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11型HPVE7蛋白的表达及其多克隆抗体的制备

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细胞与分子免疫学杂志 2014年第6期30卷 618-622页

作者：丁杨姜少杰陈贤祯陈丽红张行程浩浙江大学医学院附属邵逸夫医院皮肤科浙江杭州310016 浙江大学医学院附属邵逸夫医院生物医学研究中心浙江杭州310016 附属第二医院临床医学研究中心浙江杭州310009

目的构建人11型乳头瘤病毒(HPV 11)E7蛋白的原核表达载体,表达纯化后制备抗HPV11E7蛋白的多克隆抗体。方法构建pGeX-4T2-HPV11e7原核表达载体,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导大肠杆菌表达可溶性融合蛋白GST-HPV11e7,纯化获取11型HP... 详细信息

目的构建人11型乳头瘤病毒(HPV 11)E7蛋白的原核表达载体,表达纯化后制备抗HPV11E7蛋白的多克隆抗体。方法构建pGeX-4T2-HPV11e7原核表达载体,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导大肠杆菌表达可溶性融合蛋白GST-HPV11e7,纯化获取11型HPVE7蛋白。将HPV11E7蛋白免疫新西兰大白兔获得抗HPV11e7的多克隆抗体,用蛋白G琼脂糖纯化获得IgG型多克隆抗体。Western blot法及免疫荧光染色检测该抗体的效价及特异性。结果 SDS-PAGe结果显示,经IPTG诱导6 h后可表达出高水平可溶性GST-HPV11e7融合蛋白。纯化后免疫新西兰大白兔获得抗HPV11e7的血清,纯化获得了IgG型多克隆抗体。Western blot及免疫荧光染色结果显示,兔抗HPV11e7 IgG具有效价高和特异性强的特点。结论成功表达了HPV11E7蛋白并制备了效价较高、特异性较好的IgG型兔抗HPV11E7蛋白多克隆抗体。

关键词：人乳头瘤病毒 E7蛋白原核表达多克隆抗体

人乳头瘤病毒致癌特性及其e6和E7蛋白致癌机制的研究进展

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吉林大学学报（医学版） 2018年第5期44卷 1096-1099页

作者：薛亚娟符兆英延安大学医学院病原生物学教研室陕西延安716000 延安大学分子生物学与免疫学研究所陕西延安716000

人乳头瘤病毒(HPV)是一种感染人的乳头瘤病毒科病毒,主要感染上皮细胞,其高危型别(主要是16和18型)可引起恶性肿瘤。高危型HPV感染上皮细胞后,其DNA能整合入细胞基因组,并由于其e2基因表达障碍不能有效抑制e6、e7基因转录而持续高表达e6... 详细信息

人乳头瘤病毒(HPV)是一种感染人的乳头瘤病毒科病毒,主要感染上皮细胞,其高危型别(主要是16和18型)可引起恶性肿瘤。高危型HPV感染上皮细胞后,其DNA能整合入细胞基因组,并由于其e2基因表达障碍不能有效抑制e6、e7基因转录而持续高表达e6和e7 2种癌蛋白。e6和E7蛋白可分别抑制P53蛋白和pRb蛋白的作用而使细胞周期失控,在细胞基因组受到损伤时细胞周期仍然向前进展;e6蛋白能通过影响多种凋亡调节蛋白或因子的表达而抑制细胞凋亡;e6蛋白和E7蛋白能协同作用上调端粒酶的表达而使细胞永生化;以上机制最终导致受感染细胞发生恶性转化或癌变。本文对HPV的致癌特性及其所表达的e6蛋白和E7蛋白扰乱细胞周期、抑制细胞凋亡并活化端粒酶使细胞永生化的致癌机制的研究进展进行了综述。

关键词：人乳头瘤病毒 e6蛋白 E7蛋白细胞周期细胞凋亡端粒酶

宫颈病变中人乳头瘤病毒来源E7蛋白表达及意义研究

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中国实用妇科与产科杂志 2018年第6期34卷 654-657页

