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补脾强力复方对自身免疫性重症肌无力大鼠胸腺组织GR mRNA表达的影响

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辽宁中医杂志 2017年第2期44卷 398-402页

作者：姜雄何前松况时祥贵阳中医学院研究生院贵州贵阳550002 贵阳中医学院第二附属医院贵州贵阳550003

目的:观察补脾强力复方对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)模型大鼠胸腺组织中糖皮质激素受体(GR)mRNA表达的影响。方法:将Lewis大鼠按体重随机分为6组,即:正常组、模型组、强的松组(5.4 mg/kg)、补脾强力复方不同剂量组(剂量分别为4.7... 详细信息

目的:观察补脾强力复方对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)模型大鼠胸腺组织中糖皮质激素受体(GR)mRNA表达的影响。方法:将Lewis大鼠按体重随机分为6组,即:正常组、模型组、强的松组(5.4 mg/kg)、补脾强力复方不同剂量组(剂量分别为4.75 g/kg,7.12 g/kg,9.49 g/kg),除正常组外,均采用鼠源性AchR-α亚基97-116肽段序列(R97-116)免疫接种复制EAMG模型。药物治疗后,ELISA法检测各组大鼠的AchR-Ab、皮质醇水平,RT-Q-PCR技术检测大鼠胸腺组织GR mRNA表达水平。结果:与正常组比较,模型组GR mRNA相对表达量降低(P<0.01),与模型组比较,西药组、中药大、中、小剂量组大鼠AchR-Ab含量下降(P<0.05),强的松组、中药大剂量组和中剂量组GR mRNA相对表达量增加(P<0.05)。结论:补脾强力复方可提高胸腺组织GR mRNA的表达,这可能是其治疗MG的作用机制之一。

关键词：补脾强力复方 EAMG 糖皮质激素受体

加味补中益气汤对EAMG大鼠疗效观察及免疫学机制探讨

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加味补中益气汤对EAMG大鼠疗效观察及免疫学机制探讨

作者：刘冲冲河南中医药大学

学位级别：硕士

目的:观察加味补中益气汤对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠肌无力症状的改善及治疗过程中大鼠血清ACh R-Ab、TGF-β、补体C3、总Ig G和胸腺及脾脏组织液中IL-2、IL-6、IL-17A、IFN-γ的水平的变化,探讨中药治疗重症肌无力(MG)的... 详细信息

目的:观察加味补中益气汤对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠肌无力症状的改善及治疗过程中大鼠血清ACh R-Ab、TGF-β、补体C3、总Ig G和胸腺及脾脏组织液中IL-2、IL-6、IL-17A、IFN-γ的水平的变化,探讨中药治疗重症肌无力(MG)的免疫学机制,为中医药治疗MG提供有意义的实验研究依据。方法:将72只健康雌性LWEIS大鼠(年龄42-62天,体重150-160g),随机数字法取12只作为对照组,其余60只为模型组。运用人工合成的鼠源性ACh R-α亚基9716肽段为免疫原诱导模型组LWEIS大鼠建立实验动物模型。每只大鼠给予皮下注射乳剂200μl,含鼠源性ACh R-α亚基9716肽段100μg,在大鼠的背部取4点及双足垫注射,背部每点含40μl,足垫每点含20μl。每只对照组大鼠给予200μl的佐剂与PBS的混合乳剂。初次免疫后第30天及第45天分别于背部4点及双足垫给予同等剂量乳剂免疫。初次免疫50天后开始评价模型,通过抓握实验综合评价大鼠肌力的情况,检测大鼠血清中ACh R-Ab的水平,进行新斯的明试验以及重复神经电刺激测肌电图等判断模型是否成功。最终纳入模型标准的LWEIS大鼠共50只,将造模成功的大鼠随机分成5组,空白组10只给予生理盐水每天3ml灌胃,模型组10只给予生理盐水每天3ml灌胃,中药高浓度组10只给予浓度为64.8mg/kg·d灌胃,中浓度组10只给予浓度为32.4mg/kg·d灌胃,低浓度组10只给予浓度为16.2mg/kg·d灌胃,西药组10只给予浓度为5.4mg/kg·d灌胃,期间记录肌力评分,连续灌胃4周后,采用抗原包被法测ACh R-Ab OD值,酶联免疫法检测血清补体C3、TGF-β、Ig G的含量,从脾脏和胸腺提取组织液测IL-17A、IL-6、IL-2,INF-γ的含量。结果:1.根据模型的判定标准,最终纳入EAMG成功模型共50只,造模成功后大鼠出现活动迟缓,毛发不泽。正常组大鼠活动正常,毛发光泽。2.模型组在ACh R-Ab水平及肌力测定方面与空白组有显著统计学意义(p0.05),中药低浓度与高浓度及西药组相比有统计学意义(p0.05),中药低浓度与中药高、中浓度相比,无统计学意义(p>0.05)。5.取大鼠的脾脏和胸腺组织提取组织液,测IL-17A,IL-6,IL-2水平的变化,模型组及用药组与空白组相比,有统计学意义(p0.05),中药低浓度与高、中浓度相比,无统计学意义(p>0.05)。6.取胸腺、脾脏组织液测INF-γ滴度的变化,模型组及用药组与空白组相比,有统计学意义(p0.05),中药低浓度与高浓度、西药组相比有统计学意义(pEAMG模型,成功率相对较高。(2)加味补中益气汤能显著减少EAMG大鼠的症状评分,缓解肌无力症状,提示加味补中益气汤对EAMG大鼠模型治疗有效。(3)加味补中益气汤对EAMG大鼠肌无力症状的免疫学机制可能是,一方面上调血清中通过调节TGF-β、补体C3的水平表达,减少了神经肌肉接头处的炎症反应;另一方面通过下调中枢免疫器官(胸腺)或/和外周免疫器官(脾脏)组织液中IL-17A,IL-6,IL-2,INF-γ的水平表达,抑制T细胞和B细胞增殖,降低了血清Ig G水平和ACh R-Ab含量,从而减轻肌无力症状。

