL- 18) - PE38融合基因的真核表达载体,并研究其在小鼠软骨细胞及3T3细胞中的表达,探讨类风湿性关节炎的基因治疗方法。　方法　经限制性内切酶双酶切从质粒PRKL4 5 9K- IL18- PE38中获取IL- 18-... 详细信息

目的　构建白细胞介素18(interleukin18,IL- 18) - PE38融合基因的真核表达载体,并研究其在小鼠软骨细胞及3T3细胞中的表达,探讨类风湿性关节炎的基因治疗方法。　方法　经限制性内切酶双酶切从质粒PRKL4 5 9K- IL18- PE38中获取IL- 18- PE38融合基因,将其与真核表达载体Psec Tag2 B连接,转化感受态菌,挑取单克隆培养并提取质粒,Eco R 单酶切鉴定。脂质体转染法将构建的真核表达载体转染入3T3细胞及小鼠软骨细胞中,分别设置空载体对照,通过荧光免疫细胞化学法鉴定转染后瞬时表达情况。　结果　Eco R 单酶切后电泳鉴定显示,所构建的真核表达载体Psec Tag2 B- IL- 18- PE38片段长度约为6 0 0 0 bp。荧光免疫细胞化学法、荧光显微镜摄片均显示转染融合基因组荧光表达强,空载体对照组荧光表达微弱。　结论　IL- 18- PE38融合基因真核表达载体构建成功,并在小鼠软骨细胞及3T3细胞中表达,为类风湿性关节炎的基因治疗研究奠定基础。

关键词：类风湿性关节炎白细胞介素融合基因治疗重组免疫毒素免疫细胞化学法步研究 PsecTag2B 真核表达载体构建 3T3细胞 ecorⅰ 软骨细胞基因治疗方法限制性内切酶脂质体转染法荧光显微镜克隆培养酶切鉴定表达情况

重组人白细胞介素10在毕赤酵母中的表达及生物学活性测定

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中华微生物学和免疫学杂志 2005年第9期25卷 773-776页

作者：井申荣邹全明曾韦锟毛旭虎刘开云第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室

目的在毕赤酵母中分泌表达具有生物学活性的重组人白细胞介素10(rhIL-10),用于IL-10的生理功能研究和动物试验。方法通过PCR扩增IL-10基因,插入到重组质粒α/pUC18的α因子信号序列的XhoⅠ和ecorⅰ酶切位点处,再将融合基因αIL-10重组... 详细信息

目的在毕赤酵母中分泌表达具有生物学活性的重组人白细胞介素10(rhIL-10),用于IL-10的生理功能研究和动物试验。方法通过PCR扩增IL-10基因,插入到重组质粒α/pUC18的α因子信号序列的XhoⅠ和ecorⅰ酶切位点处,再将融合基因αIL-10重组到表达质粒pPIC9K的BamHⅠ和ecorⅰ之间,SalⅠ酶切线性化重组质粒IL-10/pPIC9K,电穿孔转化毕赤酵母,营养缺陷型培养基MD和G418筛选含高拷贝表达盒的酵母转化子,PCR鉴定是否含有目的基因IL-10,甲醇诱导rhIL-10的表达,SDS-PAGE和Westernblot鉴定目的蛋白,用ELISA定量测定及MC/9细胞分析IL-10生物学活性。结果成功构建了重组表达质粒IL-10/pPIC9K,获得了4个含IL-10基因的高拷贝毕赤酵母转化子,甲醇诱导后,在摇瓶水平的IL-10表达量为(0.627±0.09)mg/L,比活性为1.5×105U/mg。结论毕赤酵母分泌表达的IL-10具有良好的生物学活性。

关键词：白细胞介素10 毕赤酵母分泌表达生物学活性重组人白细胞介素10 生物学活性测定毕赤酵母 IL-10基因质粒pPIC9K SDS-PAGE rhIL-10 Western ecorⅰ

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本刊外文书写正斜体的要求

解放军医学杂志 2011年第9期36卷 896-896页

生物学中的属名、种名（包括亚种、变种）用拉丁文斜体,属的首字母大写,余用小写,如：Helicobacter pylori,Escherichiacoli。属以上的名称用拉丁文正体。限制性内切酶前3个字母用斜体,后面的字母和编号用正体,如：ecorⅰ,HindⅢ,XbaⅠ,... 详细信息

生物学中的属名、种名（包括亚种、变种）用拉丁文斜体,属的首字母大写,余用小写,如：Helicobacter pylori,Escherichiacoli。属以上的名称用拉丁文正体。限制性内切酶前3个字母用斜体,后面的字母和编号用正体,如：ecorⅰ,HindⅢ,XbaⅠ,Sau3AⅠ。

关键词：书写外文限制性内切酶 ecorⅰ HindⅢ XbaⅠ 生物学拉丁文

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本刊外文书写正斜体的要求

解放军医学杂志 2011年第8期36卷 807-807页

生物学中的属名、种名（包括亚种、变种）用拉丁文斜体,属的首字母大写,余用小写,如：Helicobacter pylori,Escherichiacoli。属以上的名称用拉丁文正体。限制性内切酶前3个字母用斜体,后面的字母和编号用正体,如：ecorⅰ,HindⅢ,XbaⅠ,Sau3AⅠ。耐热DNA聚合酶用斜体表示,首字母大写,如：Taq、Pfu、TthDNA聚合酶。

关键词：耐热DNA聚合酶书写外文限制性内切酶 ecorⅰ HindⅢ XbaⅠ 生物学

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本刊外文书写正斜体的要求

解放军医学杂志 2010年第9期35卷 1073-1073页

生物学中的属名、种名（包括亚种、变种）用拉丁文斜体,属的首字母大写,余用小写,如：Helicobacter pylori,Escherichia coli。属以上的名称用拉丁文正体。限制性内切酶前3个字母用斜体,后面的字母和编号用正体,如：ecorⅰ,HindⅢ,XbaⅠ... 详细信息

生物学中的属名、种名（包括亚种、变种）用拉丁文斜体,属的首字母大写,余用小写,如：Helicobacter pylori,Escherichia coli。属以上的名称用拉丁文正体。限制性内切酶前3个字母用斜体,后面的字母和编号用正体,如：ecorⅰ,HindⅢ,XbaⅠ,Sau3AⅠ。

关键词：书写外文限制性内切酶 ecorⅰ HindⅢ XbaⅠ 生物学拉丁文

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读者·作者·编者

解放军医学杂志 2011年第6期36卷 595-595页

本刊外文书写正斜体的要求生物学中的属名、种名（包括亚种、变种）用拉丁文斜体,属的首字母大写,余用小写,如：Helicobacter pylori,Escherichiacoli。属以上的名称用拉丁文正体。限制性内切酶前3个字母用斜体,后面的字母和编号用正体... 详细信息

本刊外文书写正斜体的要求生物学中的属名、种名（包括亚种、变种）用拉丁文斜体,属的首字母大写,余用小写,如：Helicobacter pylori,Escherichiacoli。属以上的名称用拉丁文正体。限制性内切酶前3个字母用斜体,后面的字母和编号用正体,如：ecorⅰ,HindⅢ,XbaⅠ,Sau3AⅠ。

关键词：编者作者读者限制性内切酶 ecorⅰ HindⅢ XbaⅠ 生物学