作者：赵健贺丹王晓韩蕊马德勇冯慧董颖北京大学第一医院妇产科北京100034 北京大学第一医院病理科北京100034

目的探讨宫颈病变中人乳头瘤病毒(HPV)来源的E7蛋白表达及其与临床诊断病理级别的相关性。方法选取北京大学第一医院2015—2018年收治的宫颈上皮内瘤变(CIN)及宫颈鳞癌患者133例,另选取同期宫颈组织病理结果正常的34例患者为阴性对照。... 详细信息

目的探讨宫颈病变中人乳头瘤病毒(HPV)来源的E7蛋白表达及其与临床诊断病理级别的相关性。方法选取北京大学第一医院2015—2018年收治的宫颈上皮内瘤变(CIN)及宫颈鳞癌患者133例,另选取同期宫颈组织病理结果正常的34例患者为阴性对照。采用免疫组化染色技术检测E7蛋白的细胞表达情况,并与宫颈癌高危型HPV感染替代性标志物p16蛋白做比较。结果 E7蛋白在低度鳞状上皮内病变(LSIL)即CINⅠ中阳性率为63.64%(14/22),而在高度鳞状上皮内病变(HSIL)即CINⅡ、Ⅲ病例中阳性率为91.84%(45/49)和98.18%(54/55),宫颈癌中阳性率为100%(7/7)。p16蛋白阳性率在CINⅠ中为59.09%(13/22),CINⅡ、Ⅲ中分别为93.88%(46/49)和96.36%(53/55)。两者检测结果高度相关(Pe7和p16蛋白的阳性率均显著升高。但E7蛋白表达为片灶状阳性,与p16蛋白的弥漫阳性不同;同时HPV E7蛋白表达水平随CIN级别提升也显著增强。在HSIL及宫颈鳞癌中,E7蛋白阳性强度明显高于LSIL。随着患者年龄增长,E7蛋白的阳性率也呈升高趋势,并且其染色强度也增强。结论 e7癌蛋白的阳性率及其表达强度与宫颈病变程度密切相关,并与年龄有关;E7蛋白有望作为宫颈病变CIN诊断与分级的重要参考指标。

关键词：人乳头瘤病毒 E7蛋白宫颈病变 p16蛋白蛋白表达

人乳头瘤病毒16型E7蛋白的生物信息学分析

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中国病原生物学杂志 2017年第8期12卷 703-707,712页

作者：丛盛日林晓瑞任雪文王雪莲中国医科大学临床三系辽宁沈阳110122 中国医科大学基础医学院病原生物学教研室

目的应用生物信息学预测分析人乳头瘤16型病毒(human papillomavirus type 16,HPV16)E7蛋白的结构特征与抗原表位。方法自NCBI GeNe BANK获取HPV16E7蛋白的基因信息,应用ProtParam分析其编码的E7蛋白理化性质和一级结构;利用SOPMA分析e... 详细信息

目的应用生物信息学预测分析人乳头瘤16型病毒(human papillomavirus type 16,HPV16)E7蛋白的结构特征与抗原表位。方法自NCBI GeNe BANK获取HPV16E7蛋白的基因信息,应用ProtParam分析其编码的E7蛋白理化性质和一级结构;利用SOPMA分析E7蛋白的二级结构;应用SWISS MODeL的Automated mode预测E7蛋白的三维空间结构;使用NetNGlyc 1.0Server、NetPhos3.1Server、MotifyScan、SignalP及TMHMM预测蛋白质的翻译后修饰位点、信号肽切割位点和跨膜区;利用CLUSTALX将HPV16E7蛋白同其他高危型HPV E7蛋白进行同源性对比;应用ABCpred、BepiPred、IeDB、SYFPeITHI和NetMHCIIpan 3.1Server预测E7蛋白的优势抗原表位。结果生物信息学预测E7蛋白无规卷曲占52.04%,结构较松散,为不稳定性蛋白。该蛋白存在多个磷酸化位点。利用序列匹配度为46%的HPV45E7蛋白为模板得到同型二聚体三级预测结构。E7蛋白高度保守,且具有潜在的B细胞抗原表位1-8、15-22、33-46,CD8+T细胞抗原表位82-90、11-19、7-11、85-93、13-21和CD4+T细胞抗原表位9-23、73-87、10-24、7-21、21-35。结论 HPV16E7蛋白为不稳定蛋白。该蛋白高度保守,且具有潜在的B、T细胞抗原表位。