关键词： EAMG 加味补中益气汤抗体免疫机制

EAMG Lewis大鼠γδT17细胞S1P1与炎症趋化因子受体的表达

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EAMG Lewis大鼠γδT17细胞S1P1与炎症趋化因子受体的表达

作者：倪文鹏郑州大学

学位级别：硕士

背景与目的重症肌无力(myasthynia gravis,MG)是一种典型的自身免疫病,大多数患者由于机体产生针对乙酰胆碱受体(acetylcholine receptor,AchR)的自身抗体,封闭了乙酰胆碱与AchR在神经肌肉接头处的结合,从而阻断神经-肌肉信号的传递,导... 详细信息

背景与目的重症肌无力(myasthynia gravis,MG)是一种典型的自身免疫病,大多数患者由于机体产生针对乙酰胆碱受体(acetylcholine receptor,AchR)的自身抗体,封闭了乙酰胆碱与AchR在神经肌肉接头处的结合,从而阻断神经-肌肉信号的传递,导致肌肉收缩无力。IL-17是一种炎症调节性细胞因子,密切参与自身免疫病的发生、发展过程。γδT17细胞不仅是IL-17的重要来源,而且还可以促进Th17细胞产生IL-17。因而近年来,γδT17在感染及自身免疫病的发病过程中的作用越来越受到人们的重视,但γδT17与MG的关系还不甚明了。我们前期通过流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测到MG患者胸腺γδT细胞数量增多;并且免疫荧光标记结果显示,S1P1阳性γδT细胞多分布于皮髓交界处(corticomedullary junction,CMJ),S1P1是介导γδT细胞胸腺迁出和炎症迁移的重要分子,提示MG患者胸腺存在γδT细胞输出增多的现象。为进一步分析MG病理条件下γδT17细胞胸腺迁出和炎症趋化的特性,本实验用重组人AChRα亚基的97-118肽段免疫Lewis大鼠,建立实验性自身免疫重症肌无力(experimental autoimmune myasthenia gravis,EAMG)模型,通过检测γδT17细胞S1P1与CCR9等炎症趋化受体的表达,分析EAMG鼠γδT17细胞的炎症趋化特性及S1P1受体信号对γδT活化和功能的影响。方法1.Lewis大鼠EAMG的建立及评价:使用重组人AChRα亚基97-118肽段免疫Lewis大鼠建立EAMG模型。将42只大鼠随机分为两组,其中22只为EAMG诱导组,20只为对照组,按照200μg/只,每28天在其双后肢足垫及双肩部皮内注射肽段,共免疫三次,首次诱导免疫使用完全弗氏佐剂(complete Freund’s adjuvant,CFA),之后采用不完全弗氏佐剂(incomplete Freund’s adjuvant,IFA)。免疫开始后,每7天测量一次大鼠体重,并进行抓笼实验检测肌肉功能。在免疫前和第二次、第三次免疫后第15天,抽取大鼠尾静脉外周血,ELISA检测血清中抗AChRα抗体的滴度,若EAMG诱导组血清OD值/对照组血清OD值≧2.1则视为抗体阳性。第三次免疫15天后,对大鼠进行肌电图检测,分别记录EAMG诱导组和对照组动作电位,并计算第4波与第1波振幅之比。3Hz和5Hz刺激平均波幅下降10%以上视为低频重复神经电刺激波幅递减异常,即阳性。最后结合EAMG大鼠评分细则对大鼠进行建模结果评分。2.γδT17细胞S1P1及趋化因子受体表达的检测:通过无菌操作手术分离、摘取EAMG组和对照组大鼠胸腺及腋窝、腹股沟淋巴结,经研磨过滤制成单细胞悬液。用抗CD3-FITC、γδTCR-PE、IL-17-APC、S1P1-Alexa Fluor 680、CCR2-Alexa Fluor 700、CCR6-Alexa Fluor 405和CCR9-Alexa Fluor 700荧光标记抗体及同型对照抗体标记细胞,FCM检测γδT及γδT17细胞比例,并分析γδT和γδT17细胞表面S1P1和相应趋化因子受体的表达。3.标记EAMG大鼠胸腺和淋巴结组织S1P1γδT细胞的分布:制备大鼠淋巴结及胸腺组织石蜡切片进行免疫组化染色,观察γδT细胞的分布;利用抗γδTCR和抗S1P1抗体对大鼠淋巴结和胸腺组织冰冻切片进行免疫荧光染色,观察S1P1γδT细胞的分布。4.检测分析S1P1受体信号对γδT细胞分泌炎症细胞因子的影响:无菌分离获取Lewis大鼠脾脏单个细胞悬液,于37℃,5%CO条件下培养1h 40min,留取贴壁基质细胞。免疫磁珠分选大鼠淋巴结中γδT细胞,流式鉴定阳性率>90%。按照基质细胞与γδT细胞数目之比为1:1建立混合培养体系,加入IL-2(2000UI/mL)和抗CD3抗体(50μg/10个细胞)。使用S1P(1μM)对S1P1信号进行刺激,将混合培养的细胞分为四组,EAMG组Blank、EAMG-S1P刺激组、对照组Blank和对照-S1P刺激组;36h后流式抗体标记EAMG组γδT表面CCR2和CCR6,并提取各组细胞总蛋白,使用Biolegend公司LEGENDplex Multi-Analyte Flow试剂盒FCM检测所提取各组总蛋白中IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、IL-13、IL-17A、IL-17F、IL-22、IFN-γ、GM-CSF和TNF-α的浓度。5.统计学分析:利用SPSS 20.0统计学软件进行正态性检验,若数据符合正态性分布,采用t检验分析,若数据不符合则采用ANOVA分析,结果以均数±标准差表示,P<0.05表示差异有统计学意义。结果1.Lewis大鼠

关键词： γδT17细胞 EAMG S1P1 重症肌无力

Ras信号传导通路在实验性自身免疫性重症肌无力大鼠发病机制中的作用

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Ras信号传导通路在实验性自身免疫性重症肌无力大鼠发病机制中的...

