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Lactobacillus salivarius alleviates inflammation via NF-κB signaling in etec k88-induced IPEC-J2 cells

Journal of Animal Science and Biotechnology 2021年第2期12卷 778-790页

作者： Jiayun Qiao Zeyang Sun Dongmei Liang Haihua Li College of Life Sciences Tianjin Key Laboratory of Animal and Plant ResistanceTianjin Normal UniversityTianjin 300387People’s Republic of China.2 ndry College of Animal Science and Veterinary MedicineTianjin Agricultural University22 Jinjing RoadTianjin 300384People’s Republic of China.

Background:Enterotoxigenic Escherichia coli(etec)k88 commonly colonize in the small intestine and keep releasing enterotoxins to impair the intestinal barrier function and trigger inflammatory *** Lactobacillus salivarius(***)has been reported to enhance intestinal health,it remains to be seen whether there is a functional role of *** in intestinal inflammatory response in intestinal porcine epithelial cell line(IPEC-J2)when stimulated with etec *** the present study,IPEC-J2 cells were first treated with *** followed by the stimulation of etec k88 for distinct time *** k88 adherent status,pattern recognition receptors(PRRs)mRNA,mitogen-activated protein kinase(MAPk)and nuclear factor-κB(NF-κB)activation,the release of pro-inflammation cytokines and cell integrity were ***:Aside from an inhibited adhesion of etec k88 to IPEC-J2 cells,*** was capable of remarkably attenuating the expression levels of interleukin(IL)-1β,tumor necrosis factor-α(TNF-α),IL-8,Toll-like receptor(TLR)4,nucleotide-binding oligomerization domain(NOD)-like receptor pyrin domain-containing protein(NLRP)3 and *** alternation was accompanied by a significantly decreased phosphorylation of p38 MAPk and p65 NF-κB during etec k88 infection with *** *** blot analysis revealed that *** increased the expression levels of zona occludens 1(ZO-1)and occludin(Petec k88-infected IPEC-J2 *** with etec k88-infected groups,the addition of *** as well as extra inhibitors for MAPks and NF-κB to etec k88-infected IPEC-J2 cells had the capability to reduce pro-inflammatory ***:Collectively,our results suggest that *** might reduce inflammation-related cytokines through attenuating phosphorylation of p38 MAPk and blocking the NF-κB signaling ***,*** displayed a potency in the enhancement of IPEC-J2 cell integrity.

关键词： etec k88 Inflammatory response IPEC-J2 L.salivarius

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戊糖片球菌L1对etec k88感染仔猪腹泻的预防作用及机制研究

戊糖片球菌L1对ETEC K88感染仔猪腹泻的预防作用及机制研究

引用

作者：殷桦娟云南农业大学

学位级别：硕士

仔猪是生猪养殖的核心,其健康状况对后期的生长发育产生极其重要的影响。大肠杆菌性腹泻是仔猪腹泻的常见病症,产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,etec)是引起仔猪腹泻的最主要致病菌之一。随着饲料端全面“禁抗”,开... 详细信息

