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泡桐E2基因家族分析及对丛枝植原体的响应

森林与环境学报 2022年第2期42卷 174-183页

作者：江小羊曹喜兵赵振利邓敏捷范国强河南农业大学泡桐研究所河南郑州450002

泛素结合酶(UBC)e2是泛素蛋白酶体系统的组成部分,在植物生长发育、形态建成和病原互作中扮演着重要角色。为研究E2基因家族在泡桐丛枝病幼苗形态变化中的作用,利用生物信息学方法对白花泡桐E2基因进行家族成员鉴定、染色体定位及分析... 详细信息

泛素结合酶(UBC)e2是泛素蛋白酶体系统的组成部分,在植物生长发育、形态建成和病原互作中扮演着重要角色。为研究E2基因家族在泡桐丛枝病幼苗形态变化中的作用,利用生物信息学方法对白花泡桐E2基因进行家族成员鉴定、染色体定位及分析其在泡桐丛枝病发生过程中的作用。结果表明,白花泡桐基因组中含有56个E2基因家族成员,分别属于17个亚族。56个E2基因家族成员均含有外显子,而55个基因家族成员都含有内含子;53个基因家族成员都含有光响应元件、胁迫响应元件和激素响应元件;56个基因家族成员参与了28个基因重复事件,与拟南芥之间有41个共线性事件;PfUBC44、PfUBC45和PfUBC51可能与白花泡桐丛枝病发生相关。该结果对研究白花泡桐E2基因家族在泡桐丛枝病发生过程中的作用具有重要意义。

关键词：白花泡桐泛素结合酶丛枝植原体家族进化分析 E2基因

湖南一株猪非典型瘟病毒的鉴定及其e2、NS5B基因序列分析

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湖南农业大学学报(自然科学版) 2024年

作者：柳泰胡兴业毛婉谢邵波尹德明余兴龙湖南农业大学动物医学院

随机挑选湖南某规模化猪场出现“抖抖病”的新生仔猪，采集血清样本，用可扩增猪非典型瘟病毒(APPV)NS5B基因和E2基因引物进行RT–PCR鉴定，对PCR扩增产物测序，结果发病仔猪被鉴定为APPV感染阳性。随后利用MegAlign软件分析NS5B基因序... 详细信息

随机挑选湖南某规模化猪场出现“抖抖病”的新生仔猪，采集血清样本，用可扩增猪非典型瘟病毒(APPV)NS5B基因和E2基因引物进行RT–PCR鉴定，对PCR扩增产物测序，结果发病仔猪被鉴定为APPV感染阳性。随后利用MegAlign软件分析NS5B基因序列的同源性和e2蛋白结构，并使用 MeGA 5.0 采用邻接法构建其遗传进化树。NS5B基因序列分析表明，鉴定毒株HN0626与GenBank中84株参考毒株的同源性为81.68% ～98.95%；分析预测e2蛋白结构，推导其潜在的B细胞抗原表位。系统发育分析显示，HN0626毒株属于基因1型，是全球猪群中的主要流行毒株，其e2、NS5B基因序列上传至GenBank，登录号分别为OR936135、OR936136。

关键词：猪非典型瘟病毒 NS5B基因 E2基因抗原表位预测遗传进化分析湖南

山东部分地区猪瘟病毒分离鉴定及E2基因遗传进化分析

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中国兽医学报 2020年第9期40卷 1665-1670页

作者：焦秋林姜子昕孟凡亮曹龙龙李焱杨玉栋佟泽刘思当山东农业大学动物科技学院山东泰安271018

2019年1月山东省莱芜某猪场保育猪在免疫猪瘟(classicai swine fever,CSF)疫苗后发病,病死率高达60%。对病猪进行实验室综合诊断,确诊为猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)感染,经检测分离毒株(Laiwu2019)存在变异。为进一步... 详细信息