作者：韦君翔广西医科大学

学位级别：硕士

研究背景目的重症肌无力(Myasthenia Gravis,MG)是由机体自身对神经肌肉接头处(Neuromuscular Junction,NMJ)的乙酰胆碱受体(Acetylcholinergic Receptor Antibody,AchR)产生免疫反应而引起的神经系统自身免疫性疾病。Ras超家族的小型Gtpases在整个神经发育过程,包括神经发生、分化、基因表达、膜和蛋白质运输、囊泡运输和突触可塑性的基本细胞过程中都起着至关重要的作用。本研究通过建立实验性自身免疫性重症肌无力(Experimental Autoimmune Myasthenia Gravis,EAMG)大鼠模型,并使用Ras抑制剂法尼基硫代水杨酸(Farnesylthiosalicylic Acid,FTS)在体内阻断Ras信号通路,探究Ras信号通路在EAMG大鼠发病中的作用,以及对于神经肌肉接头处乙酰胆碱受体的影响。实验方法使用人工合成大鼠源性AchRα97-116肽段主动免疫Lewis大鼠EAMG模型,同时设立佐剂(Freunds Complete Adjuvant,CFA)对照组,通过观察并记录大鼠的体重、抓力,酶联免疫吸附法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测大鼠血清乙酰胆碱受体抗体,低频重复神经电刺激(Reptitive Nerve Stimulation,RNS)刺激、透射电子显微镜下(Transmission Electron Microscope,TEM)观察神经肌肉接头处超微结构形态等方法及指标筛选EAMG模型成功大鼠。将模型成功大鼠随机分为EAMG组和EAMG+FTS组。予治疗组大鼠FTS(20 mg/kg)连续灌胃治疗7天后,无菌条件下分离大鼠腓肠肌,通过实时荧光定量PCR(Quantitative Real-Time PCR,q RT-PCR)法检测各组大鼠骨骼肌组织中n AchRα7、n AchRα1、n AchRε、n AchRβ1和n AchRγm RNA的表达量;Western-blotting法比较各组大鼠骨骼肌组织中n AchRs、Ras、p38MAPK、p-p38MAPK的蛋白表达量以及p38MAPK磷酸化水平,免疫荧光法(Immunofluorescence,IF)观察肌肉组织中α-Bungarotoxin蛋白分布及表达情况。实验结果⑴EAMG大鼠模型的鉴定:与对照组大鼠相比,模型组的体重和抓力没有显著差别。EAMG组/CFA对照组大鼠血清抗AchRα97-116 Ig G≥2.1倍视为阳性,EAMG组OD值为1.96±0.089,CFA对照组为0.49±0.052,两组差异有统计学意义(PEAMG模型成功率约为76%。透射电镜下观察到CFA组大鼠神经肌肉接头处突触结构完整,褶皱排列紧密、整齐,而EAMG大鼠NMJ处突触褶皱排列稀疏、不规则;EAMG组低频重复神经电刺激衰减率>25%。⑵RT-PCR结果示:与CFA对照组相比,EAMG组n AchRα7、α1、β1亚基m RNA表达量显著降低(PEAMG组相比,EAMG+FTS组n AchRα7亚基m RNA表达量显著升高(PEAMG组大鼠骨骼肌中n AchRα7蛋白表达量显著降低(PEAMG组和EAMG+FTS组大鼠骨骼肌Ras蛋白表达量未见明显差异;与CFA相比,EAMG组中Ras下游通路蛋白p-p38MAPK蛋白表达量显著升高(PEAMG组大鼠肌肉组织中α-Bungarotoxin表达量减少,使用Ras抑制剂后,未见明显变化。结论采用人工合成大鼠源性AchRα97-116肽段主动免疫Lewis大鼠,可以成功建立EAMG大鼠模型。阻断Ras信号通路后,可以上调EAMG大鼠骨骼肌组织中下降的n AchRα7、ε亚基的m RNA表达水平。Ras还通过激活其下游MAPKs途径,上调p-p38MAPK蛋白表达量,调节EAMG大鼠肌肉中n AchRα7蛋白的表达。由此推测,Ras-p38MAPK信号通路可能参与实验性免疫性重症肌无力大鼠的发病。

关键词：重症肌无力 Ras AchR EAMG

“温阳补气”针法对EAMG大鼠神经肌肉接头处乙酰胆碱受体表达的影响

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中国老年学杂志 2014年第21期34卷 6091-6093页

作者：王宇峰张立娜王洪峰长春中医药大学吉林长春130117

目的探讨'温阳补气'针法对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠神经肌肉接头(NMJ)处乙酰胆碱受体(AchR)表达水平的影响机制。方法乙酰胆碱受体α1(AchRα1)129~145多肽片段与弗氏完全佐剂(CFA)混合免疫接种SPF三级Lewis雌性大鼠,建立E... 详细信息