关键词：人乳头瘤病毒 E7蛋白抗原表位生物信息学

人乳头瘤病毒E7蛋白检测子宫颈上皮内病变的价值

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中国妇产科临床杂志 2017年第2期18卷 128-130页

作者：杨光陈青洪颖郑金榆南京南京大学医学院附属鼓楼医院妇产科 210008 南京南京大学医学院附属鼓楼医院病理科 210008

目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)E7蛋白检测宫颈病变的临床应用价值。方法选取180例高危型HPV阳性妇女,采用免疫细胞化学方法检测宫颈脱落细胞HPV E7蛋白。结果 (1)病理高级别宫颈上皮内病变(HSIL)及浸润癌组HPV E7蛋白阳性率(77.8%,56/72)... 详细信息

目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)E7蛋白检测宫颈病变的临床应用价值。方法选取180例高危型HPV阳性妇女,采用免疫细胞化学方法检测宫颈脱落细胞HPV E7蛋白。结果 (1)病理高级别宫颈上皮内病变(HSIL)及浸润癌组HPV E7蛋白阳性率(77.8%,56/72)显著高于低级别宫颈上皮内病变(LSIL)组(52.1%,25/48;P=0.003),病理LSIL组阳性率显著高于宫颈炎组(26.7%,16/60;P=0.007);(2)对于细胞学为ASCUS和LSIL的妇女,HPV E7蛋白诊断HSIL及宫颈癌的灵敏度、特异度、阳性预测值及阴性预测值分别为97.1%、52.1%、58.9%和96.2%;(3)HPV E7蛋白和TCT诊断LSIL及以上病变的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为67.5%vs 51.7%、73.3%vs 58.3%、83.5%vs 71.3%、53.0%vs 37.6%,除特异度外,E7蛋白诊断的价值优于TCT(PE7蛋白在检测宫颈病变,尤其是在细胞学轻度异常患者的分流中,具有一定的临床应用价值。

关键词：人乳头瘤病毒 E7蛋白宫颈病变免疫细胞化学染色法

HPV16 E7蛋白检测对宫颈癌前病变诊断及转归的应用价值

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HPV16 E7蛋白检测对宫颈癌前病变诊断及转归的应用价值

作者：率光楠天津医科大学

学位级别：硕士

目的:分析HPV16 E7蛋白检测对宫颈癌前病变的诊断价值和其对判断HPV16感染导致的不同级别的宫颈癌前病变预后转归的风险评估的效能。方法:选取在2016年9月至2017年12月期间因HPV16阳性就诊于天津市中心妇产科医院门诊并行阴道镜检查及... 详细信息

