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温热化疗下调eif5a2因子改变胃癌细胞基因表达阻止胃癌侵袭转移

温热化疗下调EIF5A2因子改变胃癌细胞基因表达阻止胃癌侵袭转移

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作者：闫昭飞广州医科大学

学位级别：硕士

第一部分eif5a2因子与胃癌细胞增殖及侵袭转移的相关性研究背景:胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,多数患者确诊时已发生腹膜侵袭转移,传统治疗效果很差[1-4]。真核细胞翻译起始因子5A2(Eukaryotic Initiation Factor5A2,eif5a2)是一个... 详细信息

第一部分eif5a2因子与胃癌细胞增殖及侵袭转移的相关性研究背景:胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,多数患者确诊时已发生腹膜侵袭转移,传统治疗效果很差[1-4]。真核细胞翻译起始因子5A2(Eukaryotic Initiation Factor5A2,eif5a2)是一个真核生物中高度保守的蛋白质[5-6],在结直肠癌、卵巢癌等多种恶性肿瘤中高表达,可通过上调增殖相关基因Cyclin D1、Cyclin D3的表达促进肿瘤细胞增殖;还可以通过上调上皮间质转化基因Vimentin、下调E-cadherin表达,上调侵袭转移相关基因MTA1、c-myc的表达,诱导肿瘤细胞发生上皮间质转化,促进肿瘤细胞侵袭转移[7],但其与胃癌侵袭转移的相关性尚不清楚。本部分实验通过改变eif5a2因子的基因表达研究其与胃癌增殖、侵袭转移的相关性。方法:将MKN28细胞(eif5a2因子高表达)分为:(1)实验组,MKN28-sieif5a2组,转染eif5a2 siRNA,(2)对照组,MKN28-CTR组,转染空白siRNA。将MKN45细胞(eif5a2因子低表达)分为:(1)实验组,MKN45-eif5a2,转染eif5a2高表达质粒(PIRES2-EGFP+eif5a2),(2)对照组,MKN45-CTR,转染空白质粒(PIRES2-EGFP+)。CCK-8法检测胃癌细胞的增殖活性;Transwell及划痕实验检测胃癌细胞的侵袭、迁移能力;实时定量PCR(qRT-PCR)及Western Blot法检测eif5a2因子及Cyclin D1、Cyclin D3、Vimentin、E-cadherin、MTA1、c-myc的表达情况。结果:与MKN28-CTR组相比,MKN28-sieif5a2组细胞eif5a2因子表达下调,增殖相关基因Cyclin D1、Cyclin D3表达下调,侵袭转移相关基因MTAl、c-myc下调,而上皮间质转化基因Vimentin表达下调、E-cadherin表达上调;胃癌细胞的增殖能力及侵袭、迁移能力明显减弱。与MKN45-CTR组相比,MKN45-eif5a2组胃癌细胞eif5a2因子表达上调,增殖相关基因Cyclin D1、Cyclin D3上调,侵袭转移基因MTAl、c-myc上调,上皮间质转化基因Vimentin表达上调、E-cadherin下调;胃癌细胞的增殖能力及侵袭、迁移能力相应增强。结论:eif5a2因子在胃癌细胞中的表达程度与胃癌细胞的增殖能力、侵袭转移能力呈正相关;eif5a2因子通过上调增殖、侵袭转移及上皮间质转化基因表达促进胃癌细胞增殖和侵袭转移。第二部分温热化疗对eif5a2因子及增殖、侵袭转移基因表达的影响及其与胃癌侵袭转移的相关性背景:国外研究证实,热疗可抑制肿瘤细胞内eif5a2因子表达,抑制肿瘤细胞的活性,诱导肿瘤细胞凋亡。本实验第一部分证实,eif5a2因子可通过上调Cyclin Dl、Cyclin D3表达促进胃癌细胞增殖;通过上调侵袭转移基因MTA1、c-myc的表达,上调上皮间质转化基因Vmentin表达、下调E-cadherin表达促进胃癌细胞侵袭转移。腹腔热灌注化疗(Hyperthemic Intraperitoneal Chemotherapy,HIPEC)作为最常用温热化疗手段,对部分胃癌腹膜转移疗效较好[8-11]。但HIPEC是否通过下调eif5a2因子从而抑制侵袭转移及上皮间质转化基因表达抑制胃癌细胞侵袭转移目前尚无此类文献报道。本部分实验将探讨温热化疗对eif5a2因子及增殖、侵袭转移基因表达的影响,以及其与胃癌侵袭转移的相关性。方法:1.细胞实验:将MKN28、MKN45两种胃癌细胞株分别分为4组:(1)对照组,Mock组(2)热疗组,HT组(43℃),(3)化疗组,CT组(L-OHP),(4)温热化疗组,HT+CT组(43℃+L-OHP)。CCK-8检测细胞增殖活性;Transwell及划痕实验检测胃癌细胞的侵袭及迁移能力;q RT-PCR及Western blot检测eif5a2及Cyclin D1、Cyclin D3、Vimentin、E-cadherin、MTA1、c-myc基因的表达情况。2.动物模型实验:将MKN28、MKN45胃癌细胞注射至小鼠腹股沟皮下制备移植瘤动物模型,将成瘤的小鼠随机分为4组:(1)对照组,Mock组(2)热疗组,HT(43℃),(3)化疗组,CT组(L-OHP),(4)温热化疗组,HT+CT组(43℃+L-OHP)。制备肿瘤组织切片,HE染色观察各组肿瘤组织坏死情况;q RT-PCR、Western blot及免疫组化法检测eif5a2因子及Cyclin D1、Cyclin D3、Vimentin、E-cadher

关键词：胃癌侵袭转移 eif5a2因子基因表达胃癌侵袭转移温热化疗 eif5a2因子基因表达

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