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Ets转录因子elk1功能及其作用机制的研究进展

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中国生物制品学杂志 2023年第5期36卷 614-618,625页

作者：赵元莘翟岩辉(综述) 师粒晶李子义(审校) 吉林大学白求恩第一医院器官再生与移植教育部重点实验室吉林长春130021 吉林大学动物科学学院吉林长春130062

Ets转录因子elk1是Ets转录因子家族中三元复合物(ternary complex factor,TCF)亚家族成员之一,是MAPK/ERK信号通路的直接下游转录因子,磷酸化后具有激活ERK信号的功能。elk1在干细胞和肿瘤细胞中呈高表达且磷酸化程度高,在干细胞中具有... 详细信息

Ets转录因子elk1是Ets转录因子家族中三元复合物(ternary complex factor,TCF)亚家族成员之一,是MAPK/ERK信号通路的直接下游转录因子,磷酸化后具有激活ERK信号的功能。elk1在干细胞和肿瘤细胞中呈高表达且磷酸化程度高,在干细胞中具有促进增殖、抑制凋亡和分化的作用;在肿瘤细胞中具有促进增殖、迁移,抑制凋亡的作用。在神经细胞中,elk1参与长期记忆、学习和成瘾等功能的发挥。本文就elk1的主要结构及基本生物学特性、elk1在肿瘤细胞、干细胞和神经细胞中的功能及其作用机制的研究进展作一综述,以期为后续相关研究提供新思路。

关键词： elk1 Ets家族 MAPK/ERK信号通路肿瘤细胞干细胞神经细胞

东北马鹿elk1基因CDS序列克隆及其生物信息学分析

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黑龙江畜牧兽医 2023年第9期 116-120,134页

作者：武世瑶罗兆聪高仰韩青索靖媛金庆梅郑冬刘学东东北林业大学野生动物与自然保护地学院

为探究东北马鹿elk1基因CDS序列信息,试验进行了mRNA反转录、CDS序列扩增,测定elk1基因CDS序列,克隆并构建蛋白表达载体,利用生物信息学方法对该基因编码的蛋白质结构及理化性质等进行了预测与分析。结果表明:东北马鹿elk1基因转录产物... 详细信息

为探究东北马鹿elk1基因CDS序列信息,试验进行了mRNA反转录、CDS序列扩增,测定elk1基因CDS序列,克隆并构建蛋白表达载体,利用生物信息学方法对该基因编码的蛋白质结构及理化性质等进行了预测与分析。结果表明:东北马鹿elk1基因转录产物CDS序列全长为1323 bp(GenBank登录号为ON212657),编码440个氨基酸,分子量为46200.42 u。核酸序列具有进化保守性,与牛elk1基因同源性最高,为97.99%。elk1多肽链具有亲水性,没有分泌信号肽结构,等电点为5.81,蛋白质为不稳定蛋白。elk1蛋白的二级结构由无规则卷曲、α-螺旋、延伸链、β-折叠组成,存在ETS DNA结合域,亚细胞定位于细胞核。

关键词：马鹿鹿茸软骨 elk1 CDS序列生物信息学分析

转录因子NF-κB家族、STAT1、elk1核表达对中晚期宫颈癌患者预后的评估价值

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中国妇产科临床杂志 2022年第1期23卷 28-30页

作者：张娟张栋栋徐蕾彭德强翟康路山东省淄博市妇幼保健院妇科 255000

目的探讨核转录因子NF-κB(NF-κB)家族、信号转录与转录激活子1(STAT1)、调节转录因子1(elk1)核表达对中晚期宫颈癌预后评估价值。方法78例宫颈癌患者组织标本,分为宫颈癌组(n=78)、正常组(n=30),行免疫组织化学检测,随访预后分为存活... 详细信息

