检索结果-南通市图书馆

eaats底物转运过程中转运区与三聚体界面的相对运动及TM4功能分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

EAATs底物转运过程中转运区与三聚体界面的相对运动及TM4功能分析

作者：容秀良南方医科大学

学位级别：硕士

谷氨酸是中枢神经系统最重要的兴奋性神经递质,一方面,它从突触前膜释放到突触间隙,作用于突触后膜,传递兴奋性信号,维持正常的细胞信号转导;另一方面,它是一种潜在的神经毒素,释放到突触间隙的谷氨酸发挥效应后需要及时回收入细胞内,... 详细信息

谷氨酸是中枢神经系统最重要的兴奋性神经递质,一方面,它从突触前膜释放到突触间隙,作用于突触后膜,传递兴奋性信号,维持正常的细胞信号转导;另一方面,它是一种潜在的神经毒素,释放到突触间隙的谷氨酸发挥效应后需要及时回收入细胞内,否则蓄积的高浓度谷氨酸会产生兴奋性毒性效应。由于缺乏谷氨酸代谢酶系统,释放到突触间隙的谷氨酸主要依靠突触前膜及神经胶质细胞上的兴奋性氨基酸转运体(Excitatory amino acid transporters,eaats)摄取回收。因此eaats对兴奋性突触信号的终止,正常兴奋性传导的维持,兴奋性中毒的预防有重要意义。研究显示eaats功能失调与多种神经退行性疾病相关,它的结构、功能及转运机制的研究可能给临床上这些疾病的预防和治疗提供线索,因此阐明eaats转运机制显得尤为重要。eaats主要通过自身构象不断发生改变来完成底物和离子的转运,它在底物转运循环三维空间构象的变化过程(包括如何与底物和离子结合与解离,参与位点等)是转运机制的研究重点。eaats的晶体结构解析有一定难度,但其原核生物同源体GltPh的晶体结构可用作eaats研究的参考模板。研究表明,GltPh羧基端和氨基端分别形成两个区:转运区和三聚体界面。转运区主要由发夹结构(helical hairpin,HP)1、HP2和跨膜区段(transmembrane domain,TM)7、TM8组成,这几个区段参与底物及离子结合位点的构成,并且HP1、HP2分别作为控制底物结合和解离的细胞内外闸门。整个转运区在底物转运过程向胞内运动并发生旋转;而TM2、TM4和TM5组成的三聚体界面在转运循环中趋于静止,起维持平衡的作用。关于eaats转运区内各区段在底物转运过程中构象改变的研究很多,但是转运区和三聚体界面之间的构象变化研究很少。我们首先分析了 eaats底物转运过程中转运区与三聚体界面之间的构象变化关系,完善了 eaats的转运机制。然后进一步分析TM4区段在转运底物过程中的构象改变,揭示真核TM4区段在转运循环中所负功能。第一章GLT-1底物转运过程中TM5与HP2的相对运动我们首先研究胶质细胞谷氨酸转运体(glial glutamate transporter-1,GLT-1)转运区与三聚体界面之间的构象改变。之前的研究表明HP2作为细胞外闸门参与底物和离子的转运;TM5区段部分位点参与转运通道的组成。本课题中我们首先研究TM5与HP2之间的构象变化关系。在TM5和HP2上挑选位点配对,构建了 I283C/S443C和S287C/S443C突变体。然后加入氧化剂Copper(Ⅱ)(1,10-Phenanthroline)3(CuPh)孵育,检测它对突变体底物摄取功能的影响。结果发现CuPh作用后I283C/S443C和S287C/S443C对底物的摄取减少,而其它对照组的底物摄取功能不受影响,说明这两对突变体的两个半胱氨酸之间形成了二硫键,并且这个二硫键的形成只发生在同一个单体内。加入还原剂二硫苏糖醇(DL-Dithiothreitol,DTT)孵育后 I283C/S443C 和 S287C/S443C 的转运活性有所恢复,这反向验证了二硫键的形成。动力学参数检测结果显示,CuPh孵育后I283C/S443C和S287C/S443C与底物的亲和力降低,并且I283C/S443C转运功能受损。至此我们推测这两对位点在空间距离上十分邻近。然后加入不同的细胞外介质,检测它们对CuPh氧化抑制效应的影响。不同细胞外介质对I283C/S443C和S287C/S443C转运活性的影响不同。在加入底物谷氨酸(L-glutamate,L-glu)或K+,使转运体向胞内开放比例增加时,CuPh对I283C/S443C转运活性抑制效应减弱,对S287C/S443C转运活性抑制效应进一步增强。加入底物非转运性抑制剂D,L-threo-β-benzyloxyaspartate(DL-TBOA)对两者转运活性影响不大。加入非透膜性疏基试剂(2-trimethylammonium)methanethiosulfonate(MTSET),检测各个位点的水相通透性。S287C对MTSET不敏感,各时相水相通透性变化不大。I283C和S443C水相通透性变化一致:在转运体向胞内开放时相比例增加时,二者水相通透性降低。综上,我们认为GLT-1转运底物过程中TM5区段和HP2区段之间发生了复杂的相对运动:HP2向胞内运动并不仅仅是简单的直线运动,而是伴随着旋转,旋转方向为偏离TM5上Ile-283位点。而之前根据GltPh晶体学结构模拟计算,发现GltPh上分别对应于GLT-1的Ile-283和Ser-443位点的Val-201和Gly-357位点之间的距离在从胞外开放时相

