检索结果-南通市图书馆

作者：徐子钧吉林大学

学位级别：硕士

研究背景:中性粒细胞作为人类髓系白细胞中最丰富的一种细胞,是抵御包括细菌、病毒等多种病原体的主要应答者。成熟的中性粒细胞在调控因子作用下或保留在骨髓中或释放入血,释放入血的中性粒细胞在各种整合蛋白及趋化因子的作用下滚动迁... 详细信息

研究背景:中性粒细胞作为人类髓系白细胞中最丰富的一种细胞,是抵御包括细菌、病毒等多种病原体的主要应答者。成熟的中性粒细胞在调控因子作用下或保留在骨髓中或释放入血,释放入血的中性粒细胞在各种整合蛋白及趋化因子的作用下滚动迁移,从血管到达局部组织发挥作用。中性粒细胞在激活和调节天然免疫及适应性免疫中发挥重要作用,近些年的研究发现,中性粒细胞不仅存在于抗感染环节中,在肿瘤中也被大量发现,被称为肿瘤相关中性粒细胞(tumor-associated neutrophils,TANs),TANs是肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)的重要组成部分。作为TME中重要的炎性细胞,TANs具有多样性及异质性,表现出抗肿瘤及促肿瘤的双重作用。2009年美国学者Fridlender提出命名,将介导抗肿瘤作用的TANs称为N1型TANs,介导促肿瘤作用的TANs称为N2型TANs。在TME复杂的大环境中,TANs可发生极化,并且发现两种类型TANs可相互转化,这一过程可受到细胞因子及表观遗传学信号的诱导调节。既往大多数研究着重聚焦在N2型TANs的促肿瘤方面,对N1型TANs研究较少且局限,忽视了其本身的抗肿瘤作用及应用前景。先前关于抗肿瘤机制的研究表明,N1型TANs可通过直接的细胞毒作用抗肿瘤,其中主要是指抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用(antibody-dependent cell mediated cytotoxicity,ADCC);还可以通过激活TME中T细胞间接发挥抗肿瘤作用,同时TME中各种趋化因子、生长因子及细胞因子影响两种类型TANs的相互转化,作为TANs特有的一种炎性细胞死亡方式,中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs),它是一种由DNA和蛋白质组成的网状结构,或将成为近年的研究热点。中性细胞弹性蛋白酶(elastase neutrophil expressed,elane)作为丝氨酸蛋白酶的一个亚家族,除弹性蛋白酶外,还可以水解许多蛋白质,前人的研究中将其视为一种促肿瘤因素,直到最近美国学者Cui等得出了不同的研究结果,在体外实验中观察到elane是中性粒细胞条件培养基中的主要抗肿瘤蛋白,可以选择性杀伤肿瘤细胞并抑制肿瘤的形成,同时对非肿瘤细胞没有杀伤作用。在后续动物模型体内验证实验中,发现elane的抗肿瘤作用受到了TME中丝氨酸蛋白酶抑制剂的削弱。作为32%氨基酸同源性的猪胰腺弹性蛋白酶(porcine pancreatic elastase,PPE)是猪胰腺来源的一种丝氨酸蛋白酶,与elane具有相似的蛋白质结构和主要底物特异性,但不易受丝氨酸蛋白酶的抑制作用,从而增加对肿瘤的杀伤效果。同时elane抑制肿瘤生长并诱导CD8+T细胞介导的非特异性效应,并且TANs与T细胞的作用是相互的,CD8+T细胞耗竭将减弱TANs的抗肿瘤作用。基于以上研究现状及背景,根据实验目的,首先构建人源化的PPE,命名为HPPE(human porcine pancreatic elastase),前期调查发现人胰弹性蛋白酶1(chymochypsin like elastase 1,ELA1)与elane具有相似编码序列,也是弹性蛋白酶基因,综上所述本研究确定了关键基因,旨在探究elane、ELA1及HPPE的抗肿瘤作用,以期为肿瘤治疗提供新的思路。研究方法:1.根据基因序列信息,得到目的基因质粒,根据后续实验需要确定表达载体,该载体需带有荧光标签及筛选标志,方便后续细胞转染。在目的质粒及载体上选择合适酶切位点,将目的质粒与载体双酶切后进行T4连接,连接产物进行转化后扩大培养,从而构建重组表达载体及空载体。载体的命名分别如下述,空载Lenti-p EF1-IFNlp-cop GFP-Puro(简称PEF),空载无荧光Lenti-p EF1-IFNlp-Puro(简称PEF无GFP),重组表达载体分别为,Lenti-p EF1-IFNlp-elane-cop GFP-Puro(简称elane+PEF),Lenti-p EF1-IFNlp-elane-Puro(简称elane+PEF无GFP),Lenti-p EF1-IFNlp-ELA1-cop GFP-Puro(简称ELA1+PEF),Lenti-p EF1-IFNlp-ELA1-Puro(简称ELA1+PEF无GFP),Lenti-p EF1-IFNlp-HPPE-cop GFP-Puro(简称HPPE+PEF),Lenti-p EF1-IFNlp-HPPE-Puro(简称HPPE+PEF无GFP)。2.对构建的重组表达载体及空载体进行验证,包括酶切验证及菌落PCR验证,产物经过琼脂糖凝胶电泳将其与目标