仔猪是生猪养殖的核心,其健康状况对后期的生长发育产生极其重要的影响。大肠杆菌性腹泻是仔猪腹泻的常见病症,产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,etec)是引起仔猪腹泻的最主要致病菌之一。随着饲料端全面“禁抗”,开发饲用抗生素替代品迫在眉睫,目前戊糖片球菌对etec感染仔猪腹泻的预防作用鲜见报道。本研究以断奶长白杂交仔猪为研究对象,研究戊糖片球菌L1对etec k88感染的断奶仔猪粪便评分及肠黏膜炎症基因表达、炎性细胞因子分泌水平和NF-κB信号通路的抑制作用机制。主要研究内容及结果如下:根据体重、窝别、性别将40头21日龄断奶长白杂交仔猪随机分为Control组、etec组、戊糖片球菌L1+etec组和戊糖片球菌L1组。进行粪便评分并采用qRT-PCR技术检测空肠和回肠黏膜炎性细胞因子和NF-κB信号通路关键基因的mRNA表达量,研究戊糖片球菌L1对etec k88感染断奶仔猪粪便评分以及空肠和回肠黏膜炎症基因表达的影响。结果显示:与Control组相比,etec组断奶仔猪粪便评分和空肠和回肠黏膜炎症基因IL-1β、IL-6、TNF-α、NFkB1、NFkB2、RELA、RELB和NFkBIA的mRNA表达水平显著增加(PkB1、NFkB2、RELA、RELB和NFkBIA的mRNA表达水平无显著变化(P>0.05);与etec组比较,戊糖片球菌L1+etec组断奶仔猪粪便评分和空肠和回肠黏膜IL-1β、IL-6、TNF-α、NFkB2、RELA、RELB和NFkBIA的mRNA表达水平显著降低(PkB1 mRNA表达水平显著降低(Petec感染断奶仔猪粪便评分,抑制了肠黏膜炎性细胞因子的mRNA表达水平,降低了NF-κB信号通路的mRNA表达水平。采用ELISA技术检测空肠和回肠黏膜炎性细胞因子和sIgA蛋白表达水平,研究戊糖片球菌L1对etec k88感染断奶空肠和回肠黏膜炎性细胞因子及sIgA分泌水平的影响。结果显示:与Control组相比,etec组空肠和回肠黏膜炎性细胞因子IL-1、IL-6和TNF-α的分泌水平显著增加(P0.05);与etec组比较,戊糖片球菌L1+etec组空肠和回肠黏膜炎性细胞因子IL-1、IL-6和TNF-α的分泌水平显著降低(Petec感染断奶仔猪肠黏膜炎性细胞因子分泌,促进了sIgA产生。ELISA技术检测空肠和回肠黏膜核蛋白NF-κB与DNA结合活性,Western blot技术检测空肠和回肠黏膜总蛋白NF-κB核内信号、抑制蛋白和关键上游激酶磷酸化水平,研究戊糖片球菌L1对etec k88感染断奶仔猪肠黏膜NF-κB炎症信号通路活化的影响。结果显示:与Control组相比,etec组空肠和回肠黏膜NF-κB与DNA结合活性、p-p65/p65、pIκBα/IκBα、pERk1/2/ERk1/2和pTAk1/TAk1显著增加(Pk1/2/ERk1/2和pTAk1/TAk1无显著变化(P>0.05);与etec组比较,戊糖片球菌L1+etec组空肠和回肠黏膜NF-κB与DNA结合活性、p-p65/p65、pIκBα/IκBα和pTAk1/TAk1显著降低(Pk1/2/ERk1/2显著降低(Petec k88感染仔猪肠黏膜NF-κB与DNA结合活性、NF-κB p65亚基核转位、抑制蛋白IκBα降解和上游激酶磷酸化,阻断NF-κB信号通路活化。综上所述,戊糖片球菌L1抑制了etec k88感染的仔猪肠黏膜炎症基因和NF-κB炎症信号通路相关基因mRNA表达水平,减少炎性细胞因子分泌,增加sIgA分泌水平;通过抑制NF-κB与DNA结合活性、NF-κB p65磷酸化水平、抑制蛋白IκBα降解和上游激酶磷酸化,阻断NF-κB信号通路活化,进而抑制肠黏膜炎症反应,降低仔猪粪便评分,预防仔猪腹泻。揭示了戊糖片球菌预防断奶仔猪etec腹泻的作用机理,为微生物饲料添加剂预防etec感染仔猪腹泻提供了一定的科学理论依据。

关键词：微生物饲料添加剂戊糖片球菌 etec k88 仔猪腹泻炎症因子 NF-κB

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重组etec k88干酪乳杆菌口服液的研制及其临床效果的初步研究