关键词：构象改变 eaats TM4 HP1 HP2 TM5

星形胶质细胞调控的谷氨酸代谢与癫痫的关系探讨

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

生理科学进展 2022年第2期53卷 127-131页

作者：陈雪马青张慧明徐梦李娟柳钰书唐民科北京中医药大学中药学院北京102488

癫痫(Epilepsy)是一种常见的慢性神经系统疾病,长期反复发作会逐渐损害患者的认知功能并且导致多种共患疾病。癫痫发病机制复杂,其中谷氨酸代谢异常与癫痫发病关系密切。谷氨酸-谷氨酰胺循环是调节谷氨酸代谢的主要途径,谷氨酸转运体和... 详细信息

癫痫(Epilepsy)是一种常见的慢性神经系统疾病,长期反复发作会逐渐损害患者的认知功能并且导致多种共患疾病。癫痫发病机制复杂,其中谷氨酸代谢异常与癫痫发病关系密切。谷氨酸-谷氨酰胺循环是调节谷氨酸代谢的主要途径,谷氨酸转运体和星形胶质细胞在其中发挥重要作用。因此,本文主要探讨星形胶质细胞及谷氨酸转运体对癫痫的影响。

关键词：癫痫谷氨酸-谷氨酰胺循环谷氨酸转运体 eaats 星形胶质细胞

基于星形胶质细胞靶点的抑郁症发病机制研究进展

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国药理学通报 2010年第9期26卷 1132-1135页

作者：戴建国陈琳赵玉男王中立黄玉芳南京中医药大学基础医学院病理学教研室江苏南京210046 南京中医药大学基础医学院生理学教研室江苏南京210046

抑郁症是具有自杀倾向的情感性精神障碍,其机制尚未完全阐明。随着对其研究的不断深入,一些非单胺类神经递质假说机制被陆续发现,特别是星形胶质细胞功能障碍在其中起重要作用。该文就星形胶质细胞靶点的抑郁症发病机制进行综述。

关键词：抑郁症星形胶质细胞发病机制非单胺类神经递质,GFAP eaats

Abnormal expressions of glutamate transporters and metabotropic receptor 1 in the spontaneously epileptic rat hippocampus

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

Abnormal expressions of glutamate transporters and metabotro...

精神分裂症与SLC1A6基因多态性的相关研究

中国药理学会第十次全国学术会议

作者： Ji-Qun Cai,Feng Guo,Feng Sun,Jun-Ling Yu,Qing-Hua Wang, Da-Yu Tu,Xiao-Yuan Mao,Kun-Can Wu,Rui Liu,Ni Xie (Dept of Pharmaceutical Toxicology,School of Pharmaceutical Sciences,China Medical University,92 Beier Road,Shenyang 110001 Dept of Pharmaceutical Toxicology,School of Pharmaceutical Sciences,China Medical University,92 Beier Road,Shenyang 110001)

Glutamate is the most abundant excitatory neurotransmitter in the central nervous system,which is released into the synaptic cleft and binds to glutamate receptors resulting in the propagation of an action potential under physiological *** modulation of the synaptic activity occurs both by the removal of glutamate from the synaptic cleft and by glutamate transporters and by modulation of glutamate receptors.

