检索结果-南通市图书馆

靶向DNA修复基因ercc6的shRNA载体构建及干扰效果评价

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

基因组学与应用生物学 2018年第7期37卷 3158-3163页

作者：徐阳胡芬左桂福王亮郑向靖孙渝祥赵丽娜华北理工大学生命科学学院唐山063210 华北理工大学材料科学与工程学院唐山063210

构建靶向ercc6基因的短发夹RNA（short hairpin RNA,sh RNA）真核表达载体,评价其对肺癌细胞ercc6表达的干扰效果。依据ercc6基因的核苷酸序列和小干扰RNA的设计原则,设计并合成靶向ercc6基因的3对ercc6-sh RNAs和1对阴性对照NC-sh RNA... 详细信息

构建靶向ercc6基因的短发夹RNA（short hairpin RNA,sh RNA）真核表达载体,评价其对肺癌细胞ercc6表达的干扰效果。依据ercc6基因的核苷酸序列和小干扰RNA的设计原则,设计并合成靶向ercc6基因的3对ercc6-sh RNAs和1对阴性对照NC-sh RNA片段,退火后连接至表达载体p GPU6/GFP/Neo中,重组载体经测序鉴定后转染肺癌SPC-A-1细胞中观察绿色荧光蛋白的表达情况,实时荧光定量PCR和Western blotting方法检测ercc6基因表达的变化。经测序分析证实,各ercc6-sh RNA的表达载体均构建成功。转染重组质粒48 h后的各组细胞均有绿色荧光表达。实时荧光定量PCR和Western blotting表明,相对于阴性对照组,ercc6-sh RNA1、ercc6-sh RNA2、ercc6-sh RNA3三个实验组SPC-A-1细胞中ercc6基因在m RNA和蛋白水平上的表达均显著降低（p〈0.05）,其中ercc6-sh RNA3载体的干扰效果最佳。本研究成功构建并筛选了靶向ercc6基因的sh RNA高效干扰载体,能够有效抑制ercc6基因在肺癌细胞中的表达,这为进一步研究ercc6基因与肿瘤发生分子机制和化疗耐药的相关性提供了帮助。

关键词： ercc6 RNA干扰 shRNA 载体构建

DNA氧化损伤修复基因ercc6对过氧化氢诱导的氧化损伤的晶状体上皮细胞增殖和凋亡的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

眼科新进展 2022年第1期42卷 29-33页

作者：李之喆俞华林刘建军南京医科大学附属苏州医院眼科江苏省苏州市215002 南京市第一医院肿瘤科江苏省南京市210001 南京医科大学附属苏州科技城医院眼科江苏省苏州市215163

目的探讨DNA氧化损伤修复基因ercc6对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的氧化损伤的晶状体上皮细胞增殖和凋亡的影响。方法采用不同浓度H_(2)O_(2)处理SRA01/04细胞,构建氧化损伤模型。取氧化损伤的SRA01/04细胞分为H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+... 详细信息

目的探讨DNA氧化损伤修复基因ercc6对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的氧化损伤的晶状体上皮细胞增殖和凋亡的影响。方法采用不同浓度H_(2)O_(2)处理SRA01/04细胞,构建氧化损伤模型。取氧化损伤的SRA01/04细胞分为H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+空白质粒转染组和H_(2)O_(2)+pcDNA3.1-ercc6质粒转染组进行转染处理。采用实时荧光定量PCR和免疫印迹实验检测转染后氧化损伤的SRA01/04细胞中ercc6 mRNA和科凯恩综合征互补B蛋白(CSB)的表达变化。采用免疫印迹实验和EdU染色实验分别检测转染后各组SRA01/04细胞凋亡相关蛋白表达变化和细胞增殖能力。结果当H_(2)O_(2)处理浓度为200μmol·L^(-1)时,SRA01/04细胞ercc6 mRNA和CSB蛋白的相对表达量最低,后续转染实验H_(2)O_(2)处理浓度均采用200μmol·L^(-1)。与H_(2)O_(2)组和H_(2)O_(2)+空白质粒转染组相比,H_(2)O_(2)+pcDNA3.1-ercc6质粒转染组SRA01/04细胞ercc6 mRNA和蛋白表达水平均显著增高(均为Percc6质粒转染组SRA01/04细胞中的促凋亡蛋白Bax表达均明显降低,而抑制凋亡的蛋白Bcl-2表达则均明显增加(均为Percc6质粒转染组SRA01/04细胞内绿色荧光亮度增高,阳性细胞数量增加,表明SRA01/04细胞的增殖能力增强。结论ercc6基因可能通过减弱DNA的核苷酸切除修复作用抑制氧化损伤的晶状体上皮细胞增殖、促进其凋亡从而导致老年性白内障的发生。

