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共表达猪瘟病毒e2基因和猪白细胞介素2基因的重组腺病毒的构建及其免疫原性研究

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病毒学报 2010年第5期26卷 385-391页

作者：何雷张彦明徐彦召唐青海王静杨小云代晨向华常鹏祥林鸷西北农林科技大学动物医学院杨凌712100

为研制猪瘟活载体疫苗,构建共表达猪瘟病毒e2基因和猪白细胞介素2基因的重组腺病毒并研究其免疫原性。应用PCR方法从pMD19-T-e2质粒和pMD19-T-pIL2质粒中分别扩增e2基因和pIL-2基因,将扩增的全长e2基因和pIL-2的编码区基因序列通过柔性... 详细信息

为研制猪瘟活载体疫苗,构建共表达猪瘟病毒e2基因和猪白细胞介素2基因的重组腺病毒并研究其免疫原性。应用PCR方法从pMD19-T-e2质粒和pMD19-T-pIL2质粒中分别扩增e2基因和pIL-2基因,将扩增的全长e2基因和pIL-2的编码区基因序列通过柔性接头序列(5个甘氨酸密码子)串联,插入腺病毒穿梭载体AdTrack中,在受体菌中与骨架载体Adeasy同源重组。重组质粒Adeasy-e2-pIL-2转染HeK293细胞,包装出重组腺病毒rAd-e2-pIL-2。用rAd-e2-pIL-2免疫家兔,经兔体交互免疫试验评定其免疫效果。结果显示,经RT-PCR和West-ern blot检测,成功构建了rAd-e2-pIL-2,重组病毒滴度达108.12PFU/mL。rAd-e2-pIL-2接种家兔后刺激接种兔产生猪瘟病毒特异性抗体,淋巴细胞转化试验结果显示猪瘟病毒诱导兔淋巴细胞特异性增殖,攻毒后rAd-e2-pIL-2接种兔和猪瘟病毒C株接种兔均未出现定型热反应。研究结果表明,rAd-e2-pIL-2免疫兔可以预防猪瘟病毒C株接种引发的体温反应,rAd-e2-pIL-2可望成为猪瘟候选疫苗。

关键词：猪瘟病毒 e2基因猪白细胞介素2 重组腺病毒细胞因子佐剂

12株猪瘟病毒e2基因主要抗原区域的序列差异分析

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微生物学报 2000年第6期40卷 614-621页

作者：王琴王在时赵耘李博丘惠深中国兽药监察所北京100081

用RT PCR扩增了 1 2个不同时期分离的HCV毒株e2基因主要抗原区域的cDNA片段并对其进行了序列测定。应用DNAstar序列分析软件对所测的 1 2个HCV毒株与国内外已知的 6个毒株Alfort株、Ald株、Brescia株、Gpe株、C株、CW株及早期已测定的H... 详细信息

用RT PCR扩增了 1 2个不同时期分离的HCV毒株e2基因主要抗原区域的cDNA片段并对其进行了序列测定。应用DNAstar序列分析软件对所测的 1 2个HCV毒株与国内外已知的 6个毒株Alfort株、Ald株、Brescia株、Gpe株、C株、CW株及早期已测定的HCLV株、HCVSM株和北京顺义株 (BJSY2 /96) 3个毒株的相应片段进行了同源性比较分析。e2基因主要区域长度均为 2 2 4bp ,包括从HCV 2 4 85到 2 70 8位的e2基因B、C区域。所测的疫苗株HCLV与国外测得的疫苗株C株核苷酸及氨基酸同源性分别为 99 1 %和 1 0 0 % ,表明目前应用的疫苗株是稳定的 ;用目前我国流行的部分野毒株对HCLV株免疫猪的攻击试验表明 ,HCLV对野毒株均具有很好的免疫力 ,这与序列分析结果相吻合。根据系统树分析 ,可将HCV分为两大群 ,5株 90年代的野毒株及 1株 80年代的野毒株 (其中北京 3株、河南 2株、广东 1株 )均与国内外C株、标准株属同一群 (即第一群 ) ,其核苷酸及氨基酸的同源性分别为85 7%～ 1 0 0 %和 83 8%～ 1 0 0 % ;与Alfort株同属第二群的有 6个野毒株 (广西北海、辽宁、河北黄骅、吉林、深圳光明、四川成都 ) ,其中 80年代与 90年代的野毒株各有三株 ,核苷酸及氨基酸的同源性分别为 84 3%～ 1 0 0 %和 85 1 %～ 1 0 0 % ;2 1株HCV的核苷酸?

