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川骨片基于MAPK通路对SANFH兔erk1、erk2及P38蛋白的干预实验研究

川骨片基于MAPK通路对SANFH兔ERK1、ERK2及P38蛋白的干预实验研究

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作者：张雄卫成都中医药大学

学位级别：硕士

目的:观察和评价分析院内制剂川骨片基于MAPK通路对SANFH兔erk1、erk2及P38蛋白的作用机制,探寻一种疗效较好的治疗方法,进一步提高对本病的预防和早期治疗,最大限度改善患者自身关节功能的效果具有重要的现实意义。方法:健康雄性日本... 详细信息

目的:观察和评价分析院内制剂川骨片基于MAPK通路对SANFH兔erk1、erk2及P38蛋白的作用机制,探寻一种疗效较好的治疗方法,进一步提高对本病的预防和早期治疗,最大限度改善患者自身关节功能的效果具有重要的现实意义。方法:健康雄性日本大耳兔40只,体重2.0.5kg,由成都中医药大学实验中心提供(许可证号:川实动管第99011号),检疫合格备用。本研究动物饲养及动物实验均在成都中医药大学实验中心完成,实验动物用于取股骨头及采集腹主动脉血液,取材后采用空气栓塞法处死实验动物。动物分组:日本雄性大耳兔40只,随机分成2组,即空白组(12只)和模型组(28只),造模成功后剩余8只空白组兔和24只模型组兔。将模型组兔再随机分为模型对照组、川骨片治疗组、仙灵骨葆胶囊治疗组,各8只。观察指标:(1)肉眼观察股骨头外观、形态、关节软骨色泽等,用刀切感觉骨质硬度。(2)HE染色,于光镜下观察股骨头形态结构的变化。(3)电镜固定液处理,石蜡包埋切片,于透射电镜下观察股骨头超微结构改变。(4)采用Western blotting法检测p-erk1、p-erk2、p-P38蛋白含量。结果:1.经统计分析,空白组兔子空骨陷窝率为(14.31±1.55)%,模型组兔子空骨陷窝率为(56.07±2.14)%,两组差异具有统计意义(P蛋白表达明显上调,治疗6周后,治疗组与对照组相比P38蛋白表达均有显著降低,而川骨片治疗组与仙灵骨葆胶囊治疗组相比P38蛋白表达无统计学差异(P>0.05)。***信号转导相关蛋白表达:通过Western blot法对MAPK信号通路相关蛋白erk1,erk2的表达进行分析检测,发现对照组与空白组相比,p-erk1,p-erk2的表达明显下调。治疗组与对照组相比,p-erk1,p-erk2的表达均明显上升。同时p-erk1,p-erk2的表达在川骨片治疗组与仙灵骨葆胶囊治疗组之间无显著差异(P>0.05)。结论:1、激素能下调erk1和erk2蛋白的表达,促进股骨头缺血性坏死的发生和发展。川骨片能促进erk1和erk2蛋白的表达,抑制股骨头骨髓细胞的脂肪生成,改善股骨头微循环,降低髋关节腔压力,促进成骨细胞的生长和功能。能有效抑制股骨头缺血性坏死的发展,对治疗早期股骨头缺血性坏死起到良好作用。2、激素通过上调P38蛋白的表达,加速骨细胞凋亡,最终导致股骨头坏死。中药川骨片的有效成分还可以通过信号途径拮抗激素作用,产生反调节作用。通过下调P38蛋白基因的表达,可以减缓骨细胞凋亡,降低股骨头空骨陷窝的发生率。川骨片能促进坏死性骨细胞的修复和重建,抑制骨细胞凋亡,对激素性股骨头坏死的治疗起到早期作用。3、川骨片能促进骨髓间充质干细胞的成骨分化,有利于坏死股骨头组织的修复。川骨片对激素性股骨头缺血性坏死的治疗作用,可通过激活MAPK信号通路,调节相关因子erk1、erk2和P38的表达,从而抑制骨髓基质细胞凋亡,促进成骨细胞的修复和重建。

关键词：川骨片 SANFH兔造模 MAPK erk1蛋白 erk2蛋白 P38蛋白

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