目的探讨核转录因子NF-κB(NF-κB)家族、信号转录与转录激活子1(STAT1)、调节转录因子1(elk1)核表达对中晚期宫颈癌预后评估价值。方法78例宫颈癌患者组织标本,分为宫颈癌组(n=78)、正常组(n=30),行免疫组织化学检测,随访预后分为存活组、死亡组,比较各组宫颈组织转录因子NF-κB家族(c-Rel、p50、p65)、STAT1、elk1核表达。结果宫颈癌组c-Rel、NF-k B p50、NF-k B p65阳性表达率、elk1阳性表达率均明显高于正常组,STAT1阳性表达率较正常组低(P1.03%,死亡组、存活组FIGO分期、病理类型、肿瘤大小、淋巴结转移、NF-κB家族c-Rel、NF-k B p50、NF-k B p65阳性表达率、elk1阳性表达率、STAT1阳性表达率比较差异均有统计学意义(Pelk1及STAT1阳性表达是宫颈癌患者预后的影响因素(P1、elk1核表达与宫颈癌患者预后密切相关(P1、elk1或可作为中晚期宫颈癌治疗及预后评估的潜在靶基因。

关键词：宫颈癌中晚期预后 NF-κB家族 STAT1 elk1

SLP-2、elk1和Smad4在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义

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SLP-2、ELK1和Smad4在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义

作者：高飞佳木斯大学

学位级别：硕士

目的通过检测SLP-2、elk1和Smad4在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)中的表达,分析SLP-2、elk1和Smad4在PTC癌组织中表达情况以及三者表达水平与PTC患者临床病理特征的相关性,探讨SLP-2、elk1和Smad4在PTC诊断及治疗中... 详细信息

目的通过检测SLP-2、elk1和Smad4在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)中的表达,分析SLP-2、elk1和Smad4在PTC癌组织中表达情况以及三者表达水平与PTC患者临床病理特征的相关性,探讨SLP-2、elk1和Smad4在PTC诊断及治疗中的价值。方法1.收集佳木斯大学附属第一医院2019年1月-2022年12月期间符合纳入标准的甲状腺乳头状癌(经典型)癌组织及对应癌旁正常组织新鲜标本各30例,PTC患者石蜡包埋组织60例(包含前30例组织样本),收集所有患者的临床病理资料。2.应用q RT-PCR方法检测PTC癌组织及对应癌旁正常组织中SLP-2、elk1和Smad4的m RNA表达水平。3.应用免疫组化方法检测PTC石蜡组织中SLP-2、elk1和Smad4的蛋白表达情况。4.应用SPSS软件分析三者m RNA及蛋白表达情况与患者临床病理特征的相关性。5.应用Spearman相关性分析分析SLP-2、elk1和Smad4之间的相关性。6.应用ROC曲线下面积(Area Under The Curve,AUC)表示SLP-2、elk1和Smad4及三者联合在PTC中的诊断效能。结果1.qRT-PCR及免疫组化结果显示:SLP-2和elk1在PTC癌组织中表达水平均高于癌旁正常组织(Pelk1和Smad4的表达水平与患者临床病理特征分析结果显示:三者分子及蛋白表达水平均与患者TNM分期、淋巴结转移和肿瘤浸润程度相关(Pelk1表达呈正相关(r=0.662,P1);SLP-2、elk1表达与Smad4均呈负相关(r=-0.600,P1和r=-0.641,P1)。4.ROC曲线显示:三者在甲状腺乳头状癌组织中联合检测与单一检测相比,具有较高的诊断效能。(组织中ROC曲线下面积(AUC)为0.9833,灵敏度为100%,特异度为90%)结论1.SLP-2、elk1和Smad4参与甲状腺乳头状癌的发生及发展。2.SLP-2、elk1的过表达和Smad4的低表达提示患者预后不良。3.SLP-2、elk1和Smad4三者联合检测,有助于提高甲状腺乳头状癌诊断及预后的判断,为临床治疗甲状腺乳头状癌提供新的方向及思路。

