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e2f-1 overexpression inhibits human gastric cancer MGC-803 cell growth in vivo

World Journal of Gastroenterology 2015年第2期21卷 491-501页

作者： Wei-Yuan Wei Lin-Hai Yan Xiao-Tong Wang Lei Li Wen-Long Cao Xiao-Shi Zhang Ze-Xu Zhan Han Yu Yu-Bo Xie Qiang Xiao Department of Surgery The First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University Department of Surgery People’s Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region Department of Anaesthesiology The First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University

AIM: To evaluate the influence of e2f-1 on the growth of human gastric cancer(GC) cells in vivo and the mechanism involved. MeTHODS: e2f-1 recombinant lentiviral vectors were injected into xenograft tumors of MGC-803 cells in nude mice, and then tumor growth was investigated. Overexpression of transcription factor e2f-1 was assessed by reverse transcription-polymerase chain reaction(RT-PCR) and Western blotting analysis. Apoptosis rates were determined using a terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated d UTP-biotin nick end labeling(TUNeL) assay. expression levels of certain cell cycle regulators and apoptosis-related proteins, such as Bax, survivin, Bcl-2, cyclin D1, S-phase kinaseassociated protein 2, and c-Myc were examined by Western blotting and RT-PCR. ReSULTS: Xenograft tumors of MGC-803 cells in nude mice injected with e2f-1 recombinant lentiviral vectors stably overexpressed the e2f-1 gene as measured by semi-quantitative RT-PCR(relative m RNA expression: 0.10 ± 0.02 vs 0.05 ± 0.02 for control vector and 0.06 ± 0.03 for no infection; both P 1) and Western blotting(relative protein expression: 1.90 ± 0.05 vs 1.10 ± 0.03 in control vector infected and 1.11 ± 0.02 for no infection; both P 1). The growth-curve of tumor volumes revealed that infection with e2f-1 recombinant lentiviral vectors significantly inhibited the growth of human GC xenografts(2.81 ± 1.02 vs 6.18 ± 1.15 in control vector infected and 5.87 ± 1.23 with no infection; both P 15 d after treatment. TUNeL analysis demonstrated that e2f-1 overexpression promoted tumor cell apoptosis(18.6% ± 2.3% vs 6.7% ± 1.2% in control vector infected 6.3% ± 1.2% for no infection; both P furthermore, lentiviral vector-mediated e2f-1 overexpression increased theexpression of Bax and suppressed survivin, Bcl-2, cyclin D1, Skp2, and c-Myc expression in tumor ***: e2f-1 inhibits growth of GC cells via regulating multiple signaling pathways, and may play an important ro

关键词： e2f-1 Gastric cancer Lentiviral vector Mouse model

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e2f-1基因沉默可增强人胃癌耐药细胞株SGC-7901/DDP对顺铂的敏感性

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南方医科大学学报 2013年第12期33卷 1727-1732页

作者：廉超杨杰王晓通谢玉波肖强广西医科大学第一附属医院胃肠腺体外科广西南宁530021 广西医科大学第一附属医院麻醉科广西南宁530021

目的探讨e2f转录因子1(e2f transcription factor 1,e2f-1)基因沉默对人胃癌耐药细胞株SGC-7901/DDP对顺铂敏感性的影响及可能机制。方法将SGC-7901/DDP细胞接种于六孔板,分为3组:以e2f-1沉默重组慢病毒颗粒(Lv-shRNA-e2f-1)感染SGC-7901/DDP,作为Lv-shRNA-e2f-1组;以阴性对照慢病毒颗粒(Lv-shRNA-NC)感染SGC-7901/DDP,作为Lv-shRNANC组;空白对照组不做任何处理。以MTT法测定转染后各组细胞对DDP的半数抑制浓度(IC50),并以AxnnexinV-Pe/7-AAD双染色流式细胞术检测各组细胞凋亡率及周期分布。应用Western blot和半定量RT-PCR技术分别对各组细胞中e2f-1、survivin、Bcl-2的mRNA及蛋白水平进行检测。结果与Lv-shRNA-NC组和空白对照组相比,Lv-shRNA-e2f-1组细胞对顺铂的IC50显著降低,细胞凋亡率显著提高,细胞周期阻滞于G0/G1期,差别均有统计学意义(Pe2f-1组e2f-1mRNA水平较Lv-shRNA-NC组和空白对照组分别下降45.0%和41.3%,蛋白水平分别下降66.7%和70.5%(均P1);LvshRNA-e2f-1组survivin mRNA水平较Lv-shRNA-NC组和空白对照组分别下降30.3%和28.7%,蛋白水平分别下降56.5%和53.6%(均P1);Lv-shRNA-e2f-1组Bcl-2 mRNA水平较Lv-shRNA-NC组和空白对照组分别下降76.6%和76.8%,蛋白水平分别下降74.6%和79.9%(均P1);Lv-shRNA-NC组与空白对照组比较,上述指标差别均无统计学意义(均P>0.05)。结论:沉默e2f-1基因可有效提高人胃癌耐药细胞株SGC-7901/DDP对顺铂的敏感性,其机制可能与survivin及Bcl-2表达下调有关,提示e2f-1可能成为胃癌药物治疗的新靶点。