关键词：中性粒细胞弹性蛋白酶 elane 过表达载体稳转细胞系杀伤

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elane突变相关的中性粒细胞减少症诊治进展

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现代医药卫生 2023年第18期39卷 3168-3172页

作者：肖于凡(综述) 张志勇(审校) 重庆医科大学附属儿童医院风湿免疫科/国家儿童健康与疾病临床医学研究中心/儿童发育疾病研究教育部重点实验室/儿童感染免疫重庆市重庆重点实验室重庆400014

elane突变相关的中性粒细胞减少症有重度先天性中性粒细胞减少症(SCN)和周期性中性粒细胞减少症(CyN)2种表型,是常染色体显性遗传的原发性免疫缺陷病。elane基因突变位点多,发病机制尚不清楚,导致的SCN和CyN起病早、感染反复、感染部位... 详细信息

elane突变相关的中性粒细胞减少症有重度先天性中性粒细胞减少症(SCN)和周期性中性粒细胞减少症(CyN)2种表型,是常染色体显性遗传的原发性免疫缺陷病。elane基因突变位点多,发病机制尚不清楚,导致的SCN和CyN起病早、感染反复、感染部位多,可恶性转化为MDS或急性白血病,甚至死亡。血常规、骨髓细胞学检查、基因分析有助于该病的诊治;患者需长期血常规监测,定期复查骨髓细胞学检查,基因分析是确诊的金标准。预防感染是长期管理的必要措施,G-CSF是一线治疗药物,使用剂量个体差异大;HSCT可根治该病,但移植指征、预处理方案无统一指南。此外,基因编辑是未来根治此病的方向。

关键词： elane 先天性中性粒细胞减少重症中性粒细胞减少周期性中性粒细胞减少原发性免疫缺陷病综述

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复方川芎嗪抗胃癌的网络药理学研究

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四川大学学报（医学版） 2024年第5期55卷 1114-1122页

作者：许威邓昭敏王辛姜昊四川大学华西医院消化肝病科衰老与肿瘤研究室疾病分子网络前沿科学中心国家老年疾病临床医学研究中心呼吸和共病全国重点实验室成都610041 四川大学华西医院肿瘤中心腹部肿瘤病房/放疗科成都610041

目的利用网络药理学,结合基因功能注释及临床数据分析,探索复方川芎嗪在胃癌中的潜在作用位点以及机制。方法首先利用SwissTargetPrediction数据库筛选复方川芎嗪的潜在药物作用位点,并结合OMIM和Genecard数据库获取胃癌相关靶点。通过... 详细信息

目的利用网络药理学,结合基因功能注释及临床数据分析,探索复方川芎嗪在胃癌中的潜在作用位点以及机制。方法首先利用SwissTargetPrediction数据库筛选复方川芎嗪的潜在药物作用位点,并结合OMIM和Genecard数据库获取胃癌相关靶点。通过交集分析确定潜在的治疗靶点。随后,利用ClusterProfiler的方法对交集下游靶点进行功能注释。同时,利用TCGA数据库获取胃癌患者的原始数据,进行免疫浸润分析、miRNA分析、关键基因的转录调控分析、基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)、基因集差异分析(gene set variation analysis,GSVA)、nomogram模型构建以及全基因组关联研究(genome-wide association studies,GWAS)分析等。结果通过网络药理学筛选,共发现川芎嗪作用于胃癌有14个潜在治疗靶点。功能注释结果显示,这些靶点主要涉及激素代谢、药物代谢和信号转导等通路。基于log rank检验,关键基因elane和MPO的表达在胃癌生存曲线的比较中,差异有统计学意义(Pelane和MPO可能通过多条信号通路影响胃癌的发展。结论本研究通过综合多种分析方法,揭示了复方川芎嗪可能通过调节潜在靶点elane和MPO,以及相关的信号通路,对胃癌起治疗作用。