关键词：老年性白内障氧化损伤 ercc6 晶状体上皮细胞

ercc6 C6530G单核苷酸多态与局限期小细胞肺癌患者生存相关

同方期刊数据库博看期刊评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国癌症杂志 2006年第11期16卷 943-947页

作者：刘炬张雪梅张湘茹袁芃徐兵河林东昕中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤医院肿瘤内科北京100021 中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤医院肿瘤研究所病因及癌变研究室

背景与目的：个体化治疗和靶向治疗是目前实体瘤治疗的两大发展方向。基因单核苷酸多态（SNP）不同基因型患者化疗疗效之间存在显著的差别，基因型与疗效之间的相关研究可能为实现个体化治疗提供重要的理论基础。已有研究证实DNA损伤修... 详细信息

背景与目的：个体化治疗和靶向治疗是目前实体瘤治疗的两大发展方向。基因单核苷酸多态（SNP）不同基因型患者化疗疗效之间存在显著的差别，基因型与疗效之间的相关研究可能为实现个体化治疗提供重要的理论基础。已有研究证实DNA损伤修复基因ercc1、XRCC1、XPD等基因的遗传变异与非小细胞肺癌铂类药物治疗的疗效及预后相关，尚无小细胞肺癌患者化疗疗效与损伤修复基因SNP相关研究的报告。本研究观察了ercc6基因C6530G单核苷酸多态与局限期小细胞肺癌化疗近期疗效和生存的关系。方法：采用回顾性研究方法，分析了95例局限期小细胞肺癌患者经卡铂加VPl6（CE）方案一线或辅助治疗后的近期疗效及生存期与ercc6 C6530GSNP的关系。ercc6 C6530G基因型分析采用PCR—RFLP方法。组间比较采用卡方检验，生存分析采用Kaplan—Meier Log—rank检验法。结果：ercc6 6530位点CC、CG和GG基因型患者的近期疗效分别为88．9％、90．3％和85．7％，差异无显著意义（P=1．0）。CG＋GG基因型患者中位TTP为13个月（95％CI=9．2～16．8），CC基因型患者中位1TrP为9个月（95％CI=7．3～10．6；P=0．19）。ercc6 C6530GSNP和是否手术切除原发病灶两个因素与CE方案治疗后的生存期有关，其中CG＋GG基因型患者中位生存期为24个月（95％CI=18．4～29．6），CC基因型患者治疗后中位生存为16个月（95％CI=9．9～22．0），差异有显著性（P〈0．05）。手术切除原发病灶的患者中位生存期在中位随访时间28．5个月时尚未得到，未行手术切除的患者中位生存时间为18个月（95％CI 12．5～23．5），差异有显著性（P〈0．01）。结论：ercc6 C6530GSNP与局限期小细胞肺癌患者CE方案近期疗效无关但与生存相关。ercc6 C6530G基因型可能成为局限期小细胞肺癌患者化疗方案个体化选择的依据。

关键词：小细胞肺癌 ercc6 单核苷酸多态卡铂依托泊苷预后化疗

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

ercc6基因单核苷酸多态性的研究进展

江苏医药 2016年第15期42卷 1699-1702页

作者：王勇管怀进南通大学附属医院眼科(南通大学眼科研究所) 江苏省226001

科凯恩氏综合征互补B蛋白质(CSB)是核苷酸切除修复(NER)通路的关键蛋白质,由ercc6基因编码,该基因的突变可引起科凯恩氏综合征。有CSB缺陷的细胞易出现氧化应激引起的DNA氧化损伤。单核苷酸多态性(SNP)是人类遗传变异中最常见的一种类型... 详细信息

科凯恩氏综合征互补B蛋白质(CSB)是核苷酸切除修复(NER)通路的关键蛋白质,由ercc6基因编码,该基因的突变可引起科凯恩氏综合征。有CSB缺陷的细胞易出现氧化应激引起的DNA氧化损伤。单核苷酸多态性(SNP)是人类遗传变异中最常见的一种类型,与很多疾病的易感性相关。本文旨在综述ercc6基因SNP的研究进展。

关键词：基因突变 ercc6 核苷酸切除修复口腔黏膜癌氧化应激氧化损伤单核苷酸多态性 DNA 患病风险凯恩

Cockayne综合征两例临床特征与基因突变分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华儿科杂志 2016年第1期54卷 56-60页