关键词：甲状腺乳头状癌 SLP-2 elk1 Smad4 免疫组织化学方法临床病理特征

转录因子elk1调控马鹿MicroRNA PC-3P-2869基因转录表达初探

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转录因子ELK1调控马鹿MicroRNA PC-3P-2869基因转录表达初探

作者：武世瑶东北林业大学

学位级别：硕士

鹿茸作为哺乳动物唯一具有周期性再生特性的附件器官,具有极高的生物医学研究价值。表观遗传学旨在探索基因表达的可遗传性变异,其中MicroRNA(miRNA)是一个主要的调控因子,它可以有效地影响基因组的表达,从而改变生物的性状。在前期研究... 详细信息

鹿茸作为哺乳动物唯一具有周期性再生特性的附件器官,具有极高的生物医学研究价值。表观遗传学旨在探索基因表达的可遗传性变异,其中MicroRNA(miRNA)是一个主要的调控因子,它可以有效地影响基因组的表达,从而改变生物的性状。在前期研究中,在东北马鹿(Cervus elaphus)的快速生长期,发现了一个新的miRNA,命名为miR-PC-3P-2869(miR-PC-2869),但其转录和表达的调控机制尚不清晰。经过精确的定位,笔者确定了miR-PC-2869基因在马鹿参照基因组上的位置,并利用生物信息学技术,对其上游调控区域的核心启动子和转录因子进行了深入的研究,最终采用荧光素酶报告基因检测法,得出了有效结论:(1)首次获得东北马鹿elk1蛋白CDS区序列,生物信息学研究发现:elk1CDS区全长1323 bp,具有较强进化保守性,与牛elk1基因的相似度最高,达到97.99%;该基因组的CDS区可以编码形成由440个氨基酸组成的elk1蛋白,分子量为46.2 KD;elk1蛋白质具有亲水性,等电点5.81,二级结构具有无规则卷曲、α-螺旋、延长链和β-折叠,具有ETS结构域,亚细胞定位位于细胞核上;(2)核心启动子区F为miR-PC-2869的核心启动子区;(3)转录因子elk1正调控miR-PC-2869的表达,在miR-PC-2869的启动子区域内存在3个结合位点,其中结合位点3起主导作用。这一发现为东北马鹿鹿茸软骨组织的再生研究提供了重要的基础数据,为后续研究提供基础。

关键词： MicroRNA PC-3P-2869 elk1 启动子

转录因子elk1对猪体外受精植入前胚胎发育潜能的影响及机制研究

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转录因子ELK1对猪体外受精植入前胚胎发育潜能的影响及机制研究

作者：赵元莘吉林大学

学位级别：硕士

转录因子在早期胚胎发育过程中对表观重编程和合子基因激活发挥着重要作用。近年来,已有大量的实验研究发现了多种转录因子在不同物种的胚胎发育过程中的重要作用。但是,目前关于猪早期胚胎发育过程中起到关键调控作用的转录因子的相关... 详细信息