关键词： e2f-1 胃癌 cisplatin 化疗敏感性 survivin Bcl-2

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e2f-1基因过表达影响胃癌MGC-803细胞对化疗药物敏感性的研究

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中国肿瘤临床 2009年第16期36卷 945-947,956页

作者：钱倩王长青李雷谢玉波肖强广西医科大学第一附属医院胃肠腺体外科南宁市530021 广西医科大学第一附属医院麻醉科南宁市530021

目的:构建e2f-1真核表达载体,建立稳定过表达e2f-l的胃癌细胞株,探讨e2f-l基因过表达对胃癌MCC-803细胞化疗敏感性的影响方法:应用Tri zol法从胃癌的癌组织中提取mRNA逆转录合成cDNA,按Gene-Bank公布的e2f-1基因序列设计带有酶切位点的... 详细信息

目的:构建e2f-1真核表达载体,建立稳定过表达e2f-l的胃癌细胞株,探讨e2f-l基因过表达对胃癌MCC-803细胞化疗敏感性的影响方法:应用Tri zol法从胃癌的癌组织中提取mRNA逆转录合成cDNA,按Gene-Bank公布的e2f-1基因序列设计带有酶切位点的引物并行扩增获得e2f-1的ORf片段;然后经限制性内切酶ecoR l和Hind Ⅲ双酶切后将e2f-1定向克隆到真核表达载体pCMV-HA2中转化筛选用脂质体Lipofectamine2000将该载体转染MGC-803胃癌细胞,然后用含G418的培养基筛选获得具Genectin抗性的过表达e2f-1的胃癌细胞株实时定量PCR( real-time quantitative PCR)和蛋白印迹(Western blotting)技术检测MGC-803/e2f-1细胞内e2f-1表达情况四唑蓝(MTT)法检测MGC-803/e2 f-1组(实验组)、MGC-803/eV组(阴性对照组)和MCC-803组(未转染组)细胞对化疗药物的敏感性结果:重组载体pCMV-e2f-1-HA2经ecoR I和Hind Ⅲ双酶切后得到预期片段,测序结果与报道的e2f-1基因之0Rf完全一致,证明目的基因已成功克隆入真核表达载体,获取具Genectin抗性的细胞克隆、并进行了扩增。RT-PCR和Western blotting实验证实重组载体pCMV-e2f-l-HA2成功转入胃癌细胞内,并稳定过表达e2f-1 MTT法检测发现,5-氟尿嘧啶(5-fL)、阿霉素(ADM)、丝裂霉素(MMC)对MGC-803/e2f、-1组细胞的抑制率分别为71.45%、74.03%、76.72%,均明显高于MGC-803/eV组(45.58%、53.69%、54.58%)和MGC-803组(53.70%、54.67%、55.05%) (Pe2f-1-HA2,并建立了稳定过表达e2f-1的胃癌细胞株MGC-803/e2f-1。e2f-1过表达增强了胃癌细胞对化疗药物的敏感性。

关键词： e2f-1 转染 MGC-803胃癌细胞药敏试验

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e2f-1基因真核表达载体的构建及其对胃癌细胞株MKN-45增殖的影响

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癌症 2007年第10期26卷 1064-1068页

作者：王长青肖强李雷谢玉波谭宁宫志伟广西医科大学第一附属医院胃肠腺体外科广西南宁530027 广西医科大学第一附属医院麻醉科广西南宁530027

背景与目的:e2f-1基因在多种肿瘤细胞中过表达,并表现出抑制或促进肿瘤细胞增殖的不同特性。本研究通过构建e2f-1基因真核表达载体,分析e2f-1过表达对胃腺癌细胞株MKN-45的影响。方法:巢式聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)... 详细信息