作者：周知子刘丽吴莫龄刘鸿圣蔡燕娜盛慧英李秀珍程静李端黄永兰广州医科大学附属广州市妇女儿童医疗中心遗传与内分泌科 510623

目的分析Cockayne综合征患儿临床特征及基因突变。方法分析归纳2013年7月至2014年11月广州妇女儿童医疗中心收治的一对同胞兄弟共患经典型Cockayne综合征的临床特点；提取患儿及其血缘父母外周血全基因组DNA，用PCR方法扩增ercc6基因全... 详细信息

目的分析Cockayne综合征患儿临床特征及基因突变。方法分析归纳2013年7月至2014年11月广州妇女儿童医疗中心收治的一对同胞兄弟共患经典型Cockayne综合征的临床特点；提取患儿及其血缘父母外周血全基因组DNA，用PCR方法扩增ercc6基因全部外显子及与其相连的内含子区，扩增产物行双向测序，查找突变位点。结果患儿为同胞两兄弟，分别为4岁8月龄和7岁5月龄。均因“生长和智力落后数年”就诊，母孕产史均无异常。1岁前，患儿身高、体重均在正常范围内。1岁半后均出现身高、体重增长缓慢，运动发育落后，眼、皮肤光敏感，听力及视神经损害，小头、眼窝深邃。例1（先证者）就诊时身高90．8cm，体重9．1kg，头围41cm，胸围44cm；例2（先证者胞兄）就诊时身高92cm，体重11．2kg，头围41cm，胸围46cm。例1在4岁半，例2在7岁时头颅MRI检查提示全脑萎缩，脑室扩大，髓鞘形成不良。头颅磁共振波谱分析（氢谱）-MR成像提示左右两侧背侧丘脑、岛叶及左侧半卵圆中心神经元损伤。头颅CT提示双侧基底节对称性钙化。ercc6基因突变分析提示兄弟俩ercc6基因均存在c．1357C〉T（***453Ter）与c．1607T〉G（***536Trp）复合杂合致病突变，突变分别遗传自患儿母亲和父亲。结论Cockayne综合征患儿具有出生时正常，生后逐渐出现生长发育迟缓，语言、智力落后，脑损伤、小头畸形，眼窝深邃，皮肤光敏感等临床特征，存在ercc6基因突变，易误诊为脑瘫、先天性小头畸形等。

关键词： Cockayne综合征 ercc6 脑萎缩光过敏疾患

DNA修复基因的拷贝数变异与年龄相关性白内障的关系：江苏眼病研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

DNA修复基因的拷贝数变异与年龄相关性白内障的关系：江苏眼病研究

作者：姜瑾南通大学

学位级别：硕士

目的探讨中国汉族人群中DNA修复基因的(copy number variants, CNVs)与年龄相关性白内障(age-related cataract ARC)发病的关系,检测ARC患者和正常对照组外周血淋巴细胞的DNA损伤并探讨DNA修复基因的CNVs对DNA修复功能的影响。方法本... 详细信息

目的探讨中国汉族人群中DNA修复基因的(copy number variants, CNVs)与年龄相关性白内障(age-related cataract ARC)发病的关系,检测ARC患者和正常对照组外周血淋巴细胞的DNA损伤并探讨DNA修复基因的CNVs对DNA修复功能的影响。方法本实验设计为以人群为基础的流行病学研究。研究对象来自“江苏眼病研究”流行病学人群。包括780名ARC患者(皮质性257例,核性368例,后囊下性34例,混合性121例)和525名对照。采集受试者外周静脉血,提取全血基因组DNA。通过实时荧光PCR方法(RT-PCR)检测四种DNA修复基因的拷贝数。用卡方检验分析ARC组和对照组DNA修复基因拷贝数的差异以及相对危险度(odds ratio, OR)。并通过外周血淋巴细胞彗星实验检测ARC患者外周血淋巴细胞的DNA损伤。结果ARC组(780例)中WRN基因拷贝数为0的1例(0.1%),拷贝数为1的4例(0.5%),拷贝数为2的726例(93.1%),拷贝数>2的49例(6.3%)：对照组(525例)中WRN拷贝数为0的1例(0.2%),拷贝数为1的4例(0.8%),拷贝数为2的502例(95.6%),拷贝数>2的18例(3.4%)。表明在WRN基因中可能存在此前未见报道的CNV。 WRN基因高拷贝(CN=3+)与ARC的易感性有关(OR=1.88,P=0.02)。 HSF4基因低拷贝(CN=I)的人群对ARC易感(OR=4.09,P=0.004)。进行Bonferroni多重校正以后,HSF4基因的CNV与ARC的易感性仍相关。WRN基因的CNV与白内障的易感性无统计学意义。 WRN基因高拷贝(CN=3+)与核性以及后囊下性白内障的易感性有关(OR=2.06, P=0.02;and OR=3.72, P=0.02)。HSF4基因低拷贝(CN=I)与核性以及后囊下性白内障的易感性有关(OR=5.73, P=0.001;OR=6.80,P=0.01)。进行Bonferroni多重校正以后,HSF4的CNV与核性和后囊下性白内障的易感性仍相关。WRN基因的CNV与白内障的易感性无统计学意义。 WRN和HSF4基因CNV的联合作用显著增加了ARC的易感性,同时携带WRN和HSF4基因CNV的OR值从单纯HSF4基因的2.63上升到联合作用后的6.80。进行Bonferroni多重校正以后,WRN和HSF4基因的联合作用对ARC的易感性无统计学意义。其他CNVs组合的联合作用与ARC的易感性无统计学意义。外周血淋巴细胞彗星实验显示,ARC患者外周血淋巴细胞的DNA损伤比正常对照显著增高。并且在男性组及女性组中,ARC患者外周血淋巴细胞的DNA损伤程度都比对照组高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论HSF4基因与WRN基因的CNVs可能与中国汉族人群ARC尤其是核性和后囊下性ARC的易感性有关。WRN和HSF4基因的联合作用增加了ARC的易感性。DNA修复基因对ARC易感性有一定的作用,并且对不同亚型ARC产生不同的影响。