关键词： Spontaneously epileptic rat Epilepsy eaats mGluR

来源： cnki会议评论

在线全文

cnki会议

学校读者我要写书评

暂无评论

精神分裂症与SLC1A6基因多态性的相关研究

作者：贺佳中国医科大学

学位级别：硕士

前言精神分裂症是一组病因未明的精神病,多在青壮年发病,起病往往较为缓慢,临床上表现为思维、情感和行为等多方面的障碍以及精神活动的不协调。在我国,精神分裂症的终身患病率高达0.7%左右。精神分裂症的发病与很多因素有关,目前的研... 详细信息

前言精神分裂症是一组病因未明的精神病,多在青壮年发病,起病往往较为缓慢,临床上表现为思维、情感和行为等多方面的障碍以及精神活动的不协调。在我国,精神分裂症的终身患病率高达0.7%左右。精神分裂症的发病与很多因素有关,目前的研究显示其与遗传因素、神经病理学及大脑结构的异常、神经生化方面的异常、子宫内感染与产伤、神经发育病因学及社会心理因素等密切相关。其中,导致这种疾病的因素中,遗传因素起着主导作用。有研究证实,精神分裂症具有明显的遗传倾向,属于多基因遗传病,但其遗传机制目前尚未完全清楚。因此,精神分裂症易感基因的研究一直是精神疾病病因学研究中的重点。到上世纪80年代为止,对精神分裂症病因学的研究主要以多巴胺(DA)机能亢进假说为主导,但是精神分裂症的阳性症状、阴性症状、认知和情绪所带来的问题很难用多巴胺机能亢进假说来完全解释清楚。最近20年,谷氨酸神经递质传递功能与精神分裂症发病机制研究,特别是阴性症状和认知症状的相关性研究取得了明显进展,形成了精神分裂症的谷氨酸机能低下假说,已引起越来越多学者的关注。目的国外已有研究发现谷氨酸转运体基因SLC1A6基因rs2097837位点与精神分裂症的发病机制有关联,但单核苷酸多态性(SNPs)在不同的种族人群中是不同的。为此,本实验采用中国人作为样本,对SLC1A6上rs2097837是否与精神分裂症的病因有关进行研究,以探索中国人精神分裂症的易患因素,从而对该病发病机制的认识有进一步了解。方法根据目标序列设计引物,应用双向等位基因特异性多聚酶链反应技术扩增SLC1A6基因rs2097837,以聚丙烯酰胺凝胶电泳分离结合银染显带的方法,对266例中国北方汉族个体、245例精神分裂症患者进行了基因分型。结果266例中国北方汉族个体血液样品,通过常规电泳方法检测其基因型,检出AA型161例AG型22例GG型83例。计算得出等位基因A频率为0.647,等位基因G频率为0.353。245例精神分裂症患者血液样品经过检测,检出AA型175例AG型24例GG型46例。计算得出等位基因A的频率是0.763,等位基因G的频率是0.237。讨论通过对266例中国北方汉族个体SLC1A6基因rs2097837位点遗传多态性分析,所得数据基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡定律。本实验研究的结果表明,SLC1A6rs2097837位点在精神分裂症患者和健康对照群体中,基因型频率和等位基因频率分布存在显著性差异,具有的统计学意义(P＜0.05).同时,在精神分裂症患者群体中的AA基因型频率高于健康对照群体的频率。因此推测SLC1A6基因rs2097837位点等位基因A与精神分裂症之间有一定的关联性,可能是精神分裂症的易感等位基因。将本文获得的数据与文献中报道的日本人群体的等位基因频率进行比较。提示SLC1A6基因rs2097837位点的遗传多态性可能具有种族或地域差异,是人类遗传学研究的重要遗传标志。结论1.中国北方汉族人群中SLC1A6rs2097837位点的A-G突变可能与精神分裂症具有关联性。***1A6rs2097837位点在中国北方汉族群体具有较好的多态性分布。

关键词：精神分裂症 eaats SLC1A6

谷氨酸转运体4b-4c环在转运底物过程中的作用及构象变化的研究

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

谷氨酸转运体4b-4c环在转运底物过程中的作用及构象变化的研究

作者：张文龙南方医科大学

学位级别：硕士

谷氨酸由突触前膜释放到突触间隙,作用于突触后膜,传递兴奋性的神经信号。谷氨酸主要由位于神经元和胶质细胞上的兴奋性氨基酸转运体(Excitatory amino acid transporters,eaats)重新摄取回收,防止兴奋性毒性效应。eaats功能失调与脑缺... 详细信息