重组ETEC K88干酪乳杆菌口服液的研制及其临床效果的初步研究

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作者：谭君黑龙江八一农垦大学

学位级别：硕士

重组etec k88干酪乳杆菌是一种用来预防仔猪大肠杆菌腹泻的活载体口服疫苗候选菌株，并兼有乳酸菌的益生功能,在体内能够发挥许多生理功能。乳清蛋白不仅是一种营养丰富的蛋白质原料，而且具有许多功能性作用。将二者优势结合起来以求... 详细信息

重组etec k88干酪乳杆菌是一种用来预防仔猪大肠杆菌腹泻的活载体口服疫苗候选菌株，并兼有乳酸菌的益生功能,在体内能够发挥许多生理功能。乳清蛋白不仅是一种营养丰富的蛋白质原料，而且具有许多功能性作用。将二者优势结合起来以求研制出一种兼具预防和营养功能畜用口服液制剂。因此本文对乳清浓缩蛋白制备重组etec k88乳酸菌口服液的生产工艺进行了初步研究，并对重组菌口服液的免疫效果进行了本体靶动物临床试验，为工业化生产预防仔猪腹泻口服液疫苗提供必要理论和技术基础。本试验对重组干酪乳杆菌代谢产物的抑菌效果进行了研究。利用牛津杯法研究了干酪乳杆菌代谢产物在不同pH值、热稳定性和胃蛋白酶处理条件下，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑制效果。结果表明重组乳杆菌的代谢产物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌均有明显抑制作用，在pH值2.0～4.0时有抑菌活性，并且代谢产物对热稳定，其活性不被蛋白酶破坏。通过单因素试验考量了接种量、起始pH值、培养方式和培养基浓度及有机酸对etec k88基因工程干酪乳杆菌生长繁殖的影响。条件优化后培养条件：培养基浓度为4%，接种量4%，间接接种方式，培养基初始pH值6.6，转速80r/min，进行5次重复实验得到重组菌活菌数的平均实测值为5.9×109cfu/mL。对重组菌口服液在存放过程中的稳定性和活菌的变化情况进行检测,结果表明在4℃的条件下，培养重组菌后乳清蛋白培养基可以延长重组菌的保存时间，且外源基因表达稳定。用重组菌口服液制剂饲喂哺乳仔猪和妊娠母猪，定期采集免疫仔猪的血液、粪便和免疫母猪的初乳和乳汁，利用间接ELISA法检测血清中IgG、IgA抗体、以及乳汁和粪便中特异性slgA抗体水平。结果显示，新生仔猪连续灌服5d和10d重组菌制剂后，检测到血清中含有特异性IgG、IgA，粪便中也检测到特异性slgA抗体，这表明重组菌能够诱导仔猪产生系统免疫和黏膜免疫。妊娠母猪口服重组菌后，乳汁中sIgA抗体水平也有明显升高。通过临床观察，无论是连续口服5天还是10天，口服免疫重组菌制剂都可以有效的预防仔猪etec腹泻的发生。另外，该重组菌制剂在促进仔猪的生长发育和治疗腹泻方面具有较好的效果。

关键词： etec k88 干酪乳杆菌乳清蛋白猪

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布拉迪酵母与酵母衍生物对大肠杆菌k88攻毒仔猪生长性能、腹泻率和肠道健康的影响

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中国畜牧杂志 2024年第7期60卷 289-294页

作者：黎欢樊雨昕黄俊谯仕彦杨凤娟中国农业大学动物科学技术学院北京100193

本试验旨在探究日粮中添加布拉迪酵母与酵母衍生物对产肠毒素大肠杆菌k88(etec k88)诱导的断奶腹泻仔猪生长性能、腹泻率和肠道健康的影响。选取18头断奶仔猪,随机分为未攻毒对照组、攻毒对照组和攻毒+酵母组,每组6头。未攻毒对照组和... 详细信息