2019年1月山东省莱芜某猪场保育猪在免疫猪瘟(classicai swine fever,CSF)疫苗后发病,病死率高达60%。对病猪进行实验室综合诊断,确诊为猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)感染,经检测分离毒株(Laiwu2019)存在变异。为进一步了解山东地区CSFV遗传进化情况,2019年上半年从山东部分地区收集23份CSF疑似病料,确定17份阳性并成功分离到14株CSFV,对分离毒株的E2基因进行遗传进化分析。结果表明,分离的15株CSFV间的核苷酸与推导氨基酸的同源性分别为97.0%~99.9%和97.1%~100.0%,与参考株间的同源性分别为81.9%~97.4%和88.7%~99.7%。通过与Shimen株糖基化位点分析,分离株仅在"986NYAK-NYTK989"处发生突变。分离毒株与Shimen株抗原表位分析比较,15株分离株在抗原表位"717TTWKeYSH724"发生了"K720R"的突变,在"771LLFDGTNP778"处发生了"N777S"的突变,LaiWu2019同时发生了"G775T"的突变;在抗原表位"829TAVSPTTLR837"处,SDCP-19株发生了"S832C"的突变。通过遗传进化树分析,分离株位于相对独立一支,与近几年2.1d亚型变异株遗传关系最近,属于变异毒株。

关键词：猪瘟病毒变异毒株 E2基因遗传变异分析

宫颈病变患者人乳头瘤病毒16亚型E2基因多态性检测

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南方医科大学学报 2012年第10期32卷 1503-1506页

作者：邱峰袁丽娜黄宪章广东省中医院检验科广东广州510120 广东省中医院病理科广东广州510120

目的分析宫颈病变中人乳头瘤病毒（HPV）16亚型E2基因的多态与宫颈病变的关系,了解E2基因变异情况及其与宫颈病变的相关性。方法应用PCR和高分辨率熔解曲线方法针对379例HPV高危亚型阳性宫颈脱落细胞样本进行HPV16感染情况及HPV16亚型e... 详细信息

目的分析宫颈病变中人乳头瘤病毒（HPV）16亚型E2基因的多态与宫颈病变的关系,了解E2基因变异情况及其与宫颈病变的相关性。方法应用PCR和高分辨率熔解曲线方法针对379例HPV高危亚型阳性宫颈脱落细胞样本进行HPV16感染情况及HPV16亚型E2基因68位点和133位点多态分布情况进行检测。结果 379例HPV高危亚型阳性宫颈标本共检出78例HPV 16亚型阳性,其在宫颈癌、CINⅡ-Ⅲ、CINⅠ、炎症患者中的检出率分别为44.8%、31.5%、24.1%和9.6%;HPV16 E2基因68C和133G的频率在中重度宫颈内瘤样病变和宫颈癌中明显高于轻度上皮内瘤样病变和炎症患者（P〈0.05）。结论 HPV16是导致宫颈恶性病变的重要致病因素;随着病理类型的进展,HPV16感染率也逐渐增加;同时基因位点改变说明HPV 16 E2基因单核苷酸变异可能使致癌能力发生改变。

关键词：宫颈癌宫颈内瘤样病变人乳头瘤病毒 E2基因多态性

细胞源猪瘟活疫苗E2基因遗传稳定性和免疫原性分析

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中国兽药杂志 2023年第4期57卷 1-10页

作者：吴华伟陈晓春黄小洁刘丹邓永秦义娴高金源薛青红孙淼陈建陈延飞中国兽医药品监察所北京100081

测定了中国4个细胞源猪瘟活疫苗(C株)E2基因全序列,将其与GenBank上13个猪瘟病毒的E2基因序列(含C株原始毒株、7个猪瘟病毒C株以及国际上5个主要猪瘟活疫苗毒株的E2基因全序列)进行了核苷酸序列、推导的氨基酸序列进行遗传变异分析,通... 详细信息

测定了中国4个细胞源猪瘟活疫苗(C株)E2基因全序列,将其与GenBank上13个猪瘟病毒的E2基因序列(含C株原始毒株、7个猪瘟病毒C株以及国际上5个主要猪瘟活疫苗毒株的E2基因全序列)进行了核苷酸序列、推导的氨基酸序列进行遗传变异分析,通过生物信息学手段对预测的e2蛋白N-糖基化位点、e2蛋白磷酸化位点和理化特性以及模拟的蛋白空间结构进行了比较,并通过免疫攻毒试验对4个细胞源猪瘟疫苗(C株)的免疫效果进行了验证。结果表明,与猪瘟病毒C株原始种毒相比,尽管中国4个细胞源猪瘟活疫苗的E2基因核苷酸序列、推导的e2蛋白氨基酸序列或模拟的三维结构等发生个别核苷酸变异、个别氨基酸位点突变或缺失,但均不影响猪瘟C株的免疫原性,猪瘟疫苗C株仍然是防控猪瘟的最有效武器。