目的探讨'温阳补气'针法对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠神经肌肉接头(NMJ)处乙酰胆碱受体(AchR)表达水平的影响机制。方法乙酰胆碱受体α1(AchRα1)129~145多肽片段与弗氏完全佐剂(CFA)混合免疫接种SPF三级Lewis雌性大鼠,建立EAMG大鼠动物模型。随机选取建模成功的EAMG大鼠30只,分成针灸治疗组10只、药物对照组10只、模型对照组10只,并将同期购进的未建模的10只大鼠设为空白对照组。针灸治疗组大鼠予以'温阳补气'针法治疗,30 min/次,1次/d,7 d为1个疗程,疗程间休息1 d,连续治疗2个疗程;药物对照组予以溴吡斯的明灌胃治疗,18.5 mg·kg-1·d-1,连续治疗15 d;其余两组不予任何特殊处置,仅作对照观察。治疗结束后,采用ELISA法测定大鼠NMJ处AchR的含量。结果经治疗后,针灸治疗组、药物对照组与模型对照组比较,两组EAMG大鼠NMJ处AchR的表达水平显著升高,与模型对照组相比均具有显著性差异(PEAMG大鼠NMJ处AchR表达水平的影响无显著性差异(P>0.05)。结论 '温阳补气'针法可以促进EAMG大鼠NMJ处AchR的表达,从而发挥其治疗MG的作用,其治疗效果与溴吡斯的明相近。

关键词：针灸 EAMG 神经肌肉接头乙酰胆碱受体

基于CLSM技术的“温阳补气”针法对EAMG大鼠神经肌肉接头处乙酰胆碱受体变化影响的研究

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基于CLSM技术的“温阳补气”针法对EAMG大鼠神经肌肉接头处乙酰胆...

作者：黄海鹏长春中医药大学

学位级别：硕士

目的:应用激光共聚焦显微镜(CLSM)检测技术,对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠神经肌肉接头处乙酰胆碱受体(AchR)的表达、分布情况进行检测分析,探讨“温阳补气”针法治疗MG的疗效和作用机制,为临床上针灸治疗MG提供理论支撑和实... 详细信息

目的:应用激光共聚焦显微镜(CLSM)检测技术,对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠神经肌肉接头处乙酰胆碱受体(AchR)的表达、分布情况进行检测分析,探讨“温阳补气”针法治疗MG的疗效和作用机制,为临床上针灸治疗MG提供理论支撑和实验依据。方法:SPF级雌性Lewis大鼠70只,随机选取其中10只大鼠作为空白对照组,其余60只大鼠采用AChRα1 129-145多肽片段免疫接种,建立EAMG大鼠动物模型;随机选取建模成功的EAMG大鼠30只,分为模型对照组10只、药物对照组10只、针刺治疗组10只;其中空白对照组同期相同条件下饲养,不做任何处理,模型对照组建模后清洁饲养,不予以任何干预措施,药物对照组予以溴吡斯的明灌胃治疗,针刺治疗组予以“温阳补气”针法治疗;治疗结束后,进行荧光免疫组化,应用CLSM进行采图,利用Image—Pro Plus6.0图像分析软件进行分析,测定视野中EAMG大鼠神经肌肉接头处AchR分布的面积平均值和累计荧光密度值。结果:①成功建立EAMG大鼠动物模型32只,造模成功率为53.3%,模型对照组EAMG大鼠神经肌肉接头处AchR表达、分布水平明显降低,与空白对照组比较具有统计学意义(PEAMG大鼠神经肌肉接头处AchR表达、分布水平明显增高,与模型对照组相比具有统计学意义(PEAMG大鼠神经肌肉接头处AchR表达、分布水平结果相近,无统计学意义(P>0.05)。结论:①“温阳补气”针法对EAMG具有良好的治疗作用,其作用效果与溴吡斯的明相近且无毒副作用;②“温阳补气”针法对MG具有良好的治疗作用,针刺有可能通过提高神经肌肉接头处AchR的表达水平而发挥治疗MG的作用。

关键词： CLSM “温阳补气”针法 EAMG 神经肌肉接头处 AchR

雷公藤对EAMG大鼠CD4+CD25+Foxp3+细胞的分布情况影响

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中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 2021年第6期 0001-0003页

作者：王洪伟郑慧哲吴琦郎志芳张景利牡丹江医学院附属红旗医院病理诊断中心黑龙江牡丹江157011

研究雷公藤对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠(Experimental Autoimmune Myasthenia Gravis, EAMG)的治疗作用,探讨CD4+CD25+Foxp3+细胞在EAMG的发病中的作用,为临床治疗提供理论依据。方法:以完全弗氏佐剂(CFA)、大鼠来源的AChRα97-11... 详细信息