谷氨酸由突触前膜释放到突触间隙,作用于突触后膜,传递兴奋性的神经信号。谷氨酸主要由位于神经元和胶质细胞上的兴奋性氨基酸转运体(Excitatory amino acid transporters,eaats)重新摄取回收,防止兴奋性毒性效应。eaats功能失调与脑缺血、中风和肌萎缩侧索硬化等疾病相关。高亲和力谷氨酸转运体分为 EAAT1(excitatory amino acid transporter-1)、GLT-1(glial glutamate transporter type one)、EAAC1(excitatory amino acid carrier-1,EAAT3)、EAAT4 和 EAAT5亚型。eaats主要利用Na+-K+-ATP酶形成的Na+和K+的电化学浓度梯度来完成对谷氨酸的转运。eaats每转运1个谷氨酸分子,伴随有3个Na+和1个H+同向转入细胞内,1个K+转运到细胞外。原核生物天冬氨酸转运体(Pyrococcus horikoshii,GltPh)的晶体结构研究表明,该转运体是由3个单体组成的三聚体,每个单体都是独立的转运功能单位,由8个跨膜区段(transmembrane domain,TM)TM1～TM8和2个方向相反的发夹结构(helical hairpin,HP)HP1～HP2组成。HP1位于跨膜区段TM6和TM7之间,HP2位于跨膜区段TM7和TM8之间。TM1～TM2和TM4～TM5组成的转运体的支架区域,起维持平衡的作用。TM3,TM6～TM8和HP1-HP2组成转运体的转运区域。迄今为止科学家解析了谷氨酸转运体同族体GltPh和人源EAAT1的晶体结构。虽然原核生物GltPh和和真核的eaats结构相似,但氨基酸序列相似性低于40%。GltPh和eaats的第四跨膜区段均包含三个分隔的α-螺旋TM4a、TM4b及TM4c。GltPhTM4b与TM4c之间只有4个氨基酸残基,而eaats则有57个氨基酸残基,形成TM4b-4c环,在人源EAAT1的晶体结构中未解析成功。eaats TM4b-4c环较GltPh的多了约50个氨基酸残基,必然导致二者在空间构型、转运底物过程中构象变化及功能存在较大差异。因此,本课题主要用定点突变、半胱氨酸突变对交联的方法,旨在揭示TM4b-4c环与底物转运通道的关系和在底物转运中的功能,阐述原核与真核谷氨酸转运体转运机制差异的分子结构基础。对完全阐明eaats的转运机制提供一定的理论基础。第一章EAAT1 4b-4c环与底物转运通道关系的研究为了探讨eaats TM4b-4c环在在转运底物中的作用,TM4b-4c环的57个氨基酸残基分别逐一突变成半胱氨酸。其中13个突变体的转运活性低于15%。活性太低不能进一步研究。分别用透膜巯基试剂MTSEA和非透膜巯基试剂MTSET检测具备转运活性的半胱氨酸突变体的水相通透性。F190C、V238C和A243C 的转运活性被 MTSET 抑制,Q189C、F190C、V238C、A243C 和 L244C对MTSEA敏感。当加入K+使转运体向胞内开放时相比例增加时,MTSEA对Q189C和L244C的转运活性的抑制作用增强。相反地,L-glu能保护MTSEA对L244C的转运活性抑制的作用。对于A243C而言,L-glu、K+和TBOA均能增强MTSEA的抑制作用。对于突变体F190C和V238C,不同的细胞外介质对巯基的抑制作用无明显变化。根据以上结果,我们推测氨基酸残基F190C,V238C,A243C可能暴露于细胞外液,TM4b-4c环可能形成多次跨膜结构。另一方面,氨基酸残基F190C、V238C和A243C可能参与转运通道的组成。此外,不同的细胞外介质中,突变体Q189C、A243C和L244C对巯基的抑制有变化,推测Q189C、A243C和L244C在转运底物中水相通透性发生改变,可能参与底物转运。第二章EAAT1底物转运过程中TM4b-4c环与TM7的相对运动为了进一步研究谷氨酸转运体TM4b-4c环在转运底物过程中与TM7空间距离的改变,探讨其在转运过程构像的改变。我们在TM4b-4c环氨基酸位点A243和TM7构建了 26对半胱氨酸对。其中A243C/T396C和A243C/S414C能被氧化剂Cu(Ⅱ)(1,10-phenanthroline)和Cd2+抑制,相应的单个半胱氨酸突变体和野生型不被抑制,提示半胱氨酸对间二硫键的形成。半胱酸对A243C/T396C和A243C/S414C的氧化抑制效应经还原剂DTT处理后转运活性恢复,该实验进一步确认半胱氨酸对间二硫键的形成。在突变体A243C/T396C中,L-glu、K+和TBOA均能增强CuPh的抑制作用。提示在对内开放时相和对外开放时相中