转录因子在早期胚胎发育过程中对表观重编程和合子基因激活发挥着重要作用。近年来,已有大量的实验研究发现了多种转录因子在不同物种的胚胎发育过程中的重要作用。但是,目前关于猪早期胚胎发育过程中起到关键调控作用的转录因子的相关研究还很少。为此,本实验首先通过生信手段预测了转录因子elk1在猪胚胎发育过程中的重要作用,随后通过q PCR和免疫荧光染色研究了elk1基因在猪体外受精（In vitro fertilization,IVF）胚胎中的表达规律,并通过沉默elk1基因后观察其对胚胎发育表型、表观重编程以及多能性基因的影响。最后通过转录组分析探究了elk1基因沉默对于4细胞胚胎表达谱的影响。主要结果如下:1.我们通过对比猪体内受精胚胎各时期转录组结果,发现猪胚胎合子基因激活是在4细胞阶段开始的。随后通过对合子基因激活时结合的转录因子富集发现elk1排名为第一位。对这些基因的富集显示,这些基因功能大多集中在蛋白质合成的过程中,这引起了我们对elk1的浓厚兴趣。为了进一步研究其功能,我们检测了elk1基因在IVF植入前胚胎中的表达规律,通过免疫荧光染色以及q PCR,我们发现elk1在4细胞时期显著上调,在囊胚阶段几乎不表达。因此,我们推测elk1可能在合子激活阶段发挥重要作用。同时对MII时期卵母细胞的免疫荧光染色显示,elk1几乎不存在母源表达,这为后续实验通过si RNA沉默elk1提供了可行性。2.为了进一步研究elk1对猪胚胎发育潜能的影响,我们通过胞质注射elk1 si RNA沉默IVF胚胎的elk1基因,以正常组为对照,我们发现elk1基因沉默会显著降低胚胎的卵裂率与囊胚率,其中以囊胚率下降尤为显著。随后对于囊胚细胞数与凋亡率统计发现,虽然囊胚细胞数没有明显差异,但是凋亡率却明显升高。为了研究elk1对于早期胚胎发育过程中表观重编程的影响,我们通过免疫荧光染色发现elk1基因沉默后会导致4细胞胚胎H3K9Ac修饰显著降低,而H3K9me3修饰显著增加。结果表明表观重编程的异常导致大量的基因不能正常激活。随后通过免疫荧光染色发现,elk1基因沉默后还会显著降低囊胚中多能性基因Oct4的表达量。3.为了深入研究elk1对于猪胚胎发育的影响以及深层分子机理,我们通过RNA-seq技术对比了elk1基因沉默组与正常组的IVF胚胎基因表达差异,我们通过GO与KEGG富集后发现,大量的蛋白合成相关基因与通路受到严重影响。此外,细胞周期相关基因与通路也受到了显著影响,这在一定程度上解释了胚胎发育率低下的原因。GO分析同样富集到了大量DNA损伤修复相关基因,这在一定程度上解释了TUNEL染色发现了大量凋亡细胞的原因。转录组数据显示表观修饰相关基因未见显著差异,因此我们推测elk1对于表观重编程的影响可能是由于蛋白质合成受到影响进而导致无法正常建立表观遗传修饰。此外,我们对elk1沉默后上调基因的富集发现,上调基因的功能集中于有氧呼吸的呼吸链,我们推测这可能是细胞为了修复elk1沉默带来的损伤而加大了能量的消耗量的一种“自救”手段。

关键词： elk1 表观重编程胚胎发育体外受精猪

LncRNA 122049在缺血再灌注所致急性肾损伤中的作用及机制研究

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LncRNA 122049在缺血再灌注所致急性肾损伤中的作用及机制研究

作者：肖英中南大学

学位级别：硕士

目的:探索长链非编码RNA LncRNA 122049在缺血再灌注急性肾损伤中的表达变化,及其在缺血再灌注急性肾损伤肾小管上皮细胞凋亡中的作用及机制研究,为减轻缺血再灌注诱导的急性肾损伤提供理论依据和治疗靶点。方法:建立小鼠缺血再灌注(Isc... 详细信息