背景与目的:e2f-1基因在多种肿瘤细胞中过表达,并表现出抑制或促进肿瘤细胞增殖的不同特性。本研究通过构建e2f-1基因真核表达载体,分析e2f-1过表达对胃腺癌细胞株MKN-45的影响。方法:巢式聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增e2f-1基因片段,用pCMV-HA载体构建真核重组质粒,转染MKN-45细胞(转染COS-7细胞用以鉴定所构建的载体)。Western blot检测转染情况,并通过克隆形成实验、MTS法检测细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期,观察e2f-1过表达对MKN-45细胞的影响。结果:pCMV-e2f1-HA重组质粒成功转染MKN-45细胞。转染pCMV-e2f1-HA的MKN-45细胞形成的克隆数为4.7±1.8,明显少于转染空载体组的30.2±6.7(Pe2f1-HA的MKN-45细胞增殖随时间而减慢,第5、6、7天的细胞增殖率分别为73.5%、63.5%和56.1%,明显低于转染空载体组(Pe2f-1基因的MKN-45细胞在G0/G1期所占比例明显提高(71.4%vs.59.7%,Pe2f-1基因真核表达载体,e2f-1过表达可抑制MKN-45细胞的增殖。

关键词：胃肿瘤 MKN-45细胞 e2f-1 转染增殖

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e2f-1过表达对胃癌细胞凋亡及相关基因表达的影响

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癌症 2009年第11期28卷 1176-1180页

作者：严林海李雷谢玉波肖强王长青广西医科大学第一附属医院胃肠腺体外科广西南宁530021 广西医科大学第一附属医院麻醉科广西南宁530021

背景与目的:e2f-1(e2f transcription factor1)基因是细胞周期的重要转录因子,也参与了细胞凋亡的过程,但机制尚不明确。本研究通过观察e2f-1过表达对胃癌细胞MGC-803凋亡的影响及对下游基因的调控,初步探讨其参与凋亡的分子机理。方法... 详细信息

背景与目的:e2f-1(e2f transcription factor1)基因是细胞周期的重要转录因子,也参与了细胞凋亡的过程,但机制尚不明确。本研究通过观察e2f-1过表达对胃癌细胞MGC-803凋亡的影响及对下游基因的调控,初步探讨其参与凋亡的分子机理。方法:用流式细胞仪检测稳定转染e2f-1的胃癌MGC-803/e2f-1细胞(实验组)、转染空载体的MGC-803/eV(阴性对照组)及未转染的MGC-803细胞的凋亡情况。再分别抽取MGC-803/e2f-1和MGC-803细胞的总RNA,采用逆转录的方法,制成cDNA,并以两种荧光Cy5和Cy3标记后作为探针(荧光交换芯片),与含有21522条人类基因表达谱芯片进行杂交。采用LuxScan10K/A双通道激光扫描仪扫描芯片上两种荧光信号,应用LuxScan3.0图像分析软件对芯片图像进行处理和分析与凋亡相关的基因的表达,再用RT-PCR针对性的对筛选得到的基因进行验证。结果:MGC-803/e2f-1组细胞的凋亡率明显高于MGC-803/eV组和MGC-803组,3组凋亡率分别为(8.40±0.91)%、(4.53±0.61)%、(4.97±0.47)%;基因芯片扫描筛选出与凋亡相关的差异表达基因15条,其中上调基因4条,下调基因11条;RT-PCR验证多条相关基因其上、下调趋势同基因芯片结果一致。结论:e2f-1基因过表达促进了胃癌MGC-803细胞的凋亡,其影响机制可能与这15条差异表达基因有关系。

关键词：胃肿瘤 e2f-1 基因表达谱芯片差异表达基因凋亡

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e2f-1基因过表达对胃癌细胞动力学影响机制

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世界华人消化杂志 2009年第11期17卷 1069-1073页

作者：王连振李雷王长青解乃昌肖强谢玉波广西医科大学第一附属医院胃肠腺体外科广西壮族自治区南宁市530021 广西医科大学第一附属医院麻醉科广西壮族自治区南宁市530021