关键词：猪瘟病毒 e2基因序列分析

猪瘟病毒e2基因在Pichia pastoris中的表达及其免疫活性的初步研究

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生物工程学报 2002年第2期18卷 208-211页

作者：韩雪清刘湘涛张涌谢庆阁田波中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒病重点实验室兰州730046 西北农林科技大学杨凌712100 中国科学院微生物研究所北京100080

将猪瘟病毒的e2基因克隆入酵母分泌型表达载体pPIC9K中 ,酶切线性化后电穿孔导入Pichiapastoris进行整合 ,经G418筛选得到高拷贝转化子 ,甲醇诱导表达。SDS PAGe和Westernblot结果证实了酵母培养上清液中含有e2蛋白。免疫活性研究证明P .

关键词：猪瘟病毒 e2基因毕赤酵母表达免疫活性

宫颈病变患者人乳头瘤病毒16亚型e2基因多态性检测

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南方医科大学学报 2012年第10期32卷 1503-1506页

作者：邱峰袁丽娜黄宪章广东省中医院检验科广东广州510120 广东省中医院病理科广东广州510120

目的分析宫颈病变中人乳头瘤病毒（HPV）16亚型e2基因的多态与宫颈病变的关系,了解e2基因变异情况及其与宫颈病变的相关性。方法应用PCR和高分辨率熔解曲线方法针对379例HPV高危亚型阳性宫颈脱落细胞样本进行HPV16感染情况及HPV16亚型e... 详细信息

目的分析宫颈病变中人乳头瘤病毒（HPV）16亚型e2基因的多态与宫颈病变的关系,了解e2基因变异情况及其与宫颈病变的相关性。方法应用PCR和高分辨率熔解曲线方法针对379例HPV高危亚型阳性宫颈脱落细胞样本进行HPV16感染情况及HPV16亚型e2基因68位点和133位点多态分布情况进行检测。结果 379例HPV高危亚型阳性宫颈标本共检出78例HPV 16亚型阳性,其在宫颈癌、CINⅡ-Ⅲ、CINⅠ、炎症患者中的检出率分别为44.8%、31.5%、24.1%和9.6%;HPV16 e2基因68C和133G的频率在中重度宫颈内瘤样病变和宫颈癌中明显高于轻度上皮内瘤样病变和炎症患者（P〈0.05）。结论 HPV16是导致宫颈恶性病变的重要致病因素;随着病理类型的进展,HPV16感染率也逐渐增加;同时基因位点改变说明HPV 16 e2基因单核苷酸变异可能使致癌能力发生改变。

关键词：宫颈癌宫颈内瘤样病变人乳头瘤病毒 e2基因多态性

猪瘟病毒e2基因的定点突变、在大肠杆菌中的高效表达及表达产物的免疫原性

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生物工程学报 2003年第4期19卷 439-443页

作者：余兴龙涂长春徐兴然张茂林陈义祥刘伯华解放军军需大学军事兽医研究所长春130062

用重组PCR技术对猪瘟病毒石门株e2基因进行了定点突变 ,然后将突变后的基因克隆至表达载体质粒peT 2 8a(+ )中 ,构建成重组质粒peTe2。将peTe2转入受体菌BL2 1(De3 )plysS中 ,在IPTG的诱导下 ,重组转化菌可高效表达目的基因 ,表达量平... 详细信息