目的:探索长链非编码RNA LncRNA 122049在缺血再灌注急性肾损伤中的表达变化,及其在缺血再灌注急性肾损伤肾小管上皮细胞凋亡中的作用及机制研究,为减轻缺血再灌注诱导的急性肾损伤提供理论依据和治疗靶点。方法:建立小鼠缺血再灌注(Ischemia/reperfusion,I/R)急性肾损伤模型和肾小管上皮细胞(Boston University mouse proximal tubular cell lines,BUMPT)ATP耗竭再恢复模型,通过定量逆转录PCR(quantitative reverse transcription PCR,RT-q PCR)检测LncRNA122049的表达变化情况;敲低或过表达LncRNA 122049,检测其在ATP耗竭再恢复损伤后肾小管上皮细胞凋亡的作用。通过生物信息分析预测并筛选LncRNA 122049的下游miRNA,双荧光素酶报告基因实验、荧光原位杂交技术(Fluorescence in situ hybridization,FISH)和RT-q PCR,验证LncRNA 122049对miR-330-5p的直接调控作用,并转染miR-330-5p模拟物,检测其对I/R诱导的肾小管上皮细胞凋亡影响;通过生物信息分析预测并筛选miR-330-5p下游靶基因,双荧光素酶报告基因实验和RT-q PCR验证miR-330-5p对elk1的调控作用,并验证elk1对I/R诱导的肾小管上皮细胞凋亡的影响;通过功能回复实验验证LncRNA 122049通过miR-330-5p/elk1信号轴调控肾小管上皮细胞凋亡。体内实验造模后通过RT-q PCR法检测LncRNA 122049、miR-330-5p和elk1的表达水平;检测血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平和肌酐(Serum creatine,Scr)水平;HE染色观察肾脏组织病理学变化;肾小管损伤评分,TUNEL检测细胞凋亡水平;蛋白免疫印迹检测凋亡相关蛋白caspase 3和cleaved caspase 3的表达水平,探索过表达LncRNA 122049对缺血再灌注急性肾损伤肾功能的影响。结果:LncRNA 122049在肾小管上皮细胞ATP耗竭再恢复模型中和小鼠缺血再灌注损伤肾组织中表达上调。与对照组相比,敲低LncRNA122049显著促进ATP耗竭再恢复诱导肾小管上皮细胞的凋亡,过表达LncRNA 122049抑制肾小管上皮细胞凋亡。LncRNA 122049主要在肾小管上皮细胞胞质中表达,通过生物信息学筛选预测、双荧光素酶报告基因实验和FISH共定位实验验证miR-330-5p可以与LncRNA122049直接结合,同时miR-330-5p在体内和体外I/R过程中均表达下调,同时LncRNA 122049可以负向调控miR-330-5p。过表达miR-330-5p对肾小管上皮细胞的凋亡有明显的促进作用;采用生物信息分析方法预测和筛选miR-330-5p下游靶基因elk1,通过荧光素酶报告基因实验验证miR-330-5p可直接与elk1结合作用,转染miR-330-5p模拟物对I/R诱导的elk1的mRNA和蛋白表达水平存在显著抑制,而敲低elk1后I/R诱导的细胞凋亡和凋亡相关蛋白表达均显著增加;在ATP耗竭再恢复细胞模型中,敲低LncRNA 122049促进细胞凋亡,当同时抑制miR-330-5p的表达水平时,LncRNA122049促进细胞凋亡的作用被逆转;在过表达LncRNA 122049的C57BL/6J小鼠体内,进行缺血再灌注肾损伤造模后,血肌酐水平、尿素氮水平及肾组织损伤评分明显较空载体组减少,肾组织中LncRNA 122049和elk1的表达水平明显上调,miR-330-5p的表达水平显著降低,肾小管细胞TUNEL阳性细胞数、cleaved caspase-3蛋白水平也明显较空载体组降低。结论:1.LncRNA 122049在肾小管上皮细胞ATP耗竭再恢复模型和缺血再灌注急性肾损伤动物模型表达上调,且可抑制肾小管上皮细胞凋亡;2.体外研究证实在肾小管上皮细胞ATP耗竭再恢复过程中,LncRNA 122049通过LncRNA 122049/miR-330-5p/elk1轴调控细胞凋亡;3.体内研究表明靶向上调LncRNA 122049通过调控miR-330-5p/elk1调节轴减少缺血再灌注诱导的肾小管上皮细胞凋亡,减轻肾损伤。图23幅,表9幅,参考文献67篇

关键词：急性肾损伤缺血再灌注损伤细胞凋亡 LncRNA122049 miR-330-5p elk1

miR-432-3p靶向elk1调控甲状腺癌细胞SW579的凋亡

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生物技术 2022年第4期32卷 451-458,437页