目的:了解e2f-1过表达对胃癌细胞MGC-803增殖、生长和细胞周期的影响,并探讨e2f-1对胃癌细胞动力学影响的分子机制.方法:对稳定转染e2f-1的胃癌MGC-803/e2f-1细胞(实验组)、转染空载体的MGC-803/eV(阴性对照组)及未转染的MGC-803细胞进... 详细信息

目的:了解e2f-1过表达对胃癌细胞MGC-803增殖、生长和细胞周期的影响,并探讨e2f-1对胃癌细胞动力学影响的分子机制.方法:对稳定转染e2f-1的胃癌MGC-803/e2f-1细胞(实验组)、转染空载体的MGC-803/eV(阴性对照组)及未转染的MGC-803细胞进行MTT法检测,绘制生长曲线和计算细胞增殖率;流式细胞仪检测各组细胞周期分布.提取各组细胞的总RNA,逆转录成cDNA,用荧光探针与含有21522条人类基因表达谱芯片进行杂交.采用LuxScan10K/A双通道激光扫描仪扫描芯片上两种荧光信号,应用LuxScan3.0图像分析软件对芯片图像进行处理和分析.结果:与两个对照组相比,胃癌MGC-803/e2f-1细胞的生长受到明显抑制,增殖率下降(26.61%±5.19%vs93.4%±10.29%,100%±0.00%,均P1期.在检测的21522条基因中,与细胞增殖、生长和细胞周期相关的差异性表达基因有20条,上调基因9条,下调基因11条.结论:e2f-1基因过表达抑制胃癌细胞的增殖和生长,细胞周期停滞在G0/G1期,其分子机制可能与筛选出来的20条差异表达基因有直接的关系.

关键词：胃癌 e2f-1 基因表达谱芯片差异表达基因

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e2f-1及其相关分子在食管癌中的作用

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中华实验外科杂志 2014年第8期31卷 1845-1846页

作者：申潞艳陈克能北京大学肿瘤医院暨恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室胸外一科 100142

e2f家族由8个e2f基因（e2f-1 -8）及3个DP基因（DP1、DP2/3、DP4）组成.e2fs基因根据其保守序列和转录活性的不同分为不同亚组.e2fs家族成员既是转录激活因子同时也可作为转录抑制因子,以往研究报道e2f-1-3可转录激活与细胞周期进程及... 详细信息

e2f家族由8个e2f基因（e2f-1 -8）及3个DP基因（DP1、DP2/3、DP4）组成.e2fs基因根据其保守序列和转录活性的不同分为不同亚组.e2fs家族成员既是转录激活因子同时也可作为转录抑制因子,以往研究报道e2f-1-3可转录激活与细胞周期进程及核苷酸合成相关的基因,如细胞分裂周期蛋白6（CDC6）、细胞周期素（Cyclin）e和二氢叶酸还原酶;e2f-4 -6可抑制其他e2f基因的表达.然而,近年来研究表明e2f基因究竟发挥转录激活还是转录抑制的作用,取决于细胞所处的环境以及下游靶基因.

关键词： e2f-1 相关分子食管癌转录激活因子转录抑制因子细胞周期进程二氢叶酸还原酶家族成员

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云南个旧及宣威地区肺癌p14^ARf和e2f-1水平的改变

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中华劳动卫生职业病杂志 2009年第7期27卷 411-415页

作者：杨志鸿阮永华金克炜高倩张林云南医学高等专科学校病理教研室昆明650031 昆明医学院病理教研室昆明医学院第一附属医院病理科

目的探讨阅读框架基因p14^ARf和核转录因子e2f-1在云南个旧地区矿工肺癌，宣威地区农民肺癌组织中的表达及相互关系，寻找肺癌早期诊断特异性标记物及为治疗提供实验依据。方法采用免疫组化S-P法，检测30例个旧地区矿工肺癌和30例宣威... 详细信息