关键词：胃癌复方川芎嗪 MPO elane

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Clinical Pathological Correlation Quiz: A 7-Month-Old Girl with Congenital Neutropenia and Increased Bone Morrow “Blasts”

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Open Journal of Pathology 2014年第1期4卷 1-4页

作者： Ruchika Sharma Jessica A. Hemminger Samir B. Kahwash Department of Pathology and Laboratory Medicine Nationwide Children’s Hospital Columbus USA Department of Pathology and Laboratory Medicine Wexner Medical Center at the Ohio State University Columbus USA Division of Hematology/Oncology Nationwide Children’s Hospital Columbus USA

Persistent Neutropenia in a child presents a wide differential diagnosis, spanning the spectrum of benign disorders (such as congenital neutropenia, cyclic neutropenia, etc.) to malignant processes (such as myelodysplasia or acute leukemia). The morphologic findings in the bone marrow of a patient with neutropenia may show considerable overlap with those seen in hematopoietic malignancies. We present herein a case that demonstrates this overlap and discuss features that can help in avoiding diagnostic pitfalls.

关键词： Neutropenia Hematogones elane Mutation Acute Leukemia

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51例先天性中性粒细胞减少症患者临床特点与基因突变分析

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临床血液学杂志 2021年第9期34卷 636-641页

作者：万扬杨文钰刘天峰常丽贤陈晓娟竺晓凡陈玉梅中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所) 实验血液学国家重点实验室国家血液系统疾病临床医学研究中心儿童血液病诊疗中心天津300020

目的:探讨先天性中性粒细胞减少症(CN)患儿的临床特点与基因突变情况。方法:回顾性分析2006年1月—2020年12月我中心确诊的51例CN患儿临床特点,采用二代测序方法检测CN相关致病基因突变。结果:共入组51例CN患儿,男25例,女26例,中位发病... 详细信息

目的:探讨先天性中性粒细胞减少症(CN)患儿的临床特点与基因突变情况。方法:回顾性分析2006年1月—2020年12月我中心确诊的51例CN患儿临床特点,采用二代测序方法检测CN相关致病基因突变。结果:共入组51例CN患儿,男25例,女26例,中位发病年龄16个月(0~142个月),约79.54%的患儿有频繁感染病史,中位中性粒细胞计数0.30×10^(9)/L(0.07×10^(9)/L~0.88×10^(9)/L)。流式细胞术检测21例患儿淋巴细胞亚群,CN患儿CD3 T细胞和CD19 B细胞比例平均值低于同年龄段正常儿童。而CN儿童各年龄段IgG、IgA平均值略高于同年龄段正常儿童。完成基因测序的31例CN患儿中,15例检出CN相关基因突变,包括elane突变4例,CXCR4突变2例,GATA2、GFI1、G6PC3、HAX1、AP3B1、CSF3R、LYST、VPS13B各1例,另有1例患儿同时携带VPS45及AP3B1杂合突变。结论:CN患儿发病年龄小,多数有频繁感染病史,可能存在淋巴细胞亚群异常。elane为CN常见的致病突变。

关键词：中性粒细胞缺乏骨髓衰竭 elane

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PM2.5暴露引起COPD患者差异表达circRNA及其功能研究

PM2.5暴露引起COPD患者差异表达circRNA及其功能研究

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作者：崔健东南大学

学位级别：硕士

大量流行病学研究表明环境细颗粒物(fine particulate matter,PM)与呼吸系统疾病之间存在相关性。环状RNA(circRNA)具有高度稳定和组织特异等特点,已被证实参与多种疾病的发生发展过程。在本课题研究中,通过circRNA Microarray技术发现P... 详细信息

