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ER阳性乳腺癌中BMI与腋窝淋巴结转移的相关性分析

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ER阳性乳腺癌中BMI与腋窝淋巴结转移的相关性分析

作者：徐凡吉林大学

学位级别：硕士

背景和目的:乳腺癌已经成为最常见的女性恶性肿瘤,而在乳腺癌患者中,ER阳性乳腺癌患者所占比率最高。目前我国肥胖人群逐年增长,肥胖及其并发症引起的问题也越来越尖锐。腋窝淋巴结转移作为乳腺癌中最常见的转移方式,同时也是影响乳腺... 详细信息

背景和目的:乳腺癌已经成为最常见的女性恶性肿瘤,而在乳腺癌患者中,ER阳性乳腺癌患者所占比率最高。目前我国肥胖人群逐年增长,肥胖及其并发症引起的问题也越来越尖锐。腋窝淋巴结转移作为乳腺癌中最常见的转移方式,同时也是影响乳腺癌预后最重要的因素,研究腋窝淋巴结转移情况可以评估乳腺癌患者的预后情况。目前,ER阳性乳腺癌和肥胖的关系并不十分明确、肥胖和腋窝淋巴结转移之间的关系也不明确,仍需要我们去探讨和发现,为ER阳性乳腺癌的预防和治疗提供帮助。资料和方法:回顾性收集2015年1月-2020年10月间于吉林大学第二医院乳腺外科就诊的原发性ER阳性乳腺癌患者1080例,并收集相关数据（年龄、绝经状态、身高体重、肿瘤大小、淋巴结转移情况、TNM分期、组织学分级、PR、Ki67）。并用统计学方法分析其中内在联系。结果:1.1探讨ER阳性乳腺癌患者的相关临床信息与BMI之间的关系时我们发现,年龄≥40岁患者BMI指数较高（P＜0.001）,绝经后患者BMI指数较高（P＜0.001）,BMI指数较高的患者更容易出现腋窝淋巴结转移（P=0.021）,KI67表达率≤30%的患者BMI指数较高（P=0.036）,临床分期越高的患者BMI指数较高（P=0.005）。其他指标如组织学分级、PR差距无统计学意义。1.2探讨ER阳性乳腺癌患者的相关临床信息和腋窝淋巴结转移的关系时我们发现,未绝经患者腋窝淋巴结转移程度更高（P＜0.001）、患者肿瘤越大腋窝淋巴结转移程度更高（P＜0.001）、临床分期高的患者腋窝淋巴结转移程度更高（P＜0.001）、组织学分级越高的患者腋窝淋巴结转移程度更高（P=0.032）、Ki67表达率高的患者腋窝淋巴结转移程度更高（P=0.036）,其他指标无统计学意义。1.3在多因素多项Logistic回归分析中,分析后结果显示仅有肿瘤大小、TNM分期可以作为影响ER阳性乳腺癌腋窝淋巴结转移的独立影响因素,其他指标均不能独立影响ER阳性乳腺癌腋窝淋巴结转移情况。这也从侧面反映出BMI是在其他因素存在的情况下影响了ER阳性乳腺癌患者的腋窝淋巴结转移情况,为我们接下来的研究提供了方向。2.1在探讨哪些因素影响了BMI和ER阳性乳腺癌腋窝淋巴结转移之间的关系时,我们首先针对乳腺癌中与er密切相关的另一个激素受体PR进行研究,我们发现,PR≤20%组中ER阳性乳腺癌患者的腋窝淋巴结转移程度和BMI存在相关性,而PR＞20%组中ER阳性乳腺癌患者的腋窝淋巴结转移程度和BMI并不存在相关性。2.2在探讨哪些因素影响了BMI和ER阳性乳腺癌腋窝淋巴结转移之间的关系时,我们随后对其他因素进行研究,我们发现在组织学分级为Ⅰ-Ⅱ组中ER阳性乳腺癌患者的腋窝淋巴结转移程度和BMI存在相关性,而组织学分级为Ⅲ组中ER阳性乳腺癌患者的腋窝淋巴结转移程度并不存在相关性。其他指标无明显研究意义。结论:1.在ER阳性乳腺癌中,年龄较大、绝经后状态、腋窝淋巴结出现转移、Ki67表达率较高的患者BMI指数较高。2.未绝经状态、肿瘤较大、临床分期较高、组织学分级较高、Ki67表达率较高的ER阳性乳腺癌患者腋窝淋巴结转移程度较高。3.仅有肿瘤大小、TNM分期可以作为影响ER阳性乳腺癌腋窝淋巴结转移的独立影响因素,说明BMI是在其他因素存在的情况下影响了ER阳性乳腺癌患者的腋窝淋巴结转移情况。4.当PR低表达时,ER阳性乳腺癌患者的腋窝淋巴结转移程度和BMI存在相关性,而当PR高表达时,ER阳性乳腺癌患者的腋窝淋巴结转移程度和BMI并不存在相关性。在组织学分级为Ⅰ-Ⅱ组中ER阳性乳腺癌患者的腋窝淋巴结转移程度和BMI存在相关性,而组织学分级为Ⅲ组中ER阳性乳腺癌患者的腋窝淋巴结转移程度和BMI并不存在相关性。

