检索结果-南通市图书馆

作者：张进云南大学

学位级别：硕士

自噬是一个在进化上高度保守的细胞过程,它能对包裹在内的内容物进行降解。在过去的二十年中,已被证明自噬的紊乱与许多人类疾病的发生发展有关,例如癌症、代谢紊乱、衰老、感染疾病、炎症等。epg5最先在线虫中发现,是一个重要的自噬基... 详细信息

自噬是一个在进化上高度保守的细胞过程,它能对包裹在内的内容物进行降解。在过去的二十年中,已被证明自噬的紊乱与许多人类疾病的发生发展有关,例如癌症、代谢紊乱、衰老、感染疾病、炎症等。epg5最先在线虫中发现,是一个重要的自噬基因,在自噬底物的降解中发挥重要的作用。epg5-/-小鼠表现出高于基础水平的肺部炎症,对致命性流感病毒的感染具有抗性。诺如病毒(Norovirus,No V)是全球流行性急性肠胃炎的主要病因,在儿童、老年人和免疫功能低下者中发病率和死亡率较高,对人类生命健康及财产造成了很大的负担。由于我们对No V的发病机制了解不完全,至今也没有有效的抗病毒治疗手段或者疫苗。最近,我们发现epg5-/-小鼠对持续性诺如病毒(***6)的感染具有抗性,这一发现尚未见报道。本文研究发现epg5-/-小鼠表现出对诺如病毒持续性感染的抵抗性这一现象,并阐明了此现象的相关机制。研究表明:在小鼠水平上,(1)与野生型小鼠相比,epg5-/-小鼠肠道中病毒的靶细胞——簇细胞(tuft cell)的数量以及定位是没有显著差异的;(2)但是epg5-/-小鼠表现出干扰素相关通路的基因上调,与野生型小鼠相比,epg5-/-小鼠干扰素刺激基因以及部分干扰素基因的表达上调。在细胞水平上,(3)病毒在epg5敲除的细胞中的复制与对照组相比是没有显著差异的;(4)但是epg5敲除的细胞中病毒的非结构蛋白NS1的分泌受阻,而非结构蛋白NS1的分泌是病毒感染细胞以及持续性感染所必需的。综上所述,本研究揭示了自噬基因epg5的缺乏通过上调干扰素基因和干扰素相关基因的表达,以及阻碍病毒非结构蛋白NS1的分泌进而对诺如病毒的持续性感染产生了一定的抵抗性。这一研究结果为诺如病毒的治疗以及疫苗的开发提供了一些新思路。

关键词：自噬 epg5 诺如病毒感染 NS1

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Vici综合征的致病蛋白epg5介导自噬小体与晚期内体/溶酶体融合过程

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科学新闻 2017年第4期 87-87页

作者： Zheng Wang Guangyan Miao Xue Xue Xiangyang Guo Chongzhen Yuan Zhaoyu Wang Gangming Zhang Yingyu Chen Du Feng Junjie Hu 张宏中国科学院生物物理研究所

文章简介人类自噬基因epg5突变会导致多重系统紊乱Vici综合征。这篇论文证明了epg5作为Rab7的效应蛋白,特异性介导自噬小体与晚期内体/溶酶体之间的融合。epg5可以与Rab7及晚期内体/溶酶体上的R-SNARE蛋白VAMP7/8直接作用,进而定位于晚... 详细信息

文章简介人类自噬基因epg5突变会导致多重系统紊乱Vici综合征。这篇论文证明了epg5作为Rab7的效应蛋白,特异性介导自噬小体与晚期内体/溶酶体之间的融合。epg5可以与Rab7及晚期内体/溶酶体上的R-SNARE蛋白VAMP7/8直接作用,进而定位于晚期内体/溶酶体。epg5也可以与自噬蛋白LC3/LGG-1(人类和线虫中Atg8的同源基因),及预组装的Qabc-SNARE复合物STX17-SNAP29结合,从而通过epg5将自噬小体定

关键词：晚期内体自噬小体 epg5 Vici 介导溶酶体综合征综合病症蛋白融合过程

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牙鲆抗迟缓爱德华氏菌感染相关的3个基因鉴定及功能验证

牙鲆抗迟缓爱德华氏菌感染相关的3个基因鉴定及功能验证

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作者：张子威南京农业大学

学位级别：硕士

牙鲆作为一种近海冷温底栖鲆鲽鱼类,营养价值高、生长速度快、适合工厂化养殖模式、经济效益高,是我国北方海水鱼类养殖业的重要经济品种。但随着养殖规模扩大,长期的高密度养殖造成牙鲆种质退化,成活率变低,生长速度变慢,抗病能力降低... 详细信息