本试验旨在探究日粮中添加布拉迪酵母与酵母衍生物对产肠毒素大肠杆菌k88(etec k88)诱导的断奶腹泻仔猪生长性能、腹泻率和肠道健康的影响。选取18头断奶仔猪,随机分为未攻毒对照组、攻毒对照组和攻毒+酵母组,每组6头。未攻毒对照组和攻毒对照组仔猪饲喂基础日粮,攻毒+酵母组仔猪饲喂添加200 mg/kg布拉迪酵母和800 mg/kg酵母衍生物的基础日粮。在试验第1天,攻毒对照组和攻毒+酵母组每头仔猪灌服10 mL的etec k88细菌悬液(1.0×10^(9) CFU/mL),未攻毒对照组每头仔猪灌服等体积无菌生理盐水。试验共7 d。结果表明:与未攻毒对照组相比,etec k88灌服导致断奶仔猪生长性能下降(Pkg布拉迪酵母和800 mg/kg酵母衍生物能有效缓解etec k88诱导的断奶仔猪腹泻,减轻肠道损伤,改善肠道功能。

关键词：布拉迪酵母酵母衍生物 etec k88 生长性能肠道健康断奶仔猪

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Protocatechuic acid and quercetin attenuate etec-caused IPEC-1 cell inflammation and injury associated with inhibition of necroptosis and pyroptosis signaling pathways

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Journal of Animal Science and Biotechnology 2023年第4期14卷 1551-1568页

作者： kan Xiao Mohan Zhou Qingqing Lv Pengwei He Xu Qin Dan Wang Jiangchao Zhao Yulan Liu Hubei key Laboratory of Animal Nutrition and Feed Science Wuhan Polytechnic UniversityWuhan 430023People’s Republic of China Department of Animal Science Division of AgricultureUniversity of ArkansasFayettevilleAR 72701USA

Background:Necroptosis and pyroptosis are newly identified forms of programmed cell death,which play a vital role in development of many gastrointestinal *** plant polyphenols have been reported to protect intestinal health,it is still unclear whether there is a beneficial role of plant polyphenols in modulating necroptosis and pyroptosis in intestinal porcine epithelial cell line(IPEC-1)infected with enterotoxigenic Escherichia coli(etec)*** research was conducted to explore whether plant polyphenols including protocatechuic acid(PCA)and quercetin(Que),attenuated inflammation and injury of IPEC-1 caused by etec k88 through regulating necroptosis and pyroptosis signaling ***:IPEC-1 cells were treated with PCA(40μmol/L)or Que(10μmol/L)in the presence or absence of etec ***:PCA and Que decreased etec k88 adhesion and endotoxin level(Petec *** and Que improved transepithelial electrical resistance(TEER)(Petec *** and Que also declined cell necrosis ratio(Pkin(IL)-6 and IL-8(Pke receptors 4(TLR4)and its downstream signals(Petec *** and Que down-regulated protein abundance of total receptor interacting protein kinase 1(t-RIP1),phosphorylated-RIP1(p-RIP1),p-RIP1/t-RIP1,t-RIP3,p-RIP3,mixed lineage kinase domain-like protein(MLkL),p-MLkL,dynamin-related protein 1(DRP1),phosphoglycerate mutase 5(PGAM5)and high mobility group box 1(HMGB1)(Petec infection.M

关键词： Cell damage etec k88 Intestinal inflammation Necroptosis Protocatechuic acid Pyroptosis Quercetin

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柠檬酸介导黑水虻虫粉对etec诱导仔猪肠道屏障损伤和炎症反应的保护作用

柠檬酸介导黑水虻虫粉对ETEC诱导仔猪肠道屏障损伤和炎症反应的保...