关键词： BMI ER阳性乳腺癌淋巴结转移 PR

去泛素化酶在ER阳性乳腺癌中作用的研究进展

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湖北医药学院学报 2022年第3期41卷 316-319页

作者：赵钰李静冯景安徽理工大学医学院安徽淮南232001 上海市奉贤区中心医院上海201499 深圳市龙岗区人民医院广东深圳518116

乳腺癌(breast cancer, BC)是女性最常见的癌症,其发病率位居女性恶性肿瘤之首,占女性癌症的三分之一[1]。乳腺癌根据表达雌激素受体(estrogen receptor, er)、孕激素受体(progesterone receptor, PR)的水平以及表皮生长因子受体2(epide... 详细信息

乳腺癌(breast cancer, BC)是女性最常见的癌症,其发病率位居女性恶性肿瘤之首,占女性癌症的三分之一[1]。乳腺癌根据表达雌激素受体(estrogen receptor, er)、孕激素受体(progesterone receptor, PR)的水平以及表皮生长因子受体2(epidermal growth factor receptor 2,Her2)基因扩增情况分为激素受体阳性(er+).

关键词：去泛素化酶 ER阳性乳腺癌细胞周期

PTP1B在ER阳性乳腺癌中的表达及临床预后意义

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临床与实验病理学杂志 2016年第5期32卷 492-495页

作者：赵瑞君谢春伟陈戈龚宇董洪梅江西省南昌市第三医院乳腺疾病诊疗中心 330009 汕头大学医学院肿瘤研究中心汕头515041

目的探讨PTP1B在ER阳性乳腺癌中的表达及其临床与预后的意义。方法应用免疫组化SP两步法检测179例乳腺癌标本中PTP1B蛋白的表达,分析PTP1B表达与乳腺癌临床病理特征及预后的关系。结果在ER阳性乳腺癌中,PTP1B表达水平与T分期(P=0.038)... 详细信息

目的探讨PTP1B在ER阳性乳腺癌中的表达及其临床与预后的意义。方法应用免疫组化SP两步法检测179例乳腺癌标本中PTP1B蛋白的表达,分析PTP1B表达与乳腺癌临床病理特征及预后的关系。结果在ER阳性乳腺癌中,PTP1B表达水平与T分期(P=0.038)、淋巴结转移(P=0.021)、肿瘤分期相关(P=0.008)。Kaplan-Meier检测结果显示,与PTP1B低表达组相比,PTP1B高表达组患者的总生存率更低(P=0.006)。多因素分析显示T分期、腋窝淋巴结转移和PTP1B表达是影响患者总生存的独立预后因素。结论 ER阳性乳腺癌中PTP1B的表达与肿瘤进展和患者不良预后密切相关,PTP1B可能是ER阳性乳腺癌预后不良评估的指标之一。