用重组PCR技术对猪瘟病毒石门株e2基因进行了定点突变 ,然后将突变后的基因克隆至表达载体质粒peT 2 8a(+ )中 ,构建成重组质粒peTe2。将peTe2转入受体菌BL2 1(De3 )plysS中 ,在IPTG的诱导下 ,重组转化菌可高效表达目的基因 ,表达量平均可达菌体蛋白总量的 2 8%。免疫印迹和间接eLISA表明所表达的蛋白是CSFV特异性的。

关键词：猪瘟病毒 e2基因定点突变大肠杆菌表达产物免疫原性

牛病毒性腹泻病毒e2基因优化表达重组卡介苗的免疫试验

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中国兽医科学 2014年第2期44卷 176-181页

作者：曾范利张云张梦时坤李建明郝俊伟孙凡婷杜锐吉林农业大学中药材学院吉林长春130118 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 长春金赛药业有限责任公司吉林长春130012 吉林农业大学研究生学院教育部动物生产及产品质量安全重点实验室/吉林省药用动物二级实验室吉林长春130118

为评价牛病毒性腹泻病毒(BVDV)e2基因优化表达重组卡介苗(rBCG)对小鼠的免疫效果,分别用已构建的pMV361-e2-1、pMV361-e2-2、pMV361-e2-3、pMV361-e2-4、pMV361-e2-5、pMV361-e2-6重组卡介苗,pMV361空载体,卡介苗,BVDV灭活疫苗和生理盐水对小鼠进行免疫接种,检测各免疫组血清中特异性抗体效价、T淋巴细胞增殖程度和CD4+、CD8+和IL-12的水平,以评价其免疫效果。结果显示,6组重组卡介苗均能够引起小鼠产生BVDV特异性抗体,促进致敏T淋巴细胞增殖,免疫小鼠血清CD4+、CD8+和IL-12的水平均高于对照组,pMV361-e2-1重组卡介苗在诱导小鼠产生BVDV抗体方面要优于其他各组基因重组卡介苗。结果表明,BVDV e2基因不同片段的重组卡介苗均可诱导免疫小鼠产生特异性的体液免疫和细胞免疫,这为BVDV基因工程疫苗的研制奠定了基础。

关键词：牛病毒性腹泻病毒 e2基因重组卡介苗免疫

22株猪瘟病毒e2基因部分编码序列的序列分析

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微生物学通报 2001年第5期28卷 42-48页

作者：赵耘王在时王琴李博丘惠深中国兽药监察所北京100081

利用RT PCR方法获得了 1 3株猪瘟病毒分离株、石门系强毒、中国C株及法国温度敏感株Thiverval株的e2基因部分编码序列的扩增片段 ,并对其进行了测序 ,得到了 2 5 1bp的e2基因部分编码序列。利用DNAStar软件对其中 2 2 4bp的片段进行了... 详细信息

利用RT PCR方法获得了 1 3株猪瘟病毒分离株、石门系强毒、中国C株及法国温度敏感株Thiverval株的e2基因部分编码序列的扩增片段 ,并对其进行了测序 ,得到了 2 5 1bp的e2基因部分编码序列。利用DNAStar软件对其中 2 2 4bp的片段进行了序列分析 ,并与已发表的Alfort、Brescia等毒株进行比较 ,结果 1 3株猪瘟分离株所测片段均为猪瘟病毒e2基因的序列 ,与石门系强毒的序列相比所有毒株的碱基替换随机地分布于整个序列 ,无碱基缺失和碱基插入。其中变化较大的区域位于序列的 3′端。 2 2株HCVe2基因部分编码序列的核苷酸及氨基酸同源性范围分别为 :78 1 %～ 1 0 0 %、 78 4%～ 1 0 0 % ,其中 1 3株猪瘟病毒流行毒株的核苷酸及氨基酸同源性范围分别为 :78 1 %～ 1 0 0 %、 78 4%～ 1 0 0 % ,4株 70～ 80年代分离的毒株的核苷酸及氨基酸同源性范围分别为 :79 0 %～ 88 3%、 81 1 %～87 8% ,9株 90年代分离的毒株的核苷酸及氨基酸同源性范围分别为 :80 8%～ 1 0 0 %、83 8%～ 1 0 0 % ;