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作者：刘明明吉林大学

学位级别：硕士

由于环境和饲料的变化,新生仔猪断奶后容易出现免疫力低下和肠道屏障损伤的现象。产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,etec)是引起该阶段仔猪生病的主要病原体。黑水虻虫粉因其高营养价值和免疫调节作用而广泛应用于畜... 详细信息

由于环境和饲料的变化,新生仔猪断奶后容易出现免疫力低下和肠道屏障损伤的现象。产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,etec)是引起该阶段仔猪生病的主要病原体。黑水虻虫粉因其高营养价值和免疫调节作用而广泛应用于畜禽生产,其可通过改变细菌组成及其代谢产物来增强育肥猪结肠黏膜的免疫稳态。然而,关于黑水虻虫粉对仔猪断奶过程保护机制的研究报道较少,特别是对致病菌入侵下断奶仔猪的保护机制。因此,本文使用etec k88菌株感染断奶仔猪,探究前期饲料中添加不同剂量的黑水虻虫粉对etec k88感染仔猪的保护作用和具体机制。本实验共选取12头断奶仔猪,初始平均体重为7.68?0.26 kg,随机分为3组,每组4头猪。实验分组为3个处理组,分别是C组(etec k88感染)、T1组(4%黑水虻虫粉+etec k88感染)和T2组(8%黑水虻虫粉+etec k88感染)。仔猪饲料中分别添加0%、4%和8%的黑水虻虫粉(C组、T1组、T2组)饲喂28天,在第29天使用灌胃导管将etec k88(5×10 CFU/m L)灌入仔猪体内,第32天进行仔猪前腔静脉采血,用于代谢物检测。取回肠组织一部分放入4%的甲醛溶液中,用于后续制作切片;另一部分刮取肠黏膜进行相关蛋白检测。研究结果表明,同样在etec k88感染的情况下,添加黑水虻虫粉的两组仔猪血清中免疫球蛋白Ig A和Ig G的水平显著升高,且回肠发育形态更完整、紧密连接蛋白表达量更高、促炎因子水平和细胞凋亡百分比均显著下降。因此,黑水虻虫粉的添加增强了仔猪的免疫性能并且抑制了etec k88感染下仔猪回肠上皮细胞的凋亡和炎症反应的发生。血清代谢组学分析发现,代谢物柠檬酸(Citric acid,CA)与黑水虻虫粉的添加剂量呈显著正相关。研究结果表明,CA可以刺激小鼠腹腔巨噬细胞(RAW264.7)分泌BAFF、IL-10等与B淋巴细胞活化有关细胞因子,提高小鼠脾脏中CD138CD19细胞中Ig G、Ig A细胞的比例。因此,黑水虻虫粉的添加可有效提高血清中CA的含量,发挥免疫调节作用,该结果也与黑水虻虫粉添加后仔猪血清中Ig A和Ig G的升高一致。进一步研究表明CA可以抑制猪回肠上皮细胞(IPI-2I)中的炎症反应和细胞凋亡,在etec k88感染的小鼠模型中也得到了相似的结果。因此,CA在维持肠道屏障的完整性中发挥重要作用,充分解释了黑水虻虫粉添加后保护仔猪肠道屏障免受etec k88损伤的原因。粪便16S测序结果和血清代谢组学联合分析发现,CA的含量与肠道菌Massilia呈显著正相关。我们发现Massilia的发酵产物中含有大量的CA。这提示我们,仔猪体内CA的增多可能与肠道菌Massilia有关。综上所述,黑水虻虫粉对etec k88诱导仔猪肠道屏障损伤的保护作用主要通过有效提高血清中CA的含量,CA可促进B淋巴细胞分化、抑制炎症反应并具有抗上皮细胞凋亡特性。该结果为仔猪感染其他致病性微生物所致疾病的治疗提供了新的思路。

关键词：黑水虻虫粉断奶仔猪 etec k88 柠檬酸 B淋巴细胞分化肠道屏障

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黑水虻幼虫粉对染菌环境中断奶仔猪生长性能和肠道屏障功能的影响