关键词：乳腺肿瘤 ER阳性乳腺癌 PTP1B 免疫组织化学预后

EZH2在ER阳性乳腺癌细胞增殖中的作用及白藜芦醇的干预效果研究

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EZH2在ER阳性乳腺癌细胞增殖中的作用及白藜芦醇的干预效果研究

作者：刘云南京医科大学

学位级别：硕士

ER阳性乳腺癌的增殖依赖于雌激素及雌激素受体(er),雌激素通过与er的结合进而激活er及其下游靶基因,促进肿瘤的生长。EZH2在多种肿瘤中高表达,其中包括乳腺癌,在肿瘤的发生发展进程中扮演着重要角色。EZH2是多梳抑制复合物2(PRC2)的酶... 详细信息

ER阳性乳腺癌的增殖依赖于雌激素及雌激素受体(er),雌激素通过与er的结合进而激活er及其下游靶基因,促进肿瘤的生长。EZH2在多种肿瘤中高表达,其中包括乳腺癌,在肿瘤的发生发展进程中扮演着重要角色。EZH2是多梳抑制复合物2(PRC2)的酶活性核心亚基,可以催化组蛋白H3K27的甲基化进而发挥基因沉默的功能。另外EZH2也可以不依赖于H3K27me3直接发挥作用。研究表明在ER阳性乳腺癌细胞中,EZH2可以连接er与Wnt信号,共同促进细胞。但是EZH2对er信号的调控尚不明确。白藜芦醇广泛存在于自然界中的各种食物中,如葡萄、花生、草莓和大豆等。大量的体内和体外研究表明白藜芦醇对ER阳性乳腺癌具有明显的抗肿瘤作用。研究报道许多植物化学物可以通过对EZH2的抑制发挥各种抗癌功能,因此,明确EZH2对er信号的调控以及EZH2在白藜芦醇抗ER阳性乳腺癌中的作用可以为ER阳性乳腺癌的治疗提供进一步的思路和策略。目的:本研究采用ER阳性乳腺癌细胞MCF-7和T47D作为研究对象,探讨EZH2在ER阳性乳腺癌增殖中的作用以及白藜芦醇的干预效果,从而为EZH2作为ER阳性乳腺癌细胞的治疗靶点提供新的参考依据,为白藜芦醇作为ER阳性乳腺癌的治疗药物应用于临床提供一个新的理论参考。方法:采用CCK-8实验、细胞平板克隆形成实验检测细胞增殖;采用实时定量PCR检测目的基因的mRN A水平;采用蛋白质免疫印记实验检测目的基因的蛋白水平;采用细胞瞬时转染实验敲除EZH2。结果:(1)EZH2在ER阳性乳腺癌增殖中的作用:CCK-8实验结果显示E可以促进ER阳性乳腺癌细胞MCF-7和T47D的增殖,且这种作用可以被er拮抗剂ICI阻断,说明ER阳性乳腺癌细胞的增殖依赖于er。在E(0-10 nM)的刺激下,细胞中EZH2的mRNA和蛋白的表达水平均升高,敲除EZH2使细胞增殖减缓,能够逆转E对细胞增殖的促进作用;另外,抑制EZH2的表达也能抑制er蛋白及其靶基因pS2 mRNA的表达。er拮抗剂ICI也能阻断E对EZH2 mRNA及蛋白的促进作用。E能够激活细胞中erK1/2的磷酸化,erK1/2信号抑制剂U0126能够阻断E对细胞增殖的促进作用,同时也能逆转E对EZH2表达的促进作用。(2)EZH2在REV抑制ER阳性乳腺癌细胞增殖中的作用:用白藜芦醇(0-80?M)处理ER阳性乳腺癌细胞时,CCK-8实验显示细胞增殖被抑制,实时定量PCR和蛋白质免疫印记实验结果表明白藜芦醇可以降低细胞中EZH2的mRNA和蛋白的表达水平,用siRNA敲除EZH2或者EZH2的抑制剂DZNep均能削弱白藜芦醇对细胞增殖的抑制作用。蛋白质免疫印记实验结果显示白藜芦醇可以降低细胞中p-erK1/2蛋白的表达水平,erK1/2信号抑制剂U0126能够削弱白藜芦醇对细胞增殖的抑制作用,同时也能削弱白藜芦醇对EZH2蛋白表达的抑制。另外白藜芦醇也能降低细胞中STAT3的磷酸化及AKT的磷酸化水平,但是STAT3磷酸化的抑制剂stattic及AKT磷酸化的抑制剂LY294002不影响细胞中EZH2的表达。结论:在ER阳性乳腺癌细胞中,E可以通过激活erK1/2的磷酸化促进EZH2表达的增强进而激活er信号,最终促进细胞增殖,而白藜芦醇可以抑制通过抑制erK1/2的磷酸化抑制EZH2进而抑制细胞增殖。