关键词：猪瘟病毒序列分析同源性变异 e2基因

应用e2基因缺失的检测评价宫颈病变中HPV16感染状态

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武汉大学学报（医学版） 2011年第2期32卷 207-210页

作者：张帅蔡红兵丁晓华武汉大学中南医院妇瘤科/湖北省肿瘤医学临床研究中心/肿瘤生物学行为湖北省重点实验室湖北武汉430071 武汉大学医学院病毒学研究所湖北武汉430071

目的:应用e2基因缺失的检测了解宫颈病变中HPV16病毒DNA的存在状态,探讨其与宫颈癌的关系。方法:应用多重聚合酶链反应(PCR)对HPV16感染标本将其e2基因的C端、N端、铰链区分别与e6基因同时进行扩增,应用Scion I mage 4.0软件对e2基因、e... 详细信息

目的:应用e2基因缺失的检测了解宫颈病变中HPV16病毒DNA的存在状态,探讨其与宫颈癌的关系。方法:应用多重聚合酶链反应(PCR)对HPV16感染标本将其e2基因的C端、N端、铰链区分别与e6基因同时进行扩增,应用Scion I mage 4.0软件对e2基因、e6基因电泳条带面积灰度值进行半定量分析,判定HPV16是否处于整合状态。结果:在70例宫颈癌标本及42例非癌宫颈病变标本中,HPV16型的感染率分别为67.14%和38.10%。在宫颈癌组中,有40例标本病毒的DNA处于整合状态,6例处于混合状态,1例处于游离状态;在非癌宫颈病变组,有5例病毒DNA处于整合状态,1例处于混合状态,10例处于游离状态。其中感染HPV病毒的正常宫颈组织标本病毒的DNA均处于游离状态。结论:e2基因缺失的检测可以反映HPV16感染状态,对HPV16DNA整合状态的分析可作为判断宫颈病变预后及指导后续治疗的依据。

关键词：宫颈肿瘤人乳头瘤病毒 e2基因整合

猪瘟病毒保护性抗原e2基因的克隆及在原核细胞中的表达

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畜牧兽医学报 1999年第2期30卷 146-152页

作者：李红卫涂长春余兴龙金扩世吕宗吉李茂祥章金钢殷震解放军农牧大学

应用ＲＴＰＣＲ分两段扩增猪瘟病毒（ＨＣＶ）石门株Ｅ２基因，然后对其进行了克隆。利用两个片段重叠部分的单一ＢｇｌⅡ位点，将它们连接成为完整的Ｅ２基因，并克隆到ｐＵＣ１９质粒中，获得重组质粒ｐＨＣＥ２。另设计一对引物，... 详细信息

应用ＲＴＰＣＲ分两段扩增猪瘟病毒（ＨＣＶ）石门株Ｅ２基因，然后对其进行了克隆。利用两个片段重叠部分的单一ＢｇｌⅡ位点，将它们连接成为完整的Ｅ２基因，并克隆到ｐＵＣ１９质粒中，获得重组质粒ｐＨＣＥ２。另设计一对引物，以ｐＨＣＥ２为模板扩增出不含信号肽的Ｅ２基因，然后将其克隆到表达载体质粒ｐＢＶ２２０和ｐＥＴ２８ａ（＋）中，获得重组质粒ｐＢＶＥ２和ｐＥＴＥ２，用酶切、ＰＣＲ和序列分析鉴定Ｅ２基因插入位置、方向和读码框架的正确性。经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和直接ＥＬＩＳＡ检测表明重组质粒ｐＢＶＥ２和ｐＥＴＥ２转化、诱导的受体菌均能表达Ｅ２抗原。

关键词：猪瘟病毒 e2基因克隆表达原核细胞猪瘟诊断