目的:分析HPV16 E7蛋白检测对宫颈癌前病变的诊断价值和其对判断HPV16感染导致的不同级别的宫颈癌前病变预后转归的风险评估的效能。方法:选取在2016年9月至2017年12月期间因HPV16阳性就诊于天津市中心妇产科医院门诊并行阴道镜检查及宫颈活检术,经病理学诊断为HSIL及以下的180例患者为研究对象,统计分析患者的临床资料,并采集宫颈脱落细胞,使用酶促化学发光法检测HPV16 E7蛋白浓度,以病理学为诊断金标准。分别比较不同细胞病理学结果和组织病理学检测结果患者中HPV16 E7蛋白阳性率及表达水平的关系,并分析在TCT结果正常的患者中E7蛋白的诊断效能。分别对组织病理学诊断为LSIL及以下和HSIL的患者进行2年随访,根据E7蛋白的检测结果将患者分组,比较不同E7蛋白结果的患者预后转归情况,评价E7蛋白对患者临床转归的预测价值。同时,对部分E7蛋白阳性的患者进行2年随访后再次取样测宫颈脱落细胞中的E7蛋白表达量,探讨E7蛋白在疾病转归过程中的变化情况。结果:1.E7蛋白阳性率和表达量中位数（P25,P75）随着细胞病理学结果为NILM、ASCUS、ASCUS-H、LSIL、HSIL的变化而增高（P=0.01）,提示HPV16 E7蛋白的阳性率及表达载量和宫颈细胞病理学的严重程度呈正相关。2.E7蛋白阳性率和表达量中位数（P25,P75）随着组织病理学结果为正常子宫颈、LSIL、HSIL的变化而增高（P＜0.001）,LSIL及以下组的E7蛋白阳性率显著低于HSIL组（P＜0.001）,提示HPV16 E7蛋白的阳性率及表达载量和宫颈组织病理学呈正相关,对HSIL的诊断有较高的预测价值。3.评价HPV16 E7蛋白检测在HPV16感染、TCT阴性患者中的诊断效能,其阴性预测值和阴性似然分别为69%和0.592,采用ROC曲线及约登指数,再次确定HPV16 E7蛋白浓度临界值为2.765ng/ml,计算出此时的阴性预测值和阴性似然比分别为92.3%和0.1,得到了更满意的阴性预测值和阴性似然比,所以在TCT阴性患者中取2.765ng/ml为临界值能帮助我们筛查出更多的未患病病例,而减少非必须的阴道镜转诊。4.对病理学诊断为正常宫颈及LSIL的患者进行随访,E7蛋白阳性组出现病情进展的比例明显高于E7蛋白阴性组,而E7蛋白阴性组出现HPV转阴比例亦明显高于E7蛋白阳性组（χ^2=14.899,P=0.001）,进一步计算了E7蛋白检测对LSIL及以下预后有着较高的阳性预测值（82.4%）和阳性似然比（4.43）,这也提示E7蛋白检测在判断正常子宫颈和LSIL患者的病情发展情况有着极高的价值;在HSIL治疗后的患者中,E7蛋白阳性和阴性两组的HPV情况无明显差别（χ^2=0.07,P=0.79）。5.HPV16阳性的宫颈病变患者治疗后有着较高的E7蛋白转阴率（82.6%）,尤其在患者接受有创性宫颈治疗后。结论:1.HPV16 E7蛋白对诊断HSIL有较好的预测价值,尤其在HPV16（+）、TCT（-）的患者中具有较好的排除诊断效能,能减少非必须的阴道镜转诊。2.HPV16 E7蛋白对LSIL及以下病变的转归有较好的预测价值。3.HPV16 E7蛋白检测对宫颈癌前病变的诊断及其转归的预测有较高的临床应用价值。

关键词：宫颈癌前病变人乳头瘤病毒16 E7蛋白转归风险评估

人乳头瘤病毒6b型E7蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

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病毒学报 2011年第5期27卷 416-420页

作者：汤怡周强王琦程浩浙江大学医学院附属邵逸夫医院皮肤科杭州310016 浙江大学医学院附属邵逸夫医院中心实验室杭州310016

进行人乳头瘤病毒6b型(Human papillomavirus type 6b,HPV6b)E7蛋白原核表达并制备其多克隆抗体。用已构建的pGeX-4T-2/HPV6be7原核表达载体诱导表达大量可溶性融合蛋白GST-HPV6be7,用Glutathione-Sepharose 4B亲和柱和凝血酶纯化获取HPV6b型E7蛋白。将纯化的E7蛋白免疫新西兰兔并纯化为多克隆抗体IgG。采用Western-Blot及免疫荧光法分析该抗体的效价及特异性。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGe)分析显示,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导3～6h后pGeX-4T-2/HPV6be7表达载体在大肠杆菌中高水平表达可溶性融合蛋白。纯化的E7蛋白免疫新西兰兔后可获得兔多克隆抗体IgG。经Western-Blot及免疫荧光鉴定,兔抗IgG具有高效价性和抗HPV6bE7蛋白特异性。获取纯化的HPV6b型E7蛋白具有较好的免疫原性,其免疫兔产生的多克隆抗体IgG效价高,特异性好,有望进一步用于HPV6b型的生物学功能研究和免疫学效应研究。

关键词：人乳头瘤病毒 E7蛋白多克隆抗体

E7蛋白在HPV16变异体持续感染患者宫颈组织中的表达

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实用医学杂志 2017年第5期33卷 739-742页

作者：周爱枝段迎春李进张爱戴晓莉赵云燕张蕾上海市浦东新区人民医院妇产科 201200 上海市浦东医院妇产科 201309 湖北省随州市中心医院生殖中心 441300