关键词： EZH2 ER阳性乳腺癌增殖白藜芦醇 erK1/2

分泌型microRNA-221/222增强ER阳性乳腺癌对他莫昔酚耐药性的机制研究

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分泌型microRNA-221/222增强ER阳性乳腺癌对他莫昔酚耐药性的机制...

作者：韦伊芳第四军医大学

学位级别：硕士

目前，乳腺癌是全球女性中最常见的恶性肿瘤，近年来发病率呈逐年上升趋势，且发病有年轻化趋势。由于部分患者在发病前无明显症状，或症状未引起足够重视，导致病情进一步恶化，严重影响患者的生活质量，威胁患者的生命健康。随着乳腺... 详细信息

目前，乳腺癌是全球女性中最常见的恶性肿瘤，近年来发病率呈逐年上升趋势，且发病有年轻化趋势。由于部分患者在发病前无明显症状，或症状未引起足够重视，导致病情进一步恶化，严重影响患者的生活质量，威胁患者的生命健康。随着乳腺癌综合治疗理念的日臻成熟，内分泌治疗，保乳手术，术后放疗化疗，和分子靶向治疗的综合应用使得乳腺癌患者的生存期得到了明显的延长。其中内分泌治疗又称激素治疗，作为乳腺癌综合治疗的重要组成部分，已受到广泛重视。内分泌治疗具有许多优点，如毒副作用小，有效期长，治疗期间患者生存质量较高等，可用于术后辅助治疗，也可作为复发转移后的补救治疗。他莫昔酚（tamoxifen）是乳腺癌内分泌治疗中应用最成熟的药物，它通过与雌激素竞争性结合雌激素结合受体（er）阻断雌激素的生物学活性，抑制细胞的增殖，治疗乳腺癌。它可以显著提高ER阳性乳腺癌患者的总生存率和无瘤生存率，降低远处转移率。但乳腺癌对他莫昔酚原发性或获得性的耐药，是乳腺癌内分泌失败的主要原因之一。乳腺癌的他莫昔酚耐药机制非常复杂。研究发现，乳腺癌耐药性的发生与雌激素受体和生长因子受体间的相互作用、er的缺失或突变均有相关性。最新的研究也显示，microRNA在乳腺癌耐药过程中发挥重要作用，microRNA-221/222在具有他莫昔酚耐药性的乳腺癌细胞系MCF-7细胞中含量明显增高。 2008年，Adrian Harris课题组第一次在血清中发现了分泌型microRNA的存在，随后在唾液、乳汁和尿液中都发现了分泌型microRNA。与细胞和组织中提取的microRNA不同，血清中的microRNA，即使利用RNA酶降解，仍然保持高度的稳定性。最新研究指出，大部分的分泌型microRNA都存在于exosomes中。Exosomes即细胞外泌体，是一种可由多种细胞分泌的纳米级(30-100nm)的膜性小囊泡，它是由管内囊泡和细胞膜融合形成的。Exosomes可以由多种细胞分泌产生，并且在肿瘤生成、细胞应激、血管生成、细胞间信息交流等方面均有重要作用。那么，它们是否参与了肿瘤细胞获得耐药性的过程？为了探究分泌型microRNA-221/222是否能够增强ER阳性乳腺癌对他莫昔酚的耐药性，我们进行了以下实验并取得了一定结果。研究方法和结果： 1、MCF-7wt和MCF-7TamR所分泌exosomes在形态上存在差异：（1）用透射电镜观察MCF-7wt和MCF-7TamR细胞所分泌的exosomes在形态上的差异。