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RI/R条件下A1型星形胶质细胞通过分泌饱和脂质诱导RGCs凋亡

RI/R条件下A1型星形胶质细胞通过分泌饱和脂质诱导RGCs凋亡

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作者：史文佳中南大学

学位级别：硕士

目的:探究视网膜缺血/再灌注(retinal ischemia/reperfussion,RI/R)损伤条件下星形胶质细胞的A1型极化诱导视网膜神经元凋亡的机制。方法:1)动物实验采用急性高眼压(acute intraocular hypertension,AIH)大鼠模型,细胞实验采用肿瘤坏死... 详细信息

目的:探究视网膜缺血/再灌注(retinal ischemia/reperfussion,RI/R)损伤条件下星形胶质细胞的A1型极化诱导视网膜神经元凋亡的机制。方法:1)动物实验采用急性高眼压(acute intraocular hypertension,AIH)大鼠模型,细胞实验采用肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、白介素1α(Interleukin-1α,IL-1α)和补体1q(Component1q,C1q)诱导星形胶质细胞A1型极化,并结合R28细胞氧糖剥夺/恢复(oxygen and glucose deprivation/recovery,OGD/R)模型。2)采用免疫荧光实验从形态学角度评估GFAP、C3、S100A10、elovl1的蛋白表达情况;采用TUNEL染色、PI染色评估细胞凋亡情况。3)采用蛋白质印记法(western blot,WB)检测GFAP、C3、S100A10、elovl1、p-PERK、p-e IF2α、ATF4、CHOP、Bax和Bcl-2的蛋白表达量。4)采用荧光定量聚合酶链式反应(QRT-PCR)从转录水平检测TNF-α、IL-1β、i NOS、BDNF和elovl1-elovl7的表达情况。5)采用脂质组学测序的方法检测星形胶质细胞培养基内长链饱和游离脂肪酸(free fatty acids,FFAs)的相对含量。结果:1)RI/R损伤后12h时,视网膜星形胶质细胞向A1表型极化达到峰值;RI/R损伤后3d时,视网膜星形胶质细胞向A2表型极化达到峰值。2)与正常组相比,A1型星形胶质细胞内elovl1基因表达增加,释放大量长链饱和FFAs,通过si RNA抑制elovl1的表达从而抑制饱和脂质的产生可显著改善神经元凋亡。3)A1型星形胶质细胞条件培养基可能通过激活PERK/e IF2α/ATF4/CHOP通路诱导神经元凋亡。结论:在RI/R损伤前期,视网膜星形胶质细胞向A1表型极化,分泌大量长链饱和FFAs,可能通过PERK/e IF2α/ATF4/CHOP通路介导内质网(endoplasmic reticulum,ER)应激引起视网膜神经元凋亡。图9幅,表10个,参考文献217篇

关键词：视网膜缺血/再灌注氧糖剥夺/恢复 A1型星形胶质细胞长链饱和游离脂肪酸 elovl1 内质网应激

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