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中国心血管病研究 2023年第3期21卷 224-228页

作者：史文轲谢赛阳邓伟武汉大学人民医院心血管内科代谢与相关慢病湖北重点实验室湖北省武汉市430000

目的探讨Rac抑制剂eht 1864对低氧诱导的内皮细胞凋亡和氧化应激的影响。方法在低氧和正常氧的情况加入eht 1864孵育HUVECs(人脐静脉内皮细胞)24 h,CCK-8(细胞增殖-毒性检测试剂盒)法检测细胞活性,DCFH-DA(二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯)... 详细信息

目的探讨Rac抑制剂eht 1864对低氧诱导的内皮细胞凋亡和氧化应激的影响。方法在低氧和正常氧的情况加入eht 1864孵育HUVECs(人脐静脉内皮细胞)24 h,CCK-8(细胞增殖-毒性检测试剂盒)法检测细胞活性,DCFH-DA(二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯)荧光探针检测活性氧簇(ROS)水平,TUNEL(原位缺口末端标记法)染色观察细胞凋亡水平,免疫印迹法检测氧化应激、凋亡及相关通路蛋白的表达。结果培养处理24 h后,低氧刺激组细胞促氧化因子Gp91、p47 phox蛋白表达及凋亡水平高于正常氧浓度组,而抗氧化因子SOD2蛋白表达低于正常氧浓度组,差异均有统计学意义(Peht 1864处理后能抑制低氧诱导的炎症和凋亡因子表达,差异均有统计学意义(PEHT1864能够通过AMPKα-NOXs信号通路改善低氧诱导的内皮细胞氧化应激及凋亡。

关键词： EHT1864 氧化应激凋亡 HUVEC

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Rac1通过调控JAK2/STAT1信号通路参与神经炎症

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中国药学杂志 2022年第3期57卷 203-208页

作者：臧彩霞刘慧鞠程袁方玉李方园鲍秀琦张丹中国医学科学院北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室北京100050

目的研究BV2小胶质细胞上Ras相关C3肉毒菌素物底物1(ras-related C3 botulinum toxin, Rac1)参与神经炎症的作用。方法采用脂多糖(lipopcly saccharide, LPS)诱导BV2小胶质细胞,加入Rac1抑制剂EHT1864,用MTT法检测细胞活力;G-LISA和免疫荧光检测Rac1活性的变化;荧光酶标仪检测ROS的含量,Griess试剂法检测一氧化氮的含量以及酶联免疫吸附法测定肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF-α)和前列腺素E_(2)(prostaglandin E_(2),PGE_(2))的含量;Western blot法检测环氧化酶(cyclooxygenase-2,COX-2)和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)的表达,观察神经炎症反应的变化。结果 LPS诱导BV2小胶质细胞细胞后,Rac1的活性升高,炎症反应增强;当给予Rac1抑制剂EHT1864后,LPS诱导的炎症反应减轻,表现为炎症蛋白(COX-2和iNOS)的表达减少以及炎症因子(ROS、NO、TNF-α和PGE_(2))的释放减少。初步机制研究发现EHT1864能抑制Janus激酶2信号转导和转录激活因子1(Janus kinase 2 signal transducers and activators of transcription, JAK2/STAT1)炎症信号通路的激活。结论在小胶质细胞上,Rac1通过调控JAK2/STAT1信号通路参与神经炎症。

关键词： Ras相关C3肉毒菌素物底物1 神经炎症小胶质细胞 EHT1864

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小鼠哮喘模型Rac1水平的改变及其与ILC2相关细胞因子的关系

小鼠哮喘模型Rac1水平的改变及其与ILC2相关细胞因子的关系

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作者：徐芸芸江苏大学

学位级别：硕士

目的:通过建立小鼠哮喘模型,检测Rac1在小鼠哮喘模型前后相关组织中表达水平的改变情况,并分析Rac1与2型固有淋巴细胞（ILC2）相关细胞因子如IL-5、IL-33、IL-13表达的关系,观察其对气道炎症的影响,探讨Rac1调节免疫应答反应类型和参与... 详细信息