（2）对MCF-7wt和MCF-7TamR细胞分泌的exosomes进行蛋白质和RNA含量的分析。结果：MCF-7wt和MCF-7TamR细胞分泌的exosomes均为椭圆形的膜性小囊泡，染色后可见囊泡中央色淡、周边浓染，边缘清晰，但不同的是：MCF-7wtexosomes（约为65nm）的直径明显大于MCF-7TamRexosomes（约为40nm）;MCF-7wt（106个）细胞所分泌的exosomes含有的RNA和蛋白质的量均比MCF-7TamR（106个）细胞高。 2、MCF-7TamR细胞他莫昔酚耐药性可通过exosomes传递：（1）用PKH67染色exosomes，并用激光共聚焦显微镜观察exosomes是否可以进入MCF-7wt细胞。（2）通过MTT实验、平板克隆形成实验、细胞凋亡检测实验观察MCF-7TamRexosomes是否可以促进MCF-7wt细胞对他莫昔酚的耐药。结果：MCF-7TamRexosomes确实可以进入MCF-7wt细胞;进而降低MCF-7wt细胞对他莫昔酚的敏感度，促进细胞平板克隆的形成，降低细胞的凋亡率，即增强了MCF-7wt细胞对他莫昔酚的耐药性。 3、 MCF-7TamRexosomes传递细胞他莫昔酚耐药性依赖于分泌型microRNA-221/222：（1）microRNA芯片检测MCF-7wt与MCF-7TamR细胞和exosomes中分泌型microRNA的含量差异。（2）芯片结果分析，选取目标microRNA，并用qPCR检测（3） qPCR检测MCF-7TamRexosomes加入MCF-7wt细胞后microRNA-221/222含量的变化。（4）western blot检测microRNA-221/222的靶蛋白p27和erα的变化。结果：MCF-7wt与MCF-7TamR细胞和exosomes存在分泌型microRNA的差异;MCF-7TamR细胞和exosomes中microRNA-221/222的含量均高于MCF-7wt细胞和exosomes;MCF-7TamRexosomes加入MCF-7wt细胞可明显增高细胞中microRNA-221/222的含量，同时microRNA-221/222靶蛋白p27和erα的表达量降低。 4、Anti-miR-221/222阻滞细胞他莫昔酚耐药性的传递：（1）转染

关键词： ER阳性乳腺癌 exosomes 分泌型microRNA-221/222 他莫昔酚耐药性

MicroRNA-206在ER阳性乳腺癌细胞中表达的意义及其机制研究

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MicroRNA-206在ER阳性乳腺癌细胞中表达的意义及其机制研究

作者：刘钰复旦大学

学位级别：硕士

研究目的通过慢病毒建立miR-206高表达和低表达的MCF-7细胞株,研究三组细胞生物学特征,探索miR-206在MCF-7细胞增殖和转移中的作用;探讨4-OH TAM对三组细胞的生物学变化及内分泌治疗敏感性的改变。研究方法1.分别构建miR-206的慢病毒表... 详细信息