大量流行病学研究表明环境细颗粒物(fine particulate matter,PM)与呼吸系统疾病之间存在相关性。环状RNA(circRNA)具有高度稳定和组织特异等特点,已被证实参与多种疾病的发生发展过程。在本课题研究中,通过circRNA Microarray技术发现PM暴露前后COPD患者血浆中差异表达的circRNA,并在COPD人群血浆中进行验证。建立HBE细胞体外PM暴露模型和小鼠体内PM染毒模型,以此来开展circRNA功能研究。此外,我们通过蛋白质谱(iTRAQ法)技术发现PM暴露前后COPD患者血浆外泌体中的差异蛋白,旨在从蛋白水平探究circRNA参与PM致COPD效应的调控作用。一、PM暴露致COPD患者血浆中circRNA表达谱改变1.通过circRNA Microarray分析技术,探讨PM暴露前后COPD患者血浆中circRNA表达变化,结果显示,与PM暴露前相比,PM暴露后COPD患者血浆中21个circRNA差异表达,其中15个circRNA表达上调,6个circRNA表达下调(P<0.05)。2.在南京市胸科医院收集PM暴露前后的COPD患者血浆,选取变化倍数较为显著的circRNA即4个上调的circRNA(hsairc061265、hsairc037516、hsairc001503、hsairc005045),1个下调的circRNA(hsairc028173),通过qRT-PCR技术,在34对COPD患者血浆中进行验证。结果表明hsairc061265、hsairc037516、hsairc001503、hsairc005045均显著上调,hsairc028173显著下调,qRT-PCR结果与circRNA Microarray结果具有一致性(P<0.05)。3.进一步扩大样本量至98对,选取上述验证的circRNA中变化倍数较为显著的hsairc005045进一步验证,qRT-PCR结果显示,PM暴露前后的COPD患者血浆中hsairc005045表达显著上调(P<0.001)。二、hsairc005045在体内外染毒模型中的表达***和UCSC数据库显示hsairc005045位于人2号染色体短臂上,其来源于RTN4基因。通过胞质分离实验可知hsairc005045主要集中在细胞质中,根据琼脂糖凝胶电泳和sanger测序结果可知,hsairc005045在细胞质内由RTN4基因的第二和第三外显子反向剪切形成,以环状的形式存在于血浆中,且其剪切位点的碱基分别是G和T。2.通过人支气管上皮细胞(HBE)长期染毒,PM浓度剂量为0、100和500μg/ml,建立HBE体外PM暴露模型,观察细胞形态和不同代数细胞的增殖情况。3.分别取不同暴露代数的细胞(P9、P12、P15),采用CCK-8法检测并观察其增殖能力的改变,结果表明随PM暴露代数的增加,暴露组的细胞增殖能力呈上升趋势。与对照组相比,100和500μg/ml剂量组的细胞增殖能力在12代后均出现显著差异,且差异随代数增加而增大。因此后续的细胞分子试验选择长期暴露P15的细胞进行(P<0.05)。4.选取经PM长期暴露(P15)的HBE细胞进行qRT-PCR实验,结果显示hsairc005045表达水平在HBE细胞中发生了变化,与对照组相比,经PM暴露后hsairc005045表达显著上调,其亲本基因RTN4表达显著下调(P<0.05)。5.小鼠气管滴注PM,诱导小鼠COPD样改变模型的建立。通过气管滴注PM,在7、14、28天后观察小鼠肺组织病理改变,与对照组(气管滴注PBS)相比,7、14、28天后的染毒小鼠在肺组织中可观察到不同程度的肺气肿和肺泡炎,即小鼠出现COPD样病理改变(P<0.05)。6.通过NCBI-blast数据库比对可知,人源性hsairc005045和鼠源性mmuirc002590的碱序列有91%的匹配且具有共同的亲本基因RTN4(Rtn4),即可以认为人和鼠的circRNA具有同源性。琼脂糖凝胶电泳结果和sanger测序结果显示,mmuirc002590同样是以环状的形式存在于血浆中,且其剪切位点的碱基分别是A和C。7.进一步验证mmuirc002590在PM染毒小鼠的血浆中的表达。通过内眦取血获得染毒小鼠的血浆,应用qRT-PCR技术在小鼠的血浆中验证mmuirc002590的表达,经结果分析可知,在PM暴露7天,14天,28天后血浆中的mmuirc002590表达均出现上调(P<0.05)。三、hsairc005045生物学功能的探索1.通过蛋白质谱(iTRAQ法)资料,研究PM暴露的COPD患者血浆外泌体中蛋白质的表达情况,以此来判断蛋白的改变。结果显示PM暴露引起66个差异表达的蛋白

关键词： PM2.5 circRNA PRDX2 elane COPD

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先天性中性粒细胞减少症临床特征、基因突变分析及乙肝病毒X蛋白对HEK 293细胞的独特作用研究

先天性中性粒细胞减少症临床特征、基因突变分析及乙肝病毒X蛋白...