关键词：年龄相关性白内障 DNA修复基因 ercc6 WRN HOGG1 HSF4 拷贝数变异流行病学彗星实验

Let-7c-5p在乳腺癌中的表达、功能及其分子机制的研究

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

Let-7c-5p在乳腺癌中的表达、功能及其分子机制的研究

作者：傅枭男浙江理工大学

学位级别：硕士

乳腺癌是女性最普遍的恶性疾病之一,它的高发生率及死亡率严重威胁女性身心健康。随着精准医疗的提出,乳腺癌的治疗方法将更加多样化,治疗效果也将更加令人满意。在精准医疗中基因工程将发挥重要作用,所以探究基因在乳腺癌中扮演的角色... 详细信息

乳腺癌是女性最普遍的恶性疾病之一,它的高发生率及死亡率严重威胁女性身心健康。随着精准医疗的提出,乳腺癌的治疗方法将更加多样化,治疗效果也将更加令人满意。在精准医疗中基因工程将发挥重要作用,所以探究基因在乳腺癌中扮演的角色以及其发挥作用的分子机制能够为精准医疗奠定理论基础。Let-7c-5p是抑癌基因let-7家族中的一员,它在前列腺癌、非小细胞肺癌以及结肠癌中都起着一定的抑癌作用,在乳腺癌患者血清中检测到其表达量呈明显下降趋势,但是let-7c-5p在乳腺癌中的生物学功能尚未明了。本研究选取9对乳腺癌以及相对应癌旁组织的石蜡包埋样本为实验对象,提取其总RNA后,进行RT-qPCR检测let-7c-5p在乳腺癌及癌旁组织中的表达情况;同时在乳腺癌细胞MCF-7中过表达let-7c-5p,采用MTT的方法测试let-7c-5p对MCF-7细胞增殖能力的影响,利用流式细胞仪探测let-7c-5p对MCF-7细胞凋亡的影响;然后利用生物信息学软件预测let-7c-5p潜在的靶标基因,并用双荧光素酶实验加以验证,再采用荧光定量PCR和Western blotting实验深入探索其调控方式。结果显示let-7c-5p在9例乳腺癌组织中的表达量均低于对应的癌旁组织,其在癌组织中的表达量约为癌旁组织的0.23。对乳腺癌细胞MCF-7转染let-7c-5p mimics后,细胞中let-7c-5p表达量较对照组显著升高(Percc6为let-7c-5p潜在的靶标基因,双荧光素酶实验、Western blotting和荧光定量PCR结果表明let-7c-5p能够结合至ercc6 mRNA的3’UTR,从而抑制ercc6蛋白的合成,但是ercc6 mRNA的表达水平并不受let-7c-5p影响。综上,本研究结果表明let-7c-5p在乳腺癌组织中呈低表达,在乳腺癌细胞中过表达let-7c-5p能明显抑制细胞增殖,并且引发细胞凋亡,ercc6为let-7c-5p的靶基因,let-7c-5p可能通过抑制ercc6蛋白表达发挥其抑癌作用。

关键词：乳腺癌 Let-7c-5p 细胞增殖细胞凋亡 ercc6