研究雷公藤对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠(Experimental Autoimmune Myasthenia Gravis, EAMG)的治疗作用,探讨CD4+CD25+Foxp3+细胞在EAMG的发病中的作用,为临床治疗提供理论依据。方法:以完全弗氏佐剂(CFA)、大鼠来源的AChRα97-116(DGDFAIVKFTKVLLDYTGHI)多肽片段、免疫Lewis大鼠,建立EAMG动物模型。依据Lennon评分法及体重监测,并设置雷公藤组、CFA对照组、EAMG模型组。流式细胞仪检测各组大鼠胸腺和血液中CD4+CD25+FoxP3+细胞的分布情况。结果:流式细胞检测发现,各组大鼠脾和血液中,CFA组和TWP治疗组与EAMG组比较,CFA组中CD4+CD25+Foxp3+阳性T细胞的比例明显偏高,且有显著差异。结论:Th1/TH2/Th17/Treg四种T细胞亚群的失衡状态在EAMG的发病中发挥重要作用,而TWP可以通过调节这种失衡状态起到治疗作用。

关键词： TWP EAMG Treg细胞大鼠

白芍总苷在重症肌无力中的抗炎及免疫调节作用

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白芍总苷在重症肌无力中的抗炎及免疫调节作用

作者：庞琳泰山医学院

学位级别：硕士

研究背景及目的重症肌无力(Myasthenia gravis,MG)是一种依附于T细胞,补体参与,和抗烟碱型乙酰胆碱受体抗体传送的,针对神经肌肉接头处突触后膜上乙酰胆碱受体(acetylcholine receptor,AChR)持续性伤害破坏的一种自身免疫性疾病。该病... 详细信息

研究背景及目的重症肌无力(Myasthenia gravis,MG)是一种依附于T细胞,补体参与,和抗烟碱型乙酰胆碱受体抗体传送的,针对神经肌肉接头处突触后膜上乙酰胆碱受体(acetylcholine receptor,AChR)持续性伤害破坏的一种自身免疫性疾病。该病的发生已8-20/10万为高,并有逐年增加的趋势。临床主要特征是局部或全身横纹肌于活动时易于疲劳无力。主要累及眼外肌、四肢、延髓诸肌肉,严重时出现呼吸肌无力(重症肌无力危象),常危及生命。EAMG(Experimental autoimmune myasthenia gravis)与人类MG有不少近似之处,尤其是在临床特征、电生理变化、机体调节机制及病理病生方面有不少近似之处,近期国内外研究均证实Lewis重症肌无力大鼠模型可用以研究MG的信号传导通路及新型免疫抑制剂的开发。目前MG的临床治疗方法主要包括:抗胆碱脂酶类药物、糖皮质激素、静脉用免疫球蛋白、胸腺切除术和血浆替换疗法等。这些方法虽然对疾病有效,但常不能完全控制疾病,且花费巨大,副作用较大。所以,若能研发出获取方便、价格低廉、毒副作用小的免疫抑制剂治疗MG,将会造福广大患者,带来巨大的社会效益和产业前景。白芍是芍药(paeonialactif lora)的干燥根,芍药是毛科植物中较典型的一种。其在类风湿关节炎、滑膜行关节炎、SLE等自身免疫性疾病中发挥的作用日益加重,已成功吸引国内外临床医学及制药业的高度重视。