目的:探索HPV16亚洲变异体e6 T178G及欧洲变异体e6 T350G,A442C与其他变异体致宫颈病变及机制的异同。方法:选取浦东新区人民医院门诊或住院患者中HPV16型单一阳性、宫颈细胞学正常的300例研究对象,予宫颈液基薄层细胞学检查(Thinprep c... 详细信息

目的:探索HPV16亚洲变异体e6 T178G及欧洲变异体e6 T350G,A442C与其他变异体致宫颈病变及机制的异同。方法:选取浦东新区人民医院门诊或住院患者中HPV16型单一阳性、宫颈细胞学正常的300例研究对象,予宫颈液基薄层细胞学检查(Thinprep cytologic test,TCT)采集宫颈脱落细胞,对其e2、e6、e7基因序列进行检测;1年后复查TCT、HPV,持续感染者再次基因测序明确HPV16变异体分型,并对持续感染者进行阴道镜活检后病理检查,对所有患者均用SP免疫组化法检测E7蛋白表达水平。结果:HPV16变异体持续感染1年后,292例成功测序的患者中,259例慢性宫颈炎,32例宫颈上皮内瘤变Ⅰ级(CINI),1例宫颈上皮内瘤变Ⅰ级(CINⅡ)。E7蛋白在各种变异体感染的患者宫颈组织中均有表达,其在亚洲变异体及欧洲变异体感染组与其他变异体感染组之间表达无明显差异(P>0.05)。结论:E7蛋白可能在HPV16变异体致宫颈病变的早期阶段即发挥作用,但E7蛋白可能并不是HPV16不同变异体致宫颈病变机制不同的参考指标。

关键词：人乳头瘤病毒 E7蛋白变异体

光动力疗法对表达人乳头瘤病毒16E7蛋白的HaCaT细胞株增殖和凋亡的影响

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中华皮肤科杂志 2015年第10期48卷 683-686页

作者：缪飞王秀丽吕婷石磊张玲琳王宏伟复旦大学附属华东医院上海200040 上海市皮肤病医院

目的探讨氨基酮戊酸光动力疗法（ALA—PDT）对表达人乳头瘤病毒16 E7蛋白的HaCaT细胞株（简称HaCaT／HPV16 e7）增殖和凋亡的影响。方法HaCaT／HPV16 e7细胞株分为4组，即空白组、单纯光敏剂组、单纯照射组（12J／cm^2）、不同光剂量（4... 详细信息

目的探讨氨基酮戊酸光动力疗法（ALA—PDT）对表达人乳头瘤病毒16 E7蛋白的HaCaT细胞株（简称HaCaT／HPV16 e7）增殖和凋亡的影响。方法HaCaT／HPV16 e7细胞株分为4组，即空白组、单纯光敏剂组、单纯照射组（12J／cm^2）、不同光剂量（4、8、12J／cm^2）ALA—PDT组，细胞与氨基酮戊酸（ALA）共孵育5h，采用波长630nm、功率30mW／cm^2红光照射，CCK8法检测细胞24h后存活率，流式细胞仪检测细胞3h的凋亡率，显微镜观察细胞形态。结果空白组、单纯光敏剂组、单纯照射组（12J／cm^2）、不同光剂量（4、8、12J／cm^2）AIA—PDT照射细胞24h，细胞生长存活率分别为99．15％±0．64％、98．13％±0．83％、96．85％±1．37％、68．98％±1．03％、46．03％±2．96％、23．57％±3．83％，后3组ALA—PDT组与其他3组比较，差异有统计学意义（均P〈0．05）。随着光剂量升高，细胞凋亡逐渐增加，细胞形态发生明显改变，细胞皱缩。结论ALA光动力抑制HPV感染细胞增殖并促进细胞发生凋亡，在一定光剂量范围内，呈剂量依赖性。

关键词：氨基酮戊酸光化学疗法细胞增殖细胞凋亡 α乳头状瘤病毒属人乳头瘤病毒16 E7蛋白