作者：张馨月刘地发李春香邵春燕葛春霞江苏省海安市人民医院血液肿瘤科江苏海安220060

[目的]探讨甲状腺癌细胞SW579中PTEN通路调控细胞凋亡的潜在机制。[方法]免疫组织化学和实时荧光定量PCR检测PTEN在甲状腺癌组织和癌旁组织中的表达水平。过表达PTEN后,检测甲状腺癌细胞SW579凋亡水平。通过启动子区域转录因子预测后筛... 详细信息

[目的]探讨甲状腺癌细胞SW579中PTEN通路调控细胞凋亡的潜在机制。[方法]免疫组织化学和实时荧光定量PCR检测PTEN在甲状腺癌组织和癌旁组织中的表达水平。过表达PTEN后,检测甲状腺癌细胞SW579凋亡水平。通过启动子区域转录因子预测后筛选甲状腺癌细胞SW579中调控PTEN的转录因子。通过miRDB数据库在线分析和实时荧光定量PCR鉴定转录因子的miRNA。过表达或敲低miRNA,检测甲状腺癌细胞SW579的凋亡水平。[结果]PTEN在甲状腺癌组织中的蛋白和mRNA表达水平小于癌旁组织。在甲状腺癌细胞SW579中过表达PTEN后,甲状腺癌细胞SW579的凋亡水平上升(P1后,PTEN的表达水平下降(Pelk1后,PTEN的表达水平上升(P1在甲状腺癌组织中mRNA和蛋白的表达水平低于癌旁组织(Pelk1在甲状腺癌组织中mRNA和蛋白的表达水平高于癌旁组织(Pelk1后,EGR1的mRNA表达水平显著上升(Pelk1的mRNA和蛋白表达水平上升(P1和PTEN的蛋白表达水平下降(Pelk1的mRNA和蛋白表达水平下降(P1和PTEN的蛋白表达水平上升(Pelk1 mRNA 3’端非编码区,抑制elk1的mRNA和蛋白表达水平,增加转录因子ERG1的转录,提升了PTEN蛋白的表达,最终促进了甲状腺癌细胞SW579的凋亡水平。

关键词： miR-432-3p elk1 甲状腺癌 SW579 PTEN 凋亡

沙利度胺联合顺铂对宫颈癌Hela细胞elk1信号转导分子活性的影响

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河北医药 2022年第12期44卷 1829-1832页

作者：刘彩茹冯海芹王玉红张丽娜杨丽萍河北省邯郸市中心医院妇产科 056002

目的沙利度胺联合顺铂对宫颈癌Hela细胞的抑制激励及对elk1信号转导分子活性的影响。方法本实验采用免疫组织化学(IHC)分析、荧光素酶活性检测、RT-PCR和Western Blot对沙利度胺联合顺铂处理后宫颈癌细胞的凋亡和elk1转录因子的活性,以... 详细信息

目的沙利度胺联合顺铂对宫颈癌Hela细胞的抑制激励及对elk1信号转导分子活性的影响。方法本实验采用免疫组织化学(IHC)分析、荧光素酶活性检测、RT-PCR和Western Blot对沙利度胺联合顺铂处理后宫颈癌细胞的凋亡和elk1转录因子的活性,以及elk1、c-fos和caspase-8基因和蛋白的表达进行了检测和分析。结果沙利度胺联合顺铂处理后能显著的抑制elk1转录因子的活性,显著下调elk1和c-fos基因和蛋白的表达并显著上调caspase-8基因和蛋白的表达(P<0.05)。且沙利度胺联合顺铂的治疗效果要比它们单独使用更加显著(P<0.05)。结论沙利度联合顺铂具有抑制宫颈癌细胞的增殖和促进细胞凋亡的作用。

关键词：沙利度胺顺铂宫颈癌细胞 Hela elk1