检索结果-南通市图书馆

中华微生物学和免疫学杂志 2020年第3期40卷 198-205页

作者：李姝萍王小珏杨斌王和林闫卓红易玲韦攀健金鑫郝建清张洪涛北京市结核病胸部肿瘤研究所中心实验室 101149 首都医科大学附属北京胸科医院肿瘤免疫室 101149 新乡医学院第一附属医院肿瘤内科 453100

目的:构建肿瘤相关抗原表皮生长因子受体特异性嵌合抗原受体(egfr-car)和程序性死亡受体-配体1(PD-L1)抗体双修饰慢病毒载体表达系统。方法:人PD-L1-Fc蛋白免疫BALB/c小鼠,经细胞融合、亚克隆筛选高分泌PD-L1特异性抗体的稳定杂交瘤,酶... 详细信息

目的:构建肿瘤相关抗原表皮生长因子受体特异性嵌合抗原受体(egfr-car)和程序性死亡受体-配体1(PD-L1)抗体双修饰慢病毒载体表达系统。方法:人PD-L1-Fc蛋白免疫BALB/c小鼠,经细胞融合、亚克隆筛选高分泌PD-L1特异性抗体的稳定杂交瘤,酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot检测抗体特异性,流式细胞术(FACS)鉴定对PD-1配受体封阻性能,Fortebio测定抗体亲和力,抗体全长测序,经保留鼠源CRD1、CRD2和CRD3人源化改造后构建单链抗体(single-chain variable fragment,scFv);人egfr单克隆抗体杂交瘤系,经5′RACE技术扩增其轻链和重链可变区(VL和VH)基因,构建scFv,克隆至真核载体pcDNA3.1表达鉴定。基因合成egfr-car(引入CD137协同信号胞内功能域)与PD-L1-scFv借助2A序列连接,克隆入慢病毒pLVX-EF1a-IRES-ZsGreen1表达载体,使用Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G)共同转染293T细胞,获得包装病毒,感染293V细胞,FACS测定car膜表达,ELISA检测car感染293V细胞培养上清中PD-L1-scFv表达情况,转染激活人外周血T细胞,验证car膜表达。结果:获得PD-L1抗体11E3,具备高度配受体封阻性能,经人源化改造后,亲和力稳定(2.67×10 -10 mol/L),egfr-scFv获得有效表达。进一步构建了egfr-car和PD-L1双修饰慢病毒分泌型car(CTC0537-1)及膜表达型car(CTC0537-2),其病毒感染293V细胞阳性率为10%。CTZ0431-1感染293V细胞后,细胞膜表面表达egfr-scFv,检测培养上清存在PD-L1-ScFv;CTZ0431-2感染293V细胞后,细胞膜表面egfr-scFv和PD-L1-scFv有效表达,双表达病毒感染活化T细胞的car表达率为39.3%。结论:成功构建了egfr-car和PD-L1-scFv双表达慢病毒载体,egfr-car中度结合亲和力,此为egfr靶向和PD-L1抗体双修饰car-T细胞的实体瘤治疗研究提供了关键工具。

关键词： egfr-car PD-L1-scFv 膜表达型分泌表达型合成生物技术

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

egfr和PD-L1双靶向嵌合抗原受体构建及表达

引用

结核病与胸部肿瘤 2020年第2期 87-94页

作者：李姝萍 ﹐王小珏 ﹐杨斌 ﹐王和林 ﹐闫卓红易玲 ﹐韦攀健﹐金鑫郝建清张洪涛北京市结核病胸部肿瘤研究所中心实验室 101149 首都医科大学附属北京胸科医院肿瘤免疫室 101149

目的构建肿瘤相关抗原表皮生长因子受体特异性嵌合抗原受体(egfr-car)和程序性死亡受体-配体1(PD-L1)抗体双修饰慢病毒载体表达系统。方法人PD-L1-Fc蛋白免疫BALB/c小鼠,经细胞融合、亚克隆筛选高分泌PD-L1特异性抗体的稳定杂交瘤,酶联... 详细信息

目的构建肿瘤相关抗原表皮生长因子受体特异性嵌合抗原受体(egfr-car)和程序性死亡受体-配体1(PD-L1)抗体双修饰慢病毒载体表达系统。方法人PD-L1-Fc蛋白免疫BALB/c小鼠,经细胞融合、亚克隆筛选高分泌PD-L1特异性抗体的稳定杂交瘤,酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot检测抗体特异性,流式细胞术(FACS)鉴定对PD-1配受体封阻性能,Fortebio测定抗体亲和力抗体全长测序,经保留鼠源CRD1、CRD2和CRD3人源化改造后构建单链抗体(single-chain variable fragment,scFv);人egfr单克隆抗体杂交瘤系,经5RACE技术扩增其轻链和重链可变区(VL和VH)基因,构建scFv,克隆至真核载体pcDNA3.1表达鉴定。基因合成egfr-car(引入CD137协同信号胞内功能域)与PD-L1-scFv借助2A序列连接,克隆人慢病毒pLVX-EF1.-RES-ZsGreen1表达载体,使用Lent-X Packagng Singie Shots(VSV-G)共同转染293T细胞,获得包装病毒,感染293V细胞,FACS测定car膜表达,ELISA检测car感染293V细胞培养上清中PD-L1l-scFv表达情况,转染激活人外周血T细胞,验证car膜表达。结果获得PD-L1抗体11E3,具备高度配受体封阻性能,经人源化改造后,亲和力稳定(2.67×10^-10 molL),egfr-scFv获得有效表达。进一步构建了egfr-car和PD-L1双修饰慢病毒分泌型car(CTCO537-1)及膜表达型car(CTC0537-2),其病毒感染293V细胞阳性率为10%。CTZ0431-1感染293V细胞后,细胞膜表面表达egfr-scFv,检测培养上清存在PD-L1-SeFv;CTZ0431-2感染293V细胞后,细胞膜表面egfr-scFv和PD-L1-scFv有效表达,双表达病毒感染活化T细胞的car表达率为39.3%。结论成功构建了egfr-car和PD-L1-scFv双表达慢病毒载体,egfr-car中度结合亲和力,此为egfr靶向和PD-L1抗体双修饰car-T细胞的实体瘤治疗研究提供了关键工具。

关键词： egfr-car PD-LI-scFv 膜表达型分泌表达型合成生物技术

来源：

维普期刊数据库评论

在线全文

维普期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：