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负载人乳头瘤病毒16型e7多肽树突细胞诱导抗原特异性细胞免疫反应

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中华皮肤科杂志 2004年第4期37卷 194-196页

作者：黄伟峰刁庆春郝飞徐云升钟白玉叶庆佾第三军医大学附属西南医院皮肤科重庆400038

目的观察负载人乳头瘤病毒 16 型 (H PV16)e749-57 多肽树突细胞 (DC)体外诱导针对H PV16+肿瘤细胞的特异性细胞免疫反应。方法用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM -CSF)及白介素 4(IL... 详细信息

目的观察负载人乳头瘤病毒 16 型 (H PV16)e749-57 多肽树突细胞 (DC)体外诱导针对H PV16+肿瘤细胞的特异性细胞免疫反应。方法用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM -CSF)及白介素 4(IL-4)从健康成人外周血单一核细胞诱导 DC 并负载 H PV 16 e749-57 多肽 ,流式细胞仪检测 DC 表面抗原;混合淋巴细胞反应观察 DC 对同种淋巴细胞增殖的激发效应 ;乳酸脱氢酶 (LDH )释放法评价 DC 诱导的细胞毒性 T 淋巴细胞 (CTL)对 Caski肿瘤细胞体外杀伤效应。结果负载 H PV16 e749-57 多肽的 DC 表面表达 CD 1a(58.4 ±6.7)%、CD 80(70.6 ±3.4)%及 H LA -DR (74.8 ±4.2)%分子 ;具有刺激同种 T 淋巴细胞增殖的能力 ;其诱导的抗原特异性 CTL 对 Caski肿瘤细胞产生特异性杀伤 ,而对 SiH a、A N3CA 肿瘤细胞无明显杀伤作用。结论负载 H PV16 e749-57 多肽的 DC 体外可诱导高效、特异性的 CTL 效应。

关键词：人乳头瘤病毒16型 e7多肽树突细胞抗原特异性细胞免疫反应粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子

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e7多肽/HLA-DRB1*0404与e7多肽/HLA-DRB1*1602四聚体对肺结核患者外周血多肽特异性CD4+T细胞治疗前后的变化的监测

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E7多肽/HLA-DRB1*0404与E7多肽/HLA-DRB1*1602四聚体对肺结核患者...

不同e7多肽/HLA-DRB四聚体分析检测结核患者外周血及胸水标本中多肽特异性CD4+T细胞

中华医学会结核病学分会2011年学术会议

作者：黄利荣李研方毅敏任亮亮朱艳唐文正赖小敏中山大学中山医学院微生物学教研室热带病防治研究教育部重点实验室海洋微生物功能分子广东省高校重点实验室广东省重大传染病预防和控制技术研究中心广州市胸科医院

目的监测肺结核患者外周血e7多肽特异性CD4 T细胞的比例及治疗前后各时间点肺结核患者外周血e7多肽特异性CD4 T细胞的变化。方法培养能稳定分泌表达e7/HLA-DRB1*0404和e7/HLA-DRB1*1602的果蝇S2细胞株,获得2种可生物素化复合物单体,进... 详细信息

目的监测肺结核患者外周血e7多肽特异性CD4 T细胞的比例及治疗前后各时间点肺结核患者外周血e7多肽特异性CD4 T细胞的变化。方法培养能稳定分泌表达e7/HLA-DRB1*0404和e7/HLA-DRB1*1602的果蝇S2细胞株,获得2种可生物素化复合物单体,进而制备成相应四聚体,分别用2种四聚体与抗人CD4-FITC共染色,流式细胞分析检测治疗前后肺结核患者外周血四聚体阳性(e7多肽特异性)CD4 T细胞,同时以脐带血作为研究对照。结果肺结核患者外周血多肽特异性CD4T细胞的比例明显高于脐带血(p0.05);多数病例的外周血e7多肽特异性CD4 T细胞在治疗后均有降低趋势。结论多肽/HLA-DR四聚体对于结核病的检测具有一定的意义,可以用于监测治疗前后结核患者外周血多肽特异性CD4 T细胞的变化。