关键词：猪瘟细胞源活疫苗 E2基因遗传稳定性同源性免疫原性

猪瘟病毒E2基因主要抗原区表达及Dot-eLISA建立研究

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中国猪业 2022年第4期17卷 64-68页

作者：苏红辽宗玉国河南省滑县动物卫生监督所河南安阳456400 山东省临朐县综合行政执法局山东潍坊262600

为建立基于猪瘟病毒E2基因主要抗原区表达产物的猪瘟抗体斑点杂交eLISA方法,应用RT-PCR方法扩增了猪瘟病毒E2基因的主要抗原区(de2),经ecoR I、Xho I双酶切,与经同样双酶切的原核表达载体peT-28a (+)连接,加入适量IPTG诱导表达,SDS-PAGe... 详细信息

为建立基于猪瘟病毒E2基因主要抗原区表达产物的猪瘟抗体斑点杂交eLISA方法,应用RT-PCR方法扩增了猪瘟病毒E2基因的主要抗原区(de2),经ecoR I、Xho I双酶切,与经同样双酶切的原核表达载体peT-28a (+)连接,加入适量IPTG诱导表达,SDS-PAGe和Western blotting分析结果表明,成功表达的重组蛋白分子量约32.4 KDa,能与CSFV阳性血清特异性结合,为CSFV抗体检测提供了有效工具。

关键词：猪瘟病毒 E2基因原核表达 Dot-eLISA

共表达猪瘟病毒E2基因和猪白细胞介素2基因的重组腺病毒的构建及其免疫原性研究

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病毒学报 2010年第5期26卷 385-391页

作者：何雷张彦明徐彦召唐青海王静杨小云代晨向华常鹏祥林鸷西北农林科技大学动物医学院杨凌712100

为研制猪瘟活载体疫苗,构建共表达猪瘟病毒E2基因和猪白细胞介素2基因的重组腺病毒并研究其免疫原性。应用PCR方法从pMD19-T-e2质粒和pMD19-T-pIL2质粒中分别扩增E2基因和pIL-2基因,将扩增的全长E2基因和pIL-2的编码区基因序列通过柔性... 详细信息

为研制猪瘟活载体疫苗,构建共表达猪瘟病毒E2基因和猪白细胞介素2基因的重组腺病毒并研究其免疫原性。应用PCR方法从pMD19-T-e2质粒和pMD19-T-pIL2质粒中分别扩增E2基因和pIL-2基因,将扩增的全长E2基因和pIL-2的编码区基因序列通过柔性接头序列(5个甘氨酸密码子)串联,插入腺病毒穿梭载体AdTrack中,在受体菌中与骨架载体Adeasy同源重组。重组质粒Adeasy-e2-pIL-2转染HeK293细胞,包装出重组腺病毒rAd-e2-pIL-2。用rAd-e2-pIL-2免疫家兔,经兔体交互免疫试验评定其免疫效果。结果显示,经RT-PCR和West-ern blot检测,成功构建了rAd-e2-pIL-2,重组病毒滴度达108.12PFU/mL。rAd-e2-pIL-2接种家兔后刺激接种兔产生猪瘟病毒特异性抗体,淋巴细胞转化试验结果显示猪瘟病毒诱导兔淋巴细胞特异性增殖,攻毒后rAd-e2-pIL-2接种兔和猪瘟病毒C株接种兔均未出现定型热反应。研究结果表明,rAd-e2-pIL-2免疫兔可以预防猪瘟病毒C株接种引发的体温反应,rAd-e2-pIL-2可望成为猪瘟候选疫苗。