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作者：张永杰重庆医科大学

学位级别：硕士

第一部分:先天性中性粒细胞缺陷病临床表现特征及其基因突变分析目的:通过对临床上发现的粒细胞降低的病人在排除了后天因素后,进行对相关基因测序检测相关基因来确诊先天性中性粒细胞减少症,从而进行指导患者的治疗。方法:利用血常规,... 详细信息

第一部分:先天性中性粒细胞缺陷病临床表现特征及其基因突变分析目的:通过对临床上发现的粒细胞降低的病人在排除了后天因素后,进行对相关基因测序检测相关基因来确诊先天性中性粒细胞减少症,从而进行指导患者的治疗。方法:利用血常规,骨髓穿刺染色,ANCA,提取患儿及其父母的核酸,对elane基因进行扩增,测定PCR产物,对elane基因突变分析及TA克隆后突变分析后确定诊断结果:11例疑诊患儿都有反复的感染(皮肤软组织,肺部,空腔等),非感染性症状有贫血等。elane基因突变病人9例,CD4OL突变2例,其中5例新发突变如下:P1 4 exon F c.367-2 a>g拼接位点突变,可能RNA剪接会受到影响,未见相关文献报道;P1 5 exon F c.655G>A ***219Ile已有相关文献报道;P1父亲5 exon F c.655G>A ***219Ile已有相关文献报道,该病是常染色体的显性遗传病,按照先前的报道其父亲的突变的位点也为致病性的突变,但是实际上父亲身体健康,各种指标均正常,此处与以往的报道不符;P2 3 exon F c.366+10拼接位点插入片段AGAATCTCCAGGT未见相关文献报道;P3 4 exon F c.368 T>A ***123His未见相关文献报道;P4 5 exon F c.608G>C ***203Asp已有相关文献报道;P5 1 exon F c.16c>a SNP未有相关文献报道;P6 2 exon F c.125 C>T ***42Leu已有相关文献报道;P6 4 exon F g.855322 C>A SNP已有相关文献报道;P7 4 exon F c.568 G>A ***190Met已有相关文献报道;P8 5 exon F c.669 C>A ***223X已有相关文献报道;P9 4 exon F c.597 C>T p.F>F SNP未有相关文献报道;P9父亲4 exon F c.597 C>T p.F>F未有相关文献报道;P9 4 exon F c.164 G>A ***55Thr已有相关文献报道;CD40L基因突变2例:P10 CD40L c.156+1 G>T拼接位点纯合突变已有相关文献报道;P11 CD40L c.156+1 G>T拼接位点纯合突变已有相关文献报道结论:通过基因测序突变分析,发现了一些没有被报道过的基因突变类型,扩充的基因突变库的突变种类。基因工程制备的人的重组在中性粒细胞集落刺激因子(G-CSF)可以有效的预防患儿致死性严重性的感染的药物。中性粒细胞的绝对数量在0.5×109以下或者有严重感染的患者建议使用G-CSF,可减少病死率,提高患儿的生存时间。第二部分乙肝病毒X蛋白对HEK 293细胞的独特作用目的:探索乙肝病毒X蛋白对HEK 293细胞的独特作用揭示其作用的相关机制。方法:使用流式相关技术,检测EGFP-N3(HEK 293)和EGFP-N3-HBx(HEK293-HBx)细胞的细胞增殖及各细胞分裂时期细胞特征;细胞转染的相关技术,展现乙肝病毒X蛋白(HBx)对HEK 293细胞的影响;用western blot检测有关蛋白的表达情况;Real-time PCR测定转染HBx基因细胞中m RNA的实时表达差别情况;组织免疫荧光,观察细胞形态差异。结果:HBx通过使HEK 293细胞之间的间隙融合的方式增强HEK293细胞之间的彼此作用;HBx通过增强表达Src蛋白超家族增强E钙粘蛋白的表达,转染了HBx的HEK 293细胞中β-连环蛋白明显增加;HBx通过加强细胞周期蛋白(CDK4)的表达使G2/S期的HEK 293细胞的数量增多;HBx通过提高Bcl2基因的表达量促进细胞增殖,抑制或阻止细胞的凋亡。结论:HBx具有促进细胞的增殖和分化,抑制细胞的凋亡,HBx基因在HEK 293细胞中的功能具有多样性。

关键词：先天性中性粒细胞减少症弹性蛋白酶 SCN elane 乙肝病毒X蛋白(HBx) HBV基因X HEK 293细胞泛素连接蛋白酶复合体

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How do port and shipping enterprises better use big data?

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中国船检 2017年第8期 112-113页

作者： Xu Miaomiao 不详

Undoubtedly, today’s world is surrounded by data. For port and shipping enterprises, how to promote the competitiveness of enterprises through information technology and big data technology is a problem that they must face and solve at *** Zunkuo, the general manager of data product department of elane said that as regards the big data we are now talking about, the biggest puzzle for most of the enterprises is how to connect each independent module, break the information barrier between the systems to transmit the data from one system to the other.

关键词： shipping enterprises elane

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