黑水虻幼虫粉对染菌环境中断奶仔猪生长性能和肠道屏障功能的影响

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作者：唐青松贵州大学

学位级别：硕士

我国蛋白饲料资源匮乏及价格居高不下是制约生猪养殖可持续发展的重要因素,当前迫切需要寻找安全、有效和可持续的新型饲料蛋白。黑水虻(***)幼虫含有较高的粗蛋白质和粗脂肪,且富含抗菌肽(AMPs)等有益物质,在替代饲料蛋白方面极具发展... 详细信息

我国蛋白饲料资源匮乏及价格居高不下是制约生猪养殖可持续发展的重要因素,当前迫切需要寻找安全、有效和可持续的新型饲料蛋白。黑水虻(***)幼虫含有较高的粗蛋白质和粗脂肪,且富含抗菌肽(AMPs)等有益物质,在替代饲料蛋白方面极具发展潜力。本论文旨在评价在产肠毒素大肠杆菌(etec)k88环境中黑水虻幼虫粉替代鱼粉对断奶仔猪生长性能和肠道屏障功能的影响。第一部分:旨在研究etec k88环境中黑水虻幼虫粉替代鱼粉对断奶仔猪生长性能和腹泻的影响。选取72头28±2日龄三元杂(杜×长×大)断奶仔猪(体重8.44±0.04 kg),随机分为三个组:阴性对照组(NC)饲喂含3%鱼粉的基础饲粮;阳性对照组(PC)在基础饲粮中添加1 445 mg zinc/kg氧化锌;黑水虻幼虫粉组(HI)在基础饲粮中用黑水虻幼虫粉完全替代鱼粉,每组6个重复,每个重复4头仔猪。猪舍中均匀喷洒6×10～8 CFU/m L的etec k88模拟染菌环境。试验期28天。试验结束计算平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)、重料比(G:F)、腹泻率和腹泻指数。结果显示:1)试验第1～14天,与NC组相比,HI组和PC组显著提高仔猪ADG和ADFI(Petec k88环境中黑水虻幼虫粉替代鱼粉对断奶仔猪肠道形态和肠道屏障功能的影响。结果显示:1)HI组空肠绒毛高度显著高于NC组和PC组,隐窝深度显著低于NC组,且绒毛高度与隐窝深度比值显著高于NC组和PC组(Pk信号通路改善肠道免疫稳态的可能机理。结果表明:1)与NC组相比,HI组显著提高回肠和结肠沉默信息调节因子1(SIRT1),显著降低结肠组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3)和HDAC7的蛋白表达,显著提高回肠组蛋白H3第27赖氨酸(ac H3k27)和结肠组蛋白H3第9赖氨酸(ac H3k9)、组蛋白H3丝氨酸10磷酸化(p H3S10)的蛋白表达(Pk9的蛋白表达(Pk/MAPk的比值,以及回肠和结肠p-NF-κB/NF-κB的比值(P<0.05);与NC组相比,TLR2的蛋白表

关键词：黑水虻幼虫粉断奶仔猪 etec k88 肠道屏障功能组蛋白乙酰化 TLRs-NF-κB/MAPk信号通路

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核转录因子-κB/β-连环蛋白信号通路介导肠产毒性大肠杆菌引致IPEC-J2细胞损伤

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动物营养学报 2020年第12期32卷 5893-5902页

作者：窦彩霞李海花孙泽阳王倩尚智援乔家运天津师范大学生命科学学院天津市动植物抗性重点实验室天津300387 天津农学院动物科学与动物医学学院天津市农业动物繁育与健康养殖重点实验室天津300384

本试验旨在探讨肠产毒性大肠杆菌(etec)造成IPEC-J2细胞损伤的分子机制。etec k88感染、核转录因子-κB(NF-κB)抑制剂处理IPEC-J2细胞以及小干扰RNA(siRNA)沉默IPEC-J2细胞中β-连环蛋白(β-catenin)基因的表达后,采用定量PCR(qPCR)法... 详细信息