关键词： eaats 转运活性 TM4b-4c TM7 MTSET CuPh

谷氨酸转运体的结构、功能及其在神经精神疾病中的作用

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

昆明医科大学学报 2020年第9期41卷 142-148页

作者：代毅聪陈凤容王昆华国家卫生健康委员会毒品依赖和戒治重点实验室云南昆明650032 昆明医科大学附属第一医院胃肠与疝外科云南昆明650032 云南省消化疾病防治工程技术研究所云南昆明650032 昆明医科大学第一附属医院科研实验中心云南昆明650032

谷氨酸作为主要的的兴奋性神经递质,其兴奋性和毒性与各种神经系统疾病密切相关,包括神经退行性变、药物依赖。对谷氨酸转运体结构和功能的研究发现,其在中枢神经系统中调节谷氨酸的摄取和释放,从而在神经系统疾病发病和防治中发挥的重... 详细信息

谷氨酸作为主要的的兴奋性神经递质,其兴奋性和毒性与各种神经系统疾病密切相关,包括神经退行性变、药物依赖。对谷氨酸转运体结构和功能的研究发现,其在中枢神经系统中调节谷氨酸的摄取和释放,从而在神经系统疾病发病和防治中发挥的重要作用,尤其是作为药物靶标用于开发治疗谷氨酸能系统相关疾病的药物和成瘾的戒治具有重要价值。文章从结构、功能、神经精神相关疾病机制等方面介绍谷氨酸转运体,为神经退行性疾病预防、成瘾戒治寻找治疗靶点提供新的治疗思路。

关键词：谷氨酸谷氨酸转运体 eaats VGLUTs 药物依赖

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

肠道中谷氨酸的功能及其吸收转运调控

畜禽业 2021年第10期32卷 5-7页

作者：陈明霞刘贤旭梁常杰广东科贸职业学院动物科技学院广东广州510430

谷氨酸作为肠上皮细胞能源物质、生物活性前体物质和神经递质,对肠道健康和功能的发挥具有重要的作用,肠道中谷氨酸功能的发挥与其转运载体的表达和转运活性密不可分。围绕谷氨酸在肠道中的功能及兴奋性氨基酸转运载体(excitatory amino... 详细信息

谷氨酸作为肠上皮细胞能源物质、生物活性前体物质和神经递质,对肠道健康和功能的发挥具有重要的作用,肠道中谷氨酸功能的发挥与其转运载体的表达和转运活性密不可分。围绕谷氨酸在肠道中的功能及兴奋性氨基酸转运载体(excitatory amino acid transporters,eaats)的表达和调控进行综述,为谷氨酸在动物,尤其是幼龄动物肠道发育和健康方面的应用提供参考。

关键词：谷氨酸功能 eaats 肠上皮细胞

谷氨酸转运体在帕金森病发病机制中作用的研究进展

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

基础医学与临床 2021年第12期41卷 1813-1817页

作者：马利芳梁建庆何建成孙雪梁鹏甘肃中医药大学基础医学院甘肃兰州730000 甘肃中医药大学敦煌医学与转化教育部重点实验室甘肃兰州730000 上海中医药大学基础医学院上海201203 兰州大学第二临床医学院甘肃兰州730000

谷氨酸(Glu)介导的兴奋性毒性是帕金森病(PD)的主要发病机制,其中谷氨酸转运体是调控Glu兴奋性毒性过程的关键因子,故而谷氨酸转运体可能参与PD的发病并在其过程中发挥着重要作用。因此,了解谷氨酸转运体在PD发病机制中的作用,有助于后... 详细信息

谷氨酸(Glu)介导的兴奋性毒性是帕金森病(PD)的主要发病机制,其中谷氨酸转运体是调控Glu兴奋性毒性过程的关键因子,故而谷氨酸转运体可能参与PD的发病并在其过程中发挥着重要作用。因此,了解谷氨酸转运体在PD发病机制中的作用,有助于后期为以谷氨酸转运体为靶点的药物研发提供新的思路。

关键词：帕金森病谷氨酸谷氨酸转运体 eaats VGLUTs