其作用物质已被成功获得,关键是一组糖苷类物质,统称为白芍总苷(total glucosidesof peony,TGP),它被称为总glucosidesof(TGP),牡丹和芍药苷的含量,这是牡丹的一个重要组成部分,超过对白芍总苷的总甙90%。近期来自于国内外研究进一步证实,TGP同其它免疫抑制剂一样,存在较有效的对抗炎症、免疫调节及较好的抵制氧化功能,Jing Li等利用实验性动脉硬化动物模型研究发现TGP及TNFα、IL-6等炎性分子水平,Ming Zhao等发现TGP通过增加狼疮患者CD4+细胞中的FOXP3去甲基化,进而上调CD4+CD25+T细胞数量。TGP可有效治疗SLE(systemic lupus erythematosus)的相关报道已经发布,持续服用TGP 5年以上者,明显减少糖皮质激素及甲氨蝶呤等的应用水平。目前国内外尚没有TGP治疗MG及EAMG的报道,综上所述,TGP抗炎作用确切,而且TGP胶囊1998年被中国国家食品药品监督管理局批准为治疗类风湿关节炎(rheumat-oid arthritis,RA)的抗炎及免疫调节类药物(批号:x-456),其在RA治疗的临床应用已较成熟,安全性高,若能应用于MG治疗,将比其他免疫抑制剂更胜一筹。1材料1.1试验:是6-8周龄雌性Lewis大鼠选用体重约140-160g。1.2主要抗原:乙酰胆碱受体α亚基97-116。2实验方法2.1 EAMG模型的诱导和临床评分第一次免疫:给予大鼠相应抗原进行第一次免疫。各组大鼠200ul抗原乳剂(含50克r97-116肽、2毫克结核分枝杆菌,不完全弗式佐剂)自尾根慢慢注入到皮下组织,形成皮丘,无抗原乳液外溢。该过程应在大鼠饲养第7天进行(普通条件下),可有效减少大鼠死亡率。记第一次免疫当天为第0天。免疫后第30 d继续上述免疫一次,也称加强免疫,注意仔细操作,避免大鼠尾根部溃烂。采用双盲法每天记录大鼠的体重和准确评分。用Lennon标准评价各组大鼠肌肉强度的变化。2.2白芍总苷治疗EAMG将18只Lewis大鼠随机分成白芍总苷大剂量组(150mg/Kg.d)、白芍总苷小剂量组治疗组(50mg/Kg.d)和对照组(等体积的溶剂CMC-Na)。于EAMG大鼠发病初期开始每日给予白芍总苷灌胃治疗,直至大鼠发病高峰期第54 d。2.3流式细胞仪检测大鼠淋巴结中Foxp3、IFN-γ、IL-4的表达在实验室超洁净工作台迅速分离腹股沟淋巴结,并立即选择相应的细胞滤器和培养皿,充分切除淋巴结,尽可能多地准备淋巴结单核细胞悬液。经离心、洗涤、破膜、染色、再洗涤、再离心等处理后,使用流失细胞仪检测淋巴细胞中膈细胞因子的含量。2.4 CCK-8细胞增殖实验分为R97-116刺激组和对照组。细胞培养64 h后,吸取每孔细胞培养上清液,-20℃保存,择日检测细胞因子,继而每孔加入10 L CCK-8,4 h后酶标仪测定其光密度值(OD值)。2.5 ELISA检测大鼠血清抗R97-116抗体大鼠饲养第54天,即大鼠重症肌无力发病高峰期,麻醉后解剖大鼠,注射器抽取心脏血2-3ml,ELISA法测血清中抗R97-116抗体的含量。3数据处理与统计学分析采用spass 20.0统计软件分析,对两组标本进行独立样本t检验,pEAMG发病情况,看有