关键词：猪瘟病毒 E2基因猪白细胞介素2 重组腺病毒细胞因子佐剂

猪瘟病毒erns和e2蛋白重组表达及抗体间接eLISA检测方法的建立

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中国动物传染病学报 2022年第1期30卷 76-83页

作者：张洪亮郝占武林喜平张志王凤雪解倩倩韩先杰单虎温永俊内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018 青岛农业大学动物医学院山东省新兽药创制协同创新中心青岛市兽医生物技术工程研究中心青岛266109 兴安盟五岔沟国有林管理局阿尔山137803 中国动物卫生与流行病学中心青岛266032

本研究将CSFV erns和E2基因的主要抗原区进行克隆,构建peT32a-erns和peT32aeK-e2重组质粒,将其转化大肠杆菌BL21(De3)进行诱导表达和纯化,以纯化的rerns、re2重组蛋白为包被抗原,经条件优化,分别建立CSFV rerns和re2抗体间接eLISA检测... 详细信息

本研究将CSFV erns和E2基因的主要抗原区进行克隆,构建peT32a-erns和peT32aeK-e2重组质粒,将其转化大肠杆菌BL21(De3)进行诱导表达和纯化,以纯化的rerns、re2重组蛋白为包被抗原,经条件优化,分别建立CSFV rerns和re2抗体间接eLISA检测方法。SDS-PAGe结果显示,分别获得约为47 kDa和42 kDa的重组蛋白,rerns重组蛋白主要在上清液中存在,re2重组蛋白主要以包涵体形式存在。Western blot结果显示,纯化后的重组蛋白具有良好的免疫原性。通过方阵试验进行了eLISA反应条件优化,确定了erns蛋白最佳包被量为2.5μg/mL,re2蛋白最佳包被量为0.625μg/mL,待检血清最佳稀释倍数为1∶100,最佳封闭液为0.25%PVA溶液,HRP标记的兔抗猪IgG二抗最佳稀释度为1∶2000,临界值分别为0.24和0.33。上述方法仅与CSFV阳性血清发生特异性反应,检测敏感性可达到1∶1600,批内重复性和批间重复性变异系数均小于10%。本研究建立的间接eLISA方法可初步应用于CSFV erns和e2抗体的检测,鉴别e2亚单位疫苗免疫抗体和野毒感染抗体,有利于猪瘟净化工作的实施。

关键词：猪瘟病毒 erns基因 E2基因蛋白表达间接eLISA

福建地区猪瘟病毒流行株基因分型及E2基因遗传变异分析

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中国兽医学报 2016年第12期36卷 2009-2013页

作者：魏春华刘建奎戴爱玲曾宇坤李晓华杨小燕龙岩学院生命科学学院福建省预防兽医学与兽医生物技术重点实验室福建省生猪疫病防控工程技术研究中心福建龙岩364000

为了解福建地区2013—2014年猪瘟病毒(CSFV)流行毒株的分子生物学特性与变异规律,采集了福建地区多个猪场的40份疑似猪瘟样品,应用RT-PCR技术对E2基因的主要抗原编码区进行扩增及序列分析,其中31份为猪瘟阳性。序列分析结果表明,31株CSF... 详细信息

为了解福建地区2013—2014年猪瘟病毒(CSFV)流行毒株的分子生物学特性与变异规律,采集了福建地区多个猪场的40份疑似猪瘟样品,应用RT-PCR技术对E2基因的主要抗原编码区进行扩增及序列分析,其中31份为猪瘟阳性。序列分析结果表明,31株CSFV流行毒株之间核苷酸与氨基酸的同源性分别为78.5%~100.0%和82.2%~100.0%,与国内外分离株的核苷酸同源性为81.1%~98.9%,氨基酸同源性为79.8%~95.6%;遗传进化树分析表明,31株CSFV属于1.1和2.1亚群,其中23株为1.1亚型,8株为2.1b和2.1c亚群,没有发现2.2和2.3亚群毒株。氨基酸序列分析表明,流行株在免疫逃逸相关位点705,713,729和734位氨基酸发生变异,FJ02毒株B细胞表位关键位点771位氨基酸发生变异,表明福建地区CSFV流行毒株呈现遗传变异多样性。

关键词：猪瘟病毒 E2基因 RT-PCR 遗传变异