牙鲆作为一种近海冷温底栖鲆鲽鱼类,营养价值高、生长速度快、适合工厂化养殖模式、经济效益高,是我国北方海水鱼类养殖业的重要经济品种。但随着养殖规模扩大,长期的高密度养殖造成牙鲆种质退化,成活率变低,生长速度变慢,抗病能力降低,养殖过程中病害频发。其中迟缓爱德华氏菌感染造成的腹水病是牙鲆养殖过程中的高发细菌病,严重阻碍我国牙鲆养殖产业发展。研究牙鲆抗细菌病相关基因,发掘分子标记用于辅助育种,构建高抗病力的优良牙鲆家系是解决牙鲆病害问题的有效方法之一。本论文以牙鲆为研究对象,在实验室前期GWAS筛选得到牙鲆抗迟缓爱德华氏菌相关基因的基础上,对免疫相关基因进行克隆鉴定和免疫功能研究,并对牙鲆抗迟缓爱德华氏菌感染家系和易感家系肝micro RNA进行测序分析,筛选影响牙鲆家系抗病力的相关micro RNA及基因,为解析牙鲆抗迟缓爱德华氏菌感染机制提供理论基础。1.牙鲆rnd1基因克隆、表达模式及与抗病力的关系为探索牙鲆rnd1基因在牙鲆免疫应答反应中的作用,分析该基因与牙鲆抗病力的关系,本实验对Pornd1基因进行克隆鉴定和抗病相关SNP位点的定位,结果显示,Pornd1 c DNA开放阅读框为699 bp,编码232个氨基酸,确定Pornd1基因内含子2上存在一个抗迟缓爱德华氏菌病相关SNP,该位点在易感家系和抗病家系中分别是C/T。利用实时荧光定量PCR对Pornd1基因的组织分布、细菌感染后表达情况以及在抗病和易感家系中的表达水平进行检测,结果显示,Pornd1在心、肝、肾中的相对表达量较高;迟缓爱德华氏菌感染后肝、肾、脾中Pornd1的表达量在6 h降低后逐渐升高,在48 h达到最高。Pornd1在抗病家系肝脏中的表达量显著高于易感家系。本实验在蛋白水平,利用大肠杆菌表达系统表达Po Rnd1重组蛋白,检测其抑菌活性。结果显示,Po Rnd1重组蛋白对金黄葡萄球菌、大肠杆菌、迟缓爱德华氏菌和哈维氏弧菌均具有一定抑菌活性,揭示了Pornd1在牙鲆免疫抗病方面的作用,为系统解析牙鲆抗病性状遗传机制提供基础资料。2.牙鲆sh2b3、epg5基因克隆及其在免疫应答中表达模式初步分析为分析牙鲆sh2b3、epg5基因在牙鲆免疫反应中的功能,分析其与牙鲆家系抗病力的关系,实验对Posh2b3、Poepg5基因进行功能鉴定和抗病相关SNP位点定位,Posh2b3基因编码氨基酸含有PH结构域和SH2结构域,在第1内含子上存在抗迟缓爱德华氏菌病相关SNP,该位点在易感家系和抗病家系中分别是G/A;Poepg5基因在第42内含子上存在抗迟缓爱德华氏菌病相关SNP,位点信息为C/T;q RT-PCR对基因的组织分布、抗病家系与易感家系肝中表达差异、感染迟缓爱德华氏菌后表达模式进行检测,结果显示Posh2b3在血、心、肝、脾、肾中表达较高,在抗病家系肝中的表达量显著高于易感家系,在迟缓爱德华氏菌感染后的脾、肾中的表达量变化出现上升趋势;Poepg5在血、心、肝、肾中高表达,在抗病家系肝中的表达量较高,在感染后的脾、肾中表达出现上升趋势。因此认为Posh2b3、Poepg5基因参与了牙鲆抵御细菌侵袭的免疫应答过程,为探究sh2b3、epg5在牙鲆免疫应答过程中的作用机制提供理论基础。3.牙鲆抗迟缓爱德华氏菌家系和易感家系肝脏micro RNA测序分析为探究影响牙鲆家系抗迟缓爱德华氏菌感染能力的因素,对实验室前期构建的抗迟缓爱德华氏菌感染的家系与易感家系肝中micro RNA进行测序分析,筛选得到的差异mi RNA表达上调的共有462个,下调的共有491个;对mi RNA靶基因进行表达差异分析,得到差异mi RNA靶基因进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析,得到多个相关GO term和免疫相关通路,为后续特征差异mi RNA和差异靶基因的分析提供了研究方向,为揭示牙鲆家系抗病力影响因素奠定了理论基础。

关键词：牙鲆迟缓爱德华氏菌 rnd1 sh2b3 epg5 microRNA

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细胞自噬对BVDV分泌的影响

细胞自噬对BVDV分泌的影响

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作者：艾桂青山东师范大学

学位级别：硕士

牛病毒性腹泻(粘膜病)是由牛病毒性腹泻病毒(Bovine Viral Diarrhea Virus,BVDV)引起的传染病。BVDV可以感染各个年龄段的牛,其中幼龄牛感染BVDV的风险最高。该病毒存在于感染牛的尿液、粪便、精液、血液和内脏器官中,可通过多种途径进... 详细信息