关键词：结核 e7多肽 HLA-DR 四聚体 CD4+ T细胞

来源： cnki会议评论

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中华临床医师杂志(电子版) 2013年第23期7卷 10704-10708页

作者：王楠黄利荣方毅敏李研赖小敏中山大学中山医学院微生物学教研室热带病防治研究教育部重点实验室海洋微生物功能分子广东省高校重点实验室广东省重大传染病预防和控制技术中心广州市胸科医院结核内科

目的应用流式细胞检测技术,探讨不同e7/HLA-DRB四聚体检测结核患者外周血及胸水标本中e7多肽特异性CD4+T细胞百分率之间的差异。方法复苏培养能稳定表达e7/HLA-DRB1*090102、e7/HLA-DRB1*130201、e7/HLA-DRB1*150101和e7/HLA-DRB1*130201的果蝇S2细胞株,表达、纯化、制备成相应四聚体。以37例脐带血作为研究对照组,150例肺结核患者外周血和23例结核性胸膜炎患者胸水标本为实验研究组,Ficoll法分离单个核细胞,用Pe-e7/HLA-DRB四聚体和鼠抗人CD4-FTIC共染细胞,流式细胞分析检测标本中e7多肽特异性CD4+T细胞百分率,并作统计学分析。结果结核患者外周血和胸水中,各四聚体e7多肽特异性CD4+T细胞百分率检测结果均显著高于脐带血标本相应四聚体检测结果;胸水标本与血标本各自做4种四聚体任意2种四聚体检测结果间比较,结果显示均无统计学差异。此外,在外周血和胸水标本间,任一四聚体的检测结果也无统计学差异。结论不同HLA-DRB来源的e7/HLA-DRB四聚体对于结核检测具有相当的意义,4种四聚体的结核检测特异性无明显差异。并未发现因CD4+T细胞迁移到局部病灶而引发的胸水标本检测结果高于相应四聚体外周血检测结果。

关键词：结核 e7多肽 HLA-DRB CD4+T细胞四聚体

e7修饰表面与微载体的构建及其骨髓间充质干细胞体外扩增和干性维持性能研究

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E7修饰表面与微载体的构建及其骨髓间充质干细胞体外扩增和干性维...

作者：葛群姿浙江大学

学位级别：硕士

间充质干细胞(MSCs)具有自我更新、多向分化能力和低免疫原性等优点,是组织工程和再生医学领域的重要种子细胞,其体外高效、安全扩增是实现其应用的前提和基础。现阶段,干细胞体外扩增面临的主要问题在于,多次传代培养易导致细胞衰老并... 详细信息

