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重组免疫毒素ebI3-Luffin P1原核表达质粒的构建、表达及其生物学活性

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中国生物制品学杂志 2012年第3期25卷 324-328页

作者：吴昊陆强高闻达陈柳茜任翠平沈际佳安徽医科大学第一临床学院 Antagen Institute for Biomedical Research 安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

目的构建重组免疫毒素ebI3-Luffin P1的原核表达质粒,在大肠杆菌中进行表达,纯化后初步检测其生物学活性。方法从质粒pET-32a-ebI3中扩增ebI3基因,与合成的Luffin P1基因连接,克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组质粒pET-32a-ebI3-... 详细信息

目的构建重组免疫毒素ebI3-Luffin P1的原核表达质粒,在大肠杆菌中进行表达,纯化后初步检测其生物学活性。方法从质粒pET-32a-ebI3中扩增ebI3基因,与合成的Luffin P1基因连接,克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组质粒pET-32a-ebI3-Luffin P1,转化*** BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组ebI3-Luffin P1蛋白经亲和层析纯化后,Western blot检测其反应原性,体外试验初步鉴定其生物学活性。结果重组质粒pET-32a-ebI3-Luffin P1经双酶切及测序证实构建正确;表达的重组ebI3-Luffin P1蛋白相对分子质量约为50 000,主要以包涵体形式存在,诱导8 h表达量可达菌体总蛋白的44%;纯化的重组蛋白纯度约为98%,可与ebI3蛋白免疫小鼠血清发生特异性反应,并可显著抑制小鼠脾脏细胞分泌IFNγ。结论成功构建了重组免疫毒素ebI3-Luffin P1的原核表达质粒,表达并纯化了重组蛋白,为进一步研究其在缓解、治疗免疫性疾病及红白血病中的作用奠定了基础。

关键词：免疫毒素 eb病毒诱导基因3 LuffinP1 基因表达生物学活性

TGF⁃β1对炎症状态下人牙周膜成纤维细胞的调控作用

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口腔疾病防治 2023年第2期31卷 94-103页

作者：朱嘉皓芦婷钟良军杭州师范大学口腔医学院浙江杭州310000 杭州师范大学附属医院口腔医学中心浙江杭州310000

目的探讨转化生长因子⁃β1(transforming growth factor⁃β1,TGF⁃β1)对在牙龈卟啉单胞菌来源脂多糖(lipopolysaccharide from Porphyromonas gingivalis,Pg⁃LPS)刺激模拟炎症状态下的人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,hPDLFs)的调控作用。方法获取hPDLFs并进行免疫组化鉴定,通过qRT⁃PCR与CCK⁃8确定Pg⁃LPS的刺激浓度。将hPDLFs分成4组:空白对照组,单纯100μg/mL Pg⁃LPS;低浓度组,1 ng/mL TGF⁃β1+100μg/mL Pg⁃LPS;中浓度组,10 ng/mL TGF⁃β1+100μg/mL Pg⁃LPS;高浓度组100 ng/mL TGF⁃β1+100μg/mL Pg⁃LPS。CCK⁃8检测细胞增殖情况;划痕实验与Transwell小室实验检测hPDLFs细胞迁移能力;流式细胞术检测hPDLFs的细胞周期;qRT⁃PCR检测hPDLFs的转录因子叉头盒p3(forkhead/winged helix transcription⁃al factor p3,Foxp3)、白细胞介素6(interleukin⁃6,IL⁃6)及eb病毒诱导基因3(Epstein⁃Barrvirus⁃induced gene 3,ebI3)mRNA表达;Western blot检测hPDLFs的Foxp3、IL⁃6及ebI3蛋白表达。结果免疫组化鉴定显示抗波形丝蛋白阳性及抗角蛋白阴性;Pg⁃LPS浓度为100μg/mL时,hPDLFs中IL⁃6 mRNA表达相比空白对照组显著上升(P基因和蛋白表达量(PebI3基因及蛋白表达量(P基因表达量,10 ng/mL TGF⁃β1可提高Foxp3蛋白表达量(PebI3表达,可能与转录因子Foxp3表达有关。

关键词：转化生长因子⁃β1 牙龈卟啉单胞菌来源脂多糖转录因子叉头盒p3 白细胞介素6 IL⁃35亚基 eb病毒诱导基因3 牙周炎人牙周膜成纤维细胞细胞周期免疫治疗

OSCC和OLK患者口腔黏膜组织中IL-12p35和ebi3的表达及意义

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贵州医科大学学报 2021年第3期46卷 335-339页

作者：王方方江南罗亮蔡扬贵州医科大学口腔医学院贵州贵阳550004 贵阳市口腔医院牙周病科贵州贵阳550004 贵州医科大学附属口腔医院牙周黏膜科贵州贵阳550004

目的探讨口腔鳞状细胞癌(OSCC)和口腔白斑(OLK)患者口腔黏膜组织中白细胞介素35(IL-35)α链p35亚基(IL-12p35)和β链eb病毒诱导基因3亚基(ebi3)的表达及意义。方法选取OSCC患者34例、OLK患者32例及正颌手术、良性非炎症性肿瘤切除术患... 详细信息