牛病毒性腹泻(粘膜病)是由牛病毒性腹泻病毒(Bovine Viral Diarrhea Virus,BVDV)引起的传染病。BVDV可以感染各个年龄段的牛,其中幼龄牛感染BVDV的风险最高。该病毒存在于感染牛的尿液、粪便、精液、血液和内脏器官中,可通过多种途径进行传播,已对全球养牛业的经济发展造成了巨大的损失。自噬是一种细胞降解和物质循环的过程,在全部真核生物中都是高度保守的。在哺乳动物细胞中,有三种主要类型的自噬:微自噬,巨自噬和分子伴侣介导的自噬(CMA)。在巨自噬中,会形成一种双膜囊泡,可将细胞内需要降解和运输的物质包裹起来,我们把这种双膜囊泡称为自噬体。晚期内体,又称多囊泡体(muLtivesicuLar bodies,MVBs),其中含有大量直径为40-100nm的小囊泡,当晚期内体与细胞膜融合后,可以将这种小囊泡释放到胞外,我们把释放到胞外的小囊泡体称为外泌体。自噬体可与晚期内体融合形成中间自噬囊泡,也可与溶酶体融合形成自噬溶酶体;当中间自噬囊泡与细胞膜融合后,可将外泌体中包裹的物质释放到细胞外。在本课题中,主要研究了BVDV的分泌与自噬过程之间的相互联系。经研究发现,病毒的分泌过程与自噬途径呈现一定程度的相关性,BVDV可利用自噬途径促进病毒粒子向胞外分泌。当自噬途径被自噬抑制剂3-MA、WM和CQ阻断时,可观察到自噬流强度减弱,经病毒毒价测定和Q-PCR检测发现,当细胞自噬被抑制时,细胞中总病毒毒价和病毒基因拷贝数无明显变化,而上清液中病毒毒价和病毒基因拷贝数明显降低,由此可以得出病毒向细胞外的分泌量出现了一定程度的减少。Beclin1是一种自噬相关基因,通过构建Beclin1稳定下调细胞系,可以稳定降低细胞的自噬流强度,细胞系感染BVDV后也出现了类似的结果,细胞中总病毒毒价和病毒基因拷贝数无明显变化,而上清液中病毒毒价和病毒基因拷贝数明显降低,所以病毒向细胞外的分泌量出现了一定程度的减少。在确定了BVDV分泌与自噬过程具有相关性后,进一步探索具体的相关通路。通过研究发现,自噬体-晚期内体通路与病毒的分泌具有一定的相关性。epg5是自噬体-晚期内体通路中的关键基因,通过构建epg5稳定下调细胞系,可观察到自噬体与溶酶体的融合率显著降低,感染BVDV后经病毒毒价测定和Q-PCR检测发现,细胞中总病毒毒价和病毒基因拷贝数无明显变化,而上清液中病毒毒价和病毒基因拷贝数明显降低,推断病毒向细胞外分泌的量出现了一定程度的减少,说明BVDV的分泌与自噬体-晚期内体途经相关。总之,我们的研究表明BVDV在MDBK细胞中可能不利用细胞自噬完成其复制,而利用自噬完成其向细胞外的分泌。

关键词：牛病毒性腹泻牛病毒性腹泻病毒自噬 epg5 晚期内体

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电离辐射对鼻咽癌CNE-2细胞自噬活性的影响

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广东医学院学报 2016年第3期34卷 258-263页

作者：许富刘磊峰王泽辉惠明朗朱丹崔德威广东医科大学广东湛江524023 广东医科大学附属医院耳鼻咽科广东湛江524001 广东医科大学附属医院肿瘤中心广东湛江524001

目的研究电离辐射对CNE-2细胞自噬活性和epg5表达的影响。方法 CNE-2细胞用不同剂量电离辐射照射后,透射电镜、qRT-PCR、Western blot分别检测自噬形态、自噬标志物(P62、LC3)及epg5表达;用RNA干扰技术(siRNA)沉默epg5基因表达,qRT-PCR... 详细信息

目的研究电离辐射对CNE-2细胞自噬活性和epg5表达的影响。方法 CNE-2细胞用不同剂量电离辐射照射后,透射电镜、qRT-PCR、Western blot分别检测自噬形态、自噬标志物(P62、LC3)及epg5表达;用RNA干扰技术(siRNA)沉默epg5基因表达,qRT-PCR及Western blot检测自噬标志物及epg5表达。结果电离辐射引起自噬小体数量增加、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高(Pepg5 mRNA表达下调(Pepg5-siRNA转染后epg5 mRNA表达下调(Pepg5基因表达,阻滞自噬溶酶体形成,从而影响CNE-2细胞自噬水平。

关键词：电离辐射自噬 epg5

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