本试验旨在探讨肠产毒性大肠杆菌(etec)造成IPEC-J2细胞损伤的分子机制。etec k88感染、核转录因子-κB(NF-κB)抑制剂处理IPEC-J2细胞以及小干扰RNA(siRNA)沉默IPEC-J2细胞中β-连环蛋白(β-catenin)基因的表达后,采用定量PCR(qPCR)法检测细胞中NF-κB、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、闭锁蛋白(occludin)、Toll样受体2(TLR2)、Toll样受体4(TLR4)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和人髓细胞增生原癌基因(c-Myc)的mRNA表达量,用Western blotting法检测细胞中ZO-1、occludin的蛋白表达量和p65 NF-κB的磷酸化水平,用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)含量和乳酸脱氢酶(LDH)活性。结果表明:etec k88作用细胞6或24 h时,ZO-1和occludin的蛋白表达量以及β-catenin和c-Myc的mRNA表达量均极显著降低(Petec k88作用细胞1、3和6 h时均极显著上升(Petec k88作用细胞6和12 h时均极显著上升(Petec k88通过上调NF-κB信号通路引起炎症反应,下调β-catenin信号通路活化抑制IPEC-J2细胞的增殖,从而诱导IPEC-J2细胞损伤。

关键词： etec k88 IPEC-J2细胞 NF-κB信号通路 β-catenin信号通路

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大肠杆菌感染对仔猪β防御素及细胞因子表达的影响

大肠杆菌感染对仔猪β防御素及细胞因子表达的影响

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作者：王梦云河南农业大学

学位级别：硕士

防御素是一类具有抗菌活性的低分子多肽,对于多种病原微生物具有杀灭作用,是动物机体天然免疫的重要组成部分,同时还可以作为免疫调节剂来激活和调节机体的免疫系统。大肠杆菌性腹泻一直是影响仔猪生长的重要原因。猪内源性防御素在仔... 详细信息

防御素是一类具有抗菌活性的低分子多肽,对于多种病原微生物具有杀灭作用,是动物机体天然免疫的重要组成部分,同时还可以作为免疫调节剂来激活和调节机体的免疫系统。大肠杆菌性腹泻一直是影响仔猪生长的重要原因。猪内源性防御素在仔猪腹泻中的作用,是一个值得研究的内容。本试验主要是研究产肠毒素大肠杆菌k88(etec k88)感染对于断奶仔猪内源性β防御素及炎性细胞因子表达的影响。选用体重为7.5±0.14kg左右的三元杂交仔猪(杜洛克×长白猪×大白猪)10头,随机分成大肠杆菌感染组和空白对照组,预饲期为10天。感染组每天早上经口灌服大肠杆菌15mL/头(菌液浓度约为1 ×1011CFU/mL),感染前一天晚上停水停料,感染后两小时开始供水供料,仔猪连续感染三天后进行屠宰采集样品。观察仔猪小肠形态变化;检测免疫相关组织和肠组织中的内源性pBD-1(猪β防御素-1)、pBD-2(猪β防御素-2)、pBD-3(猪β防御素-3)以及细胞因子白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤细胞因子-a(TNFa)、白细胞介素-13(IL-13)的表达水平:ELISA法测定血清中的炎性细胞因子(IL-8、1L-13、TNF-a)的浓度。试验结果显示:与对照组相比各脏器出现了不同程度的病理变化,大肠杆菌感染后仔猪肺间质增宽:肝脏汇管区出血;肾小管水泡变性,胞浆破裂内有纤维性渗出物;脾脏弥漫性出血。大肠杆菌感染后,在十二指肠、空肠、回肠中与对照组相比绒毛长度与隐窝深度比值下降,十二指肠和回肠差异显著(p<0.05)。实时荧光定量结果显示:大肠杆菌感染后pBD-1在脾脏、胸腺、空肠中的表达量显著下降(p<0.05),而在骨髓中显著上升(p<0.05)。大肠杆菌感染后与对照组相比pBD-2在回肠中显著下降(p<0.05)。pBD-3表达量在肠系膜淋巴结、十二指肠中与对照组相比极显著下降(p<0.01)。大肠杆菌感染后在肠系膜淋巴结、腹股沟淋巴结、颈浅淋巴结中,IL-8表达水平显著下降(p<0.05),而TNF-a的表达水平在肠系膜淋巴结、腹股沟淋巴结、十二指肠、回肠中也是显著下降的(P<0.05)。大肠杆菌感染后与对照组相比极显著降低了颈浅淋巴结、十二指肠和回肠组织中IL-13的表达量(p<0.01)。结果说明大肠杆菌感染后仔猪组织中防御素的表达量没有一定的规律性。在不同组织中防御素及细胞因子的表达趋势不同,具有一定的组织差异性。