研究目的通过慢病毒建立miR-206高表达和低表达的MCF-7细胞株,研究三组细胞生物学特征,探索miR-206在MCF-7细胞增殖和转移中的作用;探讨4-OH TAM对三组细胞的生物学变化及内分泌治疗敏感性的改变。研究方法1.分别构建miR-206的慢病毒表达质粒及抑制质粒,包装慢病毒,感染乳腺癌MCF-7细胞使其稳定过表达及低表达miR-206。2.实时定量PCR检测MCF-7细胞、miR-206过表达MCF-7和miR-206低表达MCF-7中miR-206的表达情况。3.通过CCK8法、细胞计数法检测三组细胞的增殖能力变化,并绘制生长曲线;划痕愈合实验比较三者的细胞迁移能力;流式细胞仪分析细胞凋亡情况。4.以5μM 4-OH TAM处理三组细胞48小时后,检测三组细胞的增殖情况并绘制生长曲线：western blot法测相关蛋白变化;流式细胞仪分析细胞凋亡情况。研究结果我们通过慢病毒转染建立miR-206高表达MCF-7和miR-206低表达MCF-7,real-time PCR检测到miR-206高表达MCF-7的miR-206表达水平较其他两组高,具有统计学意义（P＜0.05）。随着时间的推移,miR-206高表达MCF-7细胞的增殖速度较其他两组细胞有减慢的趋势。经过5μM 4-OH TAM处理48小时或72小时后,对照组和加药组中三组细胞的迁移能力均未见明显差别。流式细胞仪检测到,药物处理48小时后,MCF-7和miR-206高表达MCF-7的凋亡程度比miR-206低表达MCF-7的凋亡程度高,提示miR-206低表达MCF-7对TAM较其他两组更不敏感。经过药物处理的MCF-7、miR-206高表达MCF-7细胞,p21表达水平较用药前明显升高,在miR-206低表达MCF-7细胞用药前后p21表达水平无明显差别：经过药物处理的miR-206高表达MCF-7和miR-206低表达MCF-7细胞,bcl-2表达水平较川药前明显降低,在 MCF-7细胞中其表达水平用药前后无明显差别：miR-206高表达MCF-7的erα、NRP1、PKCε的表达水平均比其他两组细胞低。结论MiR-206可能参与era的调控以及ER阳性乳腺癌细胞的凋亡。MiR-206可能与内分泌治疗的敏感性有关;与MCF-7和miR-206高表达MCF-7相比,miR-206低表达MCF-7对三苯氧胺的敏感性较差。NRP1、PKCs可能是miR-206的下游调控基因,这些基因对乳腺癌细胞生物学的影响,值得进一步研究。研究背景围手术期的人体微环境可能影响微转移灶的生物学特征,甚至促进肿瘤复发转移。人体微环境随着月经周期变化而变化。目前,对于在月经周期的不同阶段进行手术治疗是否会影响绝经前乳腺癌患者的预后,仍存有不同意见。研究方法将2000-2002年在复旦大学附属肿瘤医院手术的554例绝经前乳腺癌患者,按手术时间及月经状态分为卵泡期手术组（患者在月经周期第1-14天接受手术）和黄体期手术组（患者在月经周期第15-31天接受手术）两组,回顾性分析影响绝经前乳腺癌病人术后复发转移的因素。单因素生存分析用Kaplan-Meier法估计,并用时序检验（Log-rank test）进行组间比较;多因素生存分析采用Cox风险比例模型法。P＜0.05为差异有显著意义。所有统计处理采用Stata 10.0软件进行运算。由于不同个体月经周期长短不同,卵泡期和黄体期的分界值也不同,我们将分别将月经周期第10-22天分别作为分界值以排除个体差异对临床结果的影响。研究结果Cox风险比例模型结果显示,卵泡期手术组的无病生存率（HR=0.318,95%CI:0.10-0.99,P=0.049）和总生存率（HR=0.260,95% CI:0.07-0.92,P=0.036）均高于黄体期手术组。当卵泡期和黄体期的分界值设置在月经第14、18、19天时,卵泡期手术组DFS较黄体期手术组有明显改善;当分界值设置在月经第11、13、14天时,卵泡期手术组OS也有明显延长。分界值设置在月经第10-22天时可见风险比有低幅度波动,无论是DFS还是OS,在月经周期第22天以后风险比值上升。结论与黄体期手术组的绝经前乳腺癌患者相比,卵泡期手术组的预后更好。针对不同患者不同月经状态的手术时机可能提高治疗效果,可能成为乳腺癌个体化治疗的一个方面。