目的:通过建立小鼠哮喘模型,检测Rac1在小鼠哮喘模型前后相关组织中表达水平的改变情况,并分析Rac1与2型固有淋巴细胞（ILC2）相关细胞因子如IL-5、IL-33、IL-13表达的关系,观察其对气道炎症的影响,探讨Rac1调节免疫应答反应类型和参与哮喘病理损伤的可能机制,为进一步深入研究哮喘病的发病机制奠定基础,拓展哮喘病临床干预的新思路。方法:1.卵清蛋白（OVA）哮喘模型的建立:哮喘建模参照文献并稍加改进,即实验组小鼠在第1d和第11d分别腹腔注射50μg OVA和10%氢氧化铝佐剂,对照组注射相等量的生理盐水（NS）,第22d开始实验组各小鼠给予雾化吸入2%的OVA与生理盐水的混合溶液,激发小鼠的I型超敏反应,1次1小时,每天雾化1次、一连5d。同时,正常组小鼠给予吸入相等的NS。2.Rac1抑制剂（EHT1864）干预试验:在建模过程中,于雾化前三天连续给小鼠腹腔注射EHT1864,其他步骤同上述哮喘模型建立。EHT1864粉剂在使用前用生理盐水溶解并充分混匀,用药量为40mg\kg。3.定量-PCR检测m RNA:取小鼠支气管肺泡灌洗、外周血单个核细胞,经离心获得细胞沉淀;取左边肺组织,充分剪碎研磨得到组织悬液。于上述细胞或组织悬液加入Trizol以裂解细胞并获取总RNA,然后再进行逆转录反应合成c DNA。继而做实时荧光定量PCR,检测Rac1及ILC2相关细胞因子（IL-5,IL-33和IL-13）m RNA的表达。4.酶联免疫吸附试验:取小鼠的支气管肺泡灌洗液（BALF）或眼球外周血,经离心后得到灌洗液上清和外周血血清,用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测ILC2相关的细胞因子（IL-5,IL-33和IL-13）蛋白表达水平。5.组织切片病理观察:取小鼠右肺组织置于福尔马林中经固定、石蜡包埋等一系列过程制成切片,苏木精-伊红（HE）染色,光镜下观察病理表现。6.荧光抗体染色:取小鼠支气管置于福尔马林中经固定、石蜡包埋等一系列过程制作成石蜡切片,再用直接法进行免疫荧光抗体染色,检测支气管中Rac1的表达情况。7.采用Graph Pad Prism5软件进行统计分析:对哮喘小鼠肺组织Rac1和细胞因子（IL-5,IL-33和IL-13）的表达水平进行直线相关分析,组间均数比较采用两样本非配对T检验,相关性分析选用Pearson法,P＜0.05,表明差异有统计学意义,多组间的统计分析采用0ne-way ANOVA,P＜0.05,表明差异有统计学意义。结果:1.通过哮喘模型制作过程对小鼠的观察可见,哮喘组小鼠表现为烦躁不安,出现频繁瘙痒的行为,同时还伴有呼吸加深加快、打喷嚏、大小便失禁、擤鼻等典型的哮喘表现,而对照组无明显异常表现。2.肺组织病理观察结果:HE染色显微镜下可见,哮喘组小鼠肺泡间及周围小血管出现大量炎症细胞,如嗜酸性粒细胞浸润、气道内杯状细胞肥大增生、血清总Ig E及OVA-Ig E含量均高于对照组。而对照组小鼠可见,肺组织气道结构清晰、气管周围无细胞浸润、炎症性改变不明显。3.免疫荧光分析表明:哮喘模型小鼠Rac1的水平与正常小鼠相比显著下降,EHT1864干预后,Rac1的表达进一步下调。4.定量RT-PCR分析结果:哮喘小鼠肺组织或肺泡灌洗液Rac1 m RNA表达水平均明显低于正常对照组,使用EHT1864干预后,Rac1水平则进一步降低。5.小鼠肺组织表达ILC2相关细胞因子的检测:通过分析模型组与正常组目的基因m RNA表达水平,结果显示,哮喘小鼠肺组织的IL-5、IL-33和IL-13的水平与正常组小鼠相比均显著增高;EHT1864处理组的IL-5、IL-33和IL-13的水平上调尤为显著。此结果表明Rac1的降低与ILC2相关细胞因子水平的升高存在着紧密的联系。6.ELISA检测外周血上清IL-5、IL-33和IL-13蛋白表达水平的结果表明,哮喘模型组小鼠上述细胞因子水平均高于对照组。7.分析肺组织中Rac1与IL-5、IL-33和IL-13m RNA表达水平关系的相关性结果显示,哮喘小鼠肺组织Rac1的m RNA水平与IL-5、IL-33和IL-13的m RNA水平均显示明显的负相关。结论:在哮喘小鼠,IL-5、IL-33和IL-13的m RNA和蛋白表达水平与对照组相比都显著增高,同时Rac1的表达却显著下降。相关性分析表明Rac1和ILC2s相关细胞因子（IL-5,IL-33,IL-13）之间存在显著地负相关。为了进一步证明Rac1在哮喘发病机制中的作用,在小鼠激发之前给予EHT1864干预后,随着Rac1表达水平的进一步下调,导致ILC2s相关细胞因子水平明显增高,同时小鼠的哮喘症状及肺组织组损伤加重。这些结果可以推测Rac1可以影响哮喘的发病过程,如果将Rac1的受体激动剂用于哮喘病人,有可能会有效改善炎症状态。进一步研究Rac1在哮喘中的作用,有利于了解哮喘的免

关键词：哮喘 ILC2s Rac1 EHT1864 细胞因子

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