目的探讨口腔鳞状细胞癌(OSCC)和口腔白斑(OLK)患者口腔黏膜组织中白细胞介素35(IL-35)α链p35亚基(IL-12p35)和β链eb病毒诱导基因3亚基(ebi3)的表达及意义。方法选取OSCC患者34例、OLK患者32例及正颌手术、良性非炎症性肿瘤切除术患者15例分别作为OSCC组、OLK组及正常组,取3组患者口腔黏膜组织,采用苏木精-伊红染色法(HE)染色进行形态学观察和病理学诊断,采用免疫组织化学超敏二步法(IHC)检测IL-12p35和ebi3蛋白的表达。结果OSCC、OLK组患者口腔黏膜组织ebi3、IL-12p35蛋白阳性表达率均高于正常组(Pebi3蛋白的阳性表达率差异有统计学意义(P35、ebi3蛋白阳性表达分别与上皮异常增生程度呈正相关关系(r IL-12p35=0.370,P=0.001;r ebi3=0.380,Pebi3、IL-12p35蛋白表达与患者淋巴结转移有关(P0.05)。结论IL-12p35和ebi3在OSCC及OLK患者口腔黏膜组织中表达上调,IL-35可能在口腔黏膜癌变发展过程中起重要作用。

关键词：白斑,口腔口腔鳞状细胞癌口腔黏膜白细胞介素35 eb病毒诱导基因3 白细胞介素P35亚基

新型免疫抑制因子白细胞介素35与自身免疫性疾病

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国际神经病学神经外科学杂志 2013年第2期40卷 188-191页

作者：师佩佩谭利明李罗清中南大学湘雅二医院神经内科湖南省长沙市410000

白细胞介素35(IL-35)是最近发现的新型免疫抑制/抗炎因子,是IL-12家族成员之一,它是由IL-12α、ebi3两个亚基组成的二聚体蛋白,主要由调节性T细胞(Treg)组成性分泌,它对于Treg细胞功效的发挥是必需的,IL-35通过诱导调节性T细胞扩增、抑... 详细信息

白细胞介素35(IL-35)是最近发现的新型免疫抑制/抗炎因子,是IL-12家族成员之一,它是由IL-12α、ebi3两个亚基组成的二聚体蛋白,主要由调节性T细胞(Treg)组成性分泌,它对于Treg细胞功效的发挥是必需的,IL-35通过诱导调节性T细胞扩增、抑制效应细胞如Th17细胞增殖,明显抑制实验性结肠炎、实验性自身免疫性脑脊髓炎等自身免疫疾病症状。本文阐述了IL-35作用机制及其在自身免疫性疾病中的调控机制,为寻找新的治疗靶点提供新思路。

关键词：白细胞介素35 调节性T细胞 Th17细胞自身免疫疾病 eb病毒诱导基因3

佛手柑内酯抑制ebI3/STAT3信号增强结肠癌细胞对5-Fu化疗敏感性的研究

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重庆医学 2020年第14期49卷 2255-2259页

作者：梁艳芳叶子瑜马燕陈灿林碧华曾今诚东莞市滨海湾中心医院/暨南大学附属东莞医院病理科广东东莞523905 广东医科大学东莞市医学活性分子开发与转化重点实验室广东东莞523808 广东医科大学广东省医学分子诊断重点实验室广东东莞523808

目的探究佛手柑内酯(Bg)对结肠癌细胞5-氟尿嘧啶(5-Fu)耐药性的影响及其机制。方法采用Bg作用人结肠癌SW1116/5-Fu和LoVo/5-Fu耐药细胞系;CCK-8法检测细胞增殖能力;Western blot检测Bcl-2、Bax、eb病毒诱导基因3(ebI3)、STAT3、磷酸化ST... 详细信息

目的探究佛手柑内酯(Bg)对结肠癌细胞5-氟尿嘧啶(5-Fu)耐药性的影响及其机制。方法采用Bg作用人结肠癌SW1116/5-Fu和LoVo/5-Fu耐药细胞系;CCK-8法检测细胞增殖能力;Western blot检测Bcl-2、Bax、eb病毒诱导基因3(ebI3)、STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)、CYP1B1和MEKK2蛋白质表达。结果Bg作用SW1116、SW1116/5-Fu、LoVo和LoVo/5-Fu细胞后,5-Fu作用细胞的半抑制浓度(IC50)值明显降低(PebI3阻断剂作用细胞后,IC50值明显下降(PebI3、STAT3、p-STAT3、CYP1B1和MEKK2蛋白质表达水平均明显降低,Bax蛋白质表达水平明显升高。结论Bg可能通过诱导细胞凋亡、抑制ebI3/STAT3信号通路及抑制耐药相关蛋白质CYP1B1和MEKK2表达增强结肠癌细胞对5-Fu的化疗敏感性。

关键词：结肠肿瘤佛手柑内酯氟尿嘧啶抗药性,肿瘤 eb病毒诱导基因3