关键词： etec k88 仔猪腹泻 β防御素细胞因子

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甲酸、丙酸混合物缓解仔猪E. coil k88感染作用的研究

甲酸、丙酸混合物缓解仔猪E. coil K88感染作用的研究

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作者：许婉华南农业大学

学位级别：硕士

本研究采用etec k88对仔猪进行攻毒,通过测定相关指标旨在评价饲粮中添加甲酸、丙酸混合物对仔猪炎症反应的缓解作用,并筛选出甲酸、丙酸混合物在仔猪饲粮中的最适添加量。选取30头体重(7.5±1.0 kg)、日龄相近的三元杂断奶仔猪,随机分... 详细信息

本研究采用etec k88对仔猪进行攻毒,通过测定相关指标旨在评价饲粮中添加甲酸、丙酸混合物对仔猪炎症反应的缓解作用,并筛选出甲酸、丙酸混合物在仔猪饲粮中的最适添加量。选取30头体重(7.5±1.0 kg)、日龄相近的三元杂断奶仔猪,随机分为6个处理组:(1)对照组(CON):基础日粮;(2)抗生素组(ATB):基础日粮+50 ppm喹烯酮,75 ppm金霉素,吉他霉素50 ppm;(3)0.6%LC组:基础日粮+0.6%LC(64%甲酸和25%丙酸);(4)0.8%LC组:基础日粮+0.8%LC;(5)1.0%LC组:基础日粮+1.0%LC;(6)1.2%LC组:基础日粮+1.2%LC。每个处理组5个重复。试验期17天,前3天为适应期,第10天给仔猪攻毒,使用注射器让仔猪口服10 m L 5×10 CFU/m L etec k88,再饲喂相应日粮7天。攻毒后0 h、9 h、24 h、48 h、96 h、168 h采集仔猪血液,并对仔猪的粪便进行评分,同时测量仔猪的直肠温度。攻毒后0 h、24 h、48 h采集粪便样品,测定其微生物数量。结果表明:1.直肠温度和腹泻评分:攻毒后24 h,ATB组、0.8%LC组、1.0%LC组的直肠温度均显著低于CON组(P0.05)。攻毒后9 h,CON组粪便评分显著高于ATB组、1.0%LC组、1.2%LC组(P0.05)。4.血浆IL-1β水平:攻毒后24 h,与CON组相比,ATB组、1.0%LC组、1.2%LC组的仔猪血浆IL-1β水平均显著降低(Petec k88攻毒后,仔猪粪便大肠杆菌和乳酸杆菌数量各处理组之间差异不显著(P>0.05)。综上所述,甲酸、丙酸混合物能缓解etec k88攻毒诱导的断奶仔猪炎症反应,减少仔猪发热,并降低腹泻,且在仔猪饲粮中的最适添加量为1.0%。

关键词：甲酸丙酸仔猪 etec k88

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