关键词： MiR-206 ER阳性乳腺癌乳腺癌月经周期手术预后

PSMD14通过去泛素化erα稳定雌激素信号并促进乳腺癌的发展

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PSMD14通过去泛素化ERα稳定雌激素信号并促进乳腺癌的发展

作者：杨潇新乡医学院

学位级别：硕士

背景乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤,而其中erα(Estrogen Receptor Alpha)阳性的乳腺癌约占70%。Luminal A和B型乳腺癌均为er阳性,雌激素信号通路的过度激活被认为是Luminal型乳腺癌的主要驱动因素,通过选择性雌激素受体调节剂(SerM),... 详细信息

背景乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤,而其中erα(Estrogen Receptor Alpha)阳性的乳腺癌约占70%。Luminal A和B型乳腺癌均为er阳性,雌激素信号通路的过度激活被认为是Luminal型乳腺癌的主要驱动因素,通过选择性雌激素受体调节剂(SerM),如他莫昔芬,可以有效控制其进展。但乳腺肿瘤治疗中内分泌耐药仍是一个具有较大挑战性的难题,而最近的研究表明erα的翻译后修饰在内分泌耐药性中起着重要作用。erα蛋白的泛素化受制于泛素连接酶和去泛素酶之间的平衡。去泛素化酶PSMD14(Proteasome 26S Subunit,Non-ATPase 14)最早是作为26S蛋白酶体非ATP亚单位的组成部分被发现的,又被称为RPN11、POH1和PAD1,位于蛋白酶体19S调节颗粒上,属于DUBs的JAMM域金属蛋白酶家族。PSMD14已被证实在多个生物过程中发挥作用,但其在乳腺癌中的功能并不明确。我们的研究结果表明,PSMD14通过翻译后修饰来调控雌激素信号传导和乳腺癌进展,这可能为Luminal型乳腺癌内分泌耐药治疗这一难题提供了一个新的突破靶点。目的本课题旨在探究ER阳性乳腺癌中PSMD14蛋白对雌激素信号通路的调节机制,为ER阳性乳腺癌治疗诊断靶点提供新策略。方法1、利用实验室购买的去泛素化酶siRNA文库筛选可以显著调节erα信号通路经典靶基因TFF1的去泛素化酶。2、运用划痕实验,集落形成实验,CCK8实验以及EDU实验探讨PSMD14蛋白对雌激素受体阳性乳腺癌细胞的表型调节。运用小鼠荷瘤实验探讨PSMD14对ER阳性乳腺癌体内增殖影响。在ER阳性乳腺癌的细胞系中建立sh PMD14稳转细胞株,随后构建小鼠移植瘤模型,并检测不同组小鼠的肿瘤体积和重量。3、利用全转录谱RNA seq分析PSMD14蛋白在乳腺癌中的新的调节机制。4、利用qRT-PCR及Western blot探讨PSMD14蛋白调节雌激素受体信号通路的分子机制。5、利用Kmplot、TCGA数据库分析比较PSMD14在不同的分子分型乳腺癌病人和良性乳腺组织之间的生存预后以及PSMD14在乳腺癌不同分型和分级中的表达差异。6、利用蛋白质免疫共沉淀技术和免疫荧光技术分别观察PSMD14和erα蛋白相互作用及其在空间上是否有共定位。7、通过MG132(Proteasome inhibitor)蛋白酶体抑制剂诱导实验、泛素化实验和CHX(Cycloheximide)蛋白合成抑制剂诱导实验来验证PSMD14通过哪种修饰途径来稳定erα蛋白。结果1、通过在去泛素化酶siRNA文库中筛选发现PSMD14可以调节erα经典靶基因TFF1的表达。2、通过体内外增值实验,我们发现沉默PSMD14可以抑制ER阳性乳腺癌细胞的增值。3、通过TCGA数据库分析发现PSMD14在ER阳性乳腺癌组织中比在乳腺正常组织中表达水平高,并且在乳腺癌的各个临床分期中其表达量也明显升高,通过进一步研究我们发现PSMD14与erα的表达水平呈正相关。通过RNA seq我们发现沉默PSMD14可以抑制雌激素信号通路靶基因TFF1,IL20,GREB1的表达。通过Kmplot和UCLAN数据库分析发现在ER阳性乳腺癌,Her2阳性乳腺癌和三阴性乳腺癌这三种分子分型的乳腺癌中只有ER阳性乳腺癌中高表达PSMD14的病人预后生存期更短。4、通过Western Blot实验和QPCR实验证明沉默PSMD14可以降低erα蛋白水平,但对erα本身的m RNA水平没有明显的影响。进一步研究发现沉默PSMD14后雌激素信号通路靶基因转录水平降低。5、通过免疫荧光实验和Co-IP实验,我们发现PSMD14和erα在空间上共定位并且具有直接的相互作用。通过进一步研究发现PSMD14的1-172片段可以和erα的AF1片段相互作用。6、通过CHX实验,发现PSMD14可以影响erα的半衰期。通过MG132实验及泛素实验,进一步证明了PSMD14通过泛素蛋白酶体途径来最终影响erα蛋白的稳定。7、通过泛素化实验,我们发现PSMD4过表达可以抑制erα蛋白泛素化,并且进一步研究发现PSMD14对erα蛋白多聚泛素化修饰位点是K48位点,接着通过domain IP实验我们得出结论PSMD14通过1-172片段来对erα蛋白K48位点进行抑制,从而稳定erα蛋白的表达。结论本篇文章首次揭示了去泛素化酶JAMM家族成员PSMD14蛋白在乳腺癌中新的调控分子机制。我们发现PSMD14与erα可以相互结合,然后PSMD14通过MPN结构域抑制erα的蛋白酶体降解,维持erα蛋白的稳定性。使得更多的erα进入胞核中激活雌激素通路转录活性促进其下游靶基因的表达,影响乳腺癌的发生发展。