间充质干细胞(MSCs)具有自我更新、多向分化能力和低免疫原性等优点,是组织工程和再生医学领域的重要种子细胞,其体外高效、安全扩增是实现其应用的前提和基础。现阶段,干细胞体外扩增面临的主要问题在于,多次传代培养易导致细胞衰老并逐渐丧失多向分化能力,即丢失干性。在MSCs扩增数量和质量的双重要求中,干性作为扩增质控的核心指标,已经引起了广泛的关注。研究人员发现材料的机械模量、表面拓扑形貌、化学修饰(电荷、基团、黏附因子)等诸多因素均会对干细胞干性造成影响。尽管对干性的内在调控机制仍存有争议,文献已证实细胞铺展面积、长径比、几何形状等黏附行为与干细胞干性之间存在一定的联系。而常用于调节细胞黏附行为的粘连蛋白、RGD等黏附因子不仅缺乏细胞特异性,还存在诱导MSCs提前分化的风险。在此基础上,本文筛选了一种对骨髓间充质干细胞(BMSCs)具有特异性亲和能力的多肽ePLQLKM(e7),并引入聚乙二醇(PeG)作为连接分子,其非特异性阻粘性可以有效地避免培养基中血清蛋白等异种蛋白的吸附带来的免疫与致病隐患。通过巯基和马来酰亚胺的点击反应,将e7密度可控地接枝到经PeG预修饰的玻璃基底上,探索e7修饰基底对BMSCs黏附行为与维持干性性能的影响。X射线光电子能谱和椭圆偏振光谱仪结果证实PeG和e7的有效接枝。酸性橙测试表明e7的实际接枝密度随着反应浓度的增加而提高。细胞粘附实验发现,e7修饰可以提高BMSCs的黏附率与铺展面积,有效地改善细胞在表面的黏附性能。逆转录-聚合酶链式反应、免疫荧光染色、增殖能力、三向诱导分化测试的综合结果表明,随着e7接枝密度的增加,BMSCs干性得到更好的保持。在具有最高接枝密度的e7修饰基底上,扩增7天后的细胞表现出高水平的干性相关标志物表达、优良的增殖能力和成脂、成骨、成软骨三向分化能力。基于建立的e7可控修饰技术和探明的e7对BMSCs干性的促进作用,本文进一步设计并构建了一种新型的e7修饰明胶微载体,以满足扩增数量和质量的双重要求。通过调节乳化过程中的明胶浓度、搅拌速度、乳化剂加入量等因素,针对BMSCs制备了具有合适粒径分布的明胶微球。然后,通过点击反应依次修饰PeG和e7,构建具有合适密度的e7修饰明胶微载体。扫描电子显微镜表明e7修饰明胶微载体球型完整,表面光滑。联合能量弥散X射线探测器证实PeG和e7的有效接枝。茚三酮测试进一步证实e7的实际接枝量随着反应浓度的增加而提高。细胞粘附与增殖实验结果表明,e7可以改善细胞粘附,并提高扩增数量。综合免疫荧光染色、凋亡测试、三向诱导分化的实验结果,发现在具有最高e7接枝密度的明胶微载体上,BMSCs表现出高水平的干性标志物、低细胞凋亡率和强大的三向分化能力。因此,本文设计并构建的e7修饰明胶微载体可以有效地提高BMSCs的扩增效率,切实提高扩增的细胞数量和质量。这一新型扩增微载体有望应用到BMSCs的体外规模化扩增中,改善BMSCs作为种子细胞在组织修复和再生医疗的临床表现。

关键词： e7多肽间充质干细胞体外扩增黏附干性维持

肺结核患者治疗期外周血及病理切片多肽特异性CD4^+T细胞的检测

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热带医学杂志 2012年第5期12卷 518-522,F0004页

作者：黄利荣李研方毅敏任亮亮朱艳赖小敏中山大学中山医学院微生物学教研室热带病防治研究教育部重点实验室海洋微生物功能分子广东省高校重点实验室广东省重大传染病预防和控制技术研究中心广东广州510080 广州市胸科医院广东广州510095

目的应用四聚体技术研究肺结核患者治疗前后各时间点外周血中e7多肽特异性CD4+T细胞的变化及结核患者肺组织切片中特异性CD4+T细胞的分布。方法培养能稳定分泌表达e7/HLA-DRB1*0404和e7/HLA-DRB1*1602的果蝇S2细胞株,表达纯化获得2种蛋... 详细信息

目的应用四聚体技术研究肺结核患者治疗前后各时间点外周血中e7多肽特异性CD4+T细胞的变化及结核患者肺组织切片中特异性CD4+T细胞的分布。方法培养能稳定分泌表达e7/HLA-DRB1*0404和e7/HLA-DRB1*1602的果蝇S2细胞株,表达纯化获得2种蛋白质单体,并制备成Pe标记的相应四聚体,流式细胞分析检测肺结核患者外周血中特异性CD4+T细胞。制备FITC标记的四聚体,对肺结核患者的肺组织切片进行原位染色,观察特异性CD4+T细胞的分布。结果肺结核患者治疗前组及治疗1～60 d组分别与治疗61 d后各组及脐带血组之间的四聚体阳性多肽特异性CD4+T细胞差异均有统计学意义(P0.05)。在肺结核患者的肺组织切片中可观察到特异性CD4+T细胞。结论制备的2种e7/HLA-DR四聚体对于结核病的检测具有一定的意义,可以用于检测研究肺结核患者治疗前后外周血e7多肽特异性CD4+T细胞的变化及肺结核患者局部病理组织中特异性CD4+T细胞的分布。

关键词：结核 e7多肽 HLA-DR 四聚体 CD4+T细胞

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