目的探讨阅读框架基因p14^ARf和核转录因子e2f-1在云南个旧地区矿工肺癌，宣威地区农民肺癌组织中的表达及相互关系，寻找肺癌早期诊断特异性标记物及为治疗提供实验依据。方法采用免疫组化S-P法，检测30例个旧地区矿工肺癌和30例宣威地区农民肺癌及20例正常肺组织中p14^ARf和e2f-1蛋白的表达；采用原位分子杂交方法随机检测上述标本中25例个旧地区矿工肺癌、25例宣威地区肺癌及10例正常肺组织中e2f—1mRNA的表达。两种检测结果应用HPIAS-100计算机图文分析系统进行定量分析。结果个旧和宣威地区肺癌组织的p14^ARf蛋白表达明显低于正常肺组织，而e2f-1蛋白表达和mRNA表达均明显高于正常肺组织。p14^ARf和e2f-1蛋白表达的阳性单位在个旧肺癌组为16．44±4．85和47．39±5．43，宣威肺癌组为16．79±3．55和48．15±9．11，与正常肺组织组比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。个旧肺癌组e2f-1mRNA表达的阳性单位为48．58±7．75，宣威肺癌组为49．41±8．53，明显高于正常肺组织组，差异有统计学意义（P〈0．01）。在个旧、宣威肺癌组和正常肺组织组中，e2f—1mRNA和e2f-1蛋白表达的阳性单位呈正相关（r=0．833，P〈0．01），p14^ARf和e2f-1蛋白表达的阳性单位呈负相关（r=-0．830，P〈0．01）。结论个旧和宣威两地区肺癌组织中存在e2f-1基因的表达上调和p14^ARf基因的表达下调。

关键词：肺肿瘤 p14^ARf 转录因子 e2f-1 个旧宣威

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e2f-1在胃癌组织中的突变、表达及其意义

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中国肿瘤临床 2007年第4期34卷 238-239页

作者：肖强徐君毅谢玉波广西医科大学附属第一医院胃肠腺体外科南宁市530021 广西医科大学附属第四医院外科广西医科大学附属第一医院麻醉科

e2f-1是细胞周期相关性转录因子e2f家族八个成员之一，在细胞周期进展过程中具有重要的调节作用。有文献报道e2f-1在转基因动物的角质形成细胞中可引起成纤维母细胞转化为肿瘤细胞,林福地等。发现随着肺癌分期的提高e2f-1表达也增高。... 详细信息

e2f-1是细胞周期相关性转录因子e2f家族八个成员之一，在细胞周期进展过程中具有重要的调节作用。有文献报道e2f-1在转基因动物的角质形成细胞中可引起成纤维母细胞转化为肿瘤细胞,林福地等。发现随着肺癌分期的提高e2f-1表达也增高。本实验采用PCR-SSCP和免疫组织化学法，观察e2f-1在胃癌中的基因突变、表达情况，分析e2f-1在胃癌发生发展中的可能作用。

关键词： e2f-1 PCR-SSCP 免疫组化胃癌

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人成釉细胞瘤中pRb和e2f-1表达与端粒酶活性的关系

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中华口腔医学杂志 2004年第5期39卷 406-409页

作者：钟鸣王洁张波侯琳岳阳丽李自娟中国医科大学口腔医学病理科沈阳110002 北京大学医学部病理系

目的　研究 pRb、e2f 1和细胞周期素e(cycline)在人成釉细胞瘤 (ameloblastoma,AB)中的表达及其与端粒酶 (hTeRT)的关系 ,探讨其临床生物学意义。方法　用原位杂交和免疫组化SP法分别检测了AB中 pRb、e2f 1、cycline及hTeRTmRNA的表达... 详细信息

目的　研究 pRb、e2f 1和细胞周期素e(cycline)在人成釉细胞瘤 (ameloblastoma,AB)中的表达及其与端粒酶 (hTeRT)的关系 ,探讨其临床生物学意义。方法　用原位杂交和免疫组化SP法分别检测了AB中 pRb、e2f 1、cycline及hTeRTmRNA的表达。结果　pRb在AB细胞核中阳性率为2 0 4 % ( 11/ 5 4 )。e2f 1mRNA阳性率为 92 6 % ( 5 0 / 5 4 )。cyclinemRNA阳性率为 6 6 7% ( 36 / 5 4 )。hTeRTmRNA阳性率为 94 4 % ( 5 1/ 5 4 )。伴随AB的复发与恶变 ,hTeRT、e2f 1、cycline的表达逐渐增高 ,pRb表达丢失。hTeRT与e2f 1、cyclinemRNA之间经Spearman相关分析 ,rs 均为 1 0 0 0 ,P =0 0 0 0 1,呈高度正相关。结论　pRb/e2f 1与AB细胞的增殖、去分化相关 ,端粒酶活性的释放激活与pRb的低表达及e2f 1的高表达可能相关。

关键词：成釉细胞瘤 pRb e2f-1 端粒酶活性细胞周期素e

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