关键词：白芍总苷 EAMG Treg IL-4 IFN-γ 淋巴细胞流式细胞检测

HPA轴损伤对EAMG大鼠胸腺组织GR mRNA表达影响及补脾强力复方干预作用

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辽宁中医杂志 2019年第1期46卷 181-186,I0008页

作者：李艳况时祥何前松贵阳中医学院第二附属医院贵州贵阳550002

目的:观察HPA轴损伤对实验性自身免疫性重症肌无力模型(EAMG)大鼠胸腺组织GR mRNA表达影响及补脾强力复方干预作用。方法:将Lewis大鼠随机分为假手术组、模型组、强的松组及补脾强力复方大、中、小剂量组(以下称大、中、小剂量组),除假... 详细信息

目的:观察HPA轴损伤对实验性自身免疫性重症肌无力模型(EAMG)大鼠胸腺组织GR mRNA表达影响及补脾强力复方干预作用。方法:将Lewis大鼠随机分为假手术组、模型组、强的松组及补脾强力复方大、中、小剂量组(以下称大、中、小剂量组),除假手术组外,余经双肾上腺摘除致HPA轴损伤,采用免疫诱导注射鼠源性AchR-α亚基97-116肽段复制EAMG模型,造模成功进行灌胃治疗4周后,ELISA法检测各组大鼠血清AchR-Ab、皮质醇水平,RT-q-PCR技术检测各组大鼠胸腺GR mRNA基因表达水平。结果:与假手术组比较,模型组AchR-Ab显著升高,皮质醇水平显著下降,均具有极显著统计学差异(PEAMG大鼠胸腺GR mRNA相对表达量显著降低,而补脾强力复方可提高胸腺组织GR mRNA的表达,有效调节HPA轴功能,这可能是其治疗MG的作用机制之一。

关键词： HPA轴补脾强力复方 EAMG 糖皮质激素受体基因