关键词： ER阳性乳腺癌泛素化 PSMD14 erα 稳定性

ER阳性乳腺癌中FOXM1和GRP78蛋白表达与临床病理因素及预后的相关性研究

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交通医学 2018年第5期32卷 419-423页

作者：李海东赵四成李季丹陈橼王健黄向华张一心郭燕南通市妇幼保健院普外科江苏226018 南通大学附属肿瘤医院乳腺外科南通大学附属肿瘤医院病理科

目的:检测ER阳性乳腺癌组织中叉头框M1(forkhead boxM1,FOXM1)及葡萄糖调节蛋白78(glucoseregulated protein of 78kDa,GRP78)的表达水平,探讨其与临床各参数及预后的关系。方法:应用免疫组化技术检测FOXM1、GRP78在60例ER阳性乳腺癌中... 详细信息

目的:检测ER阳性乳腺癌组织中叉头框M1(forkhead boxM1,FOXM1)及葡萄糖调节蛋白78(glucoseregulated protein of 78kDa,GRP78)的表达水平,探讨其与临床各参数及预后的关系。方法:应用免疫组化技术检测FOXM1、GRP78在60例ER阳性乳腺癌中的表达,分析两者表达量的相关性,与临床病理参数的相关性及其对患者预后的影响。结果:FOXM1和GRP78在ER阳性乳腺癌癌组织中高表达,两者的表达呈正相关性;患者的无复发生存期(recurrence-free survival,RFS)与脉管侵犯、FOXM1、GRP78、Ki67表达、Her2表达有关,GRP78和FOXM1高表达均是ER阳性乳腺癌患者RFS的影响因素。结论:通过本研究发现FOXM1和GRP78在ER阳性乳腺癌癌组织中高表达,两者均影响ER阳性乳腺癌患者5年RFS时间。

关键词： ER阳性乳腺癌葡萄糖调节蛋白78 叉头框M1 无复发生存期

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