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实用癌症杂志 2021年第6期36卷 910-913页

作者：张媛媛陈选英薛晓会郑州大学第一附属医院 450000

目的探讨转录抑制因子ZeB2蛋白表达和靶蛋白e-caderin蛋白对鼻咽癌转移的临床应用价值。方法选取鼻咽癌转移组织标本90例,符合要求的鼻咽癌癌旁标本90例,采用免疫组化法检测两组标本中的ZeB2、e-caderin蛋白表达情况,对比在不同TNM分期... 详细信息

目的探讨转录抑制因子ZeB2蛋白表达和靶蛋白e-caderin蛋白对鼻咽癌转移的临床应用价值。方法选取鼻咽癌转移组织标本90例,符合要求的鼻咽癌癌旁标本90例,采用免疫组化法检测两组标本中的ZeB2、e-caderin蛋白表达情况,对比在不同TNM分期、组织学分化程度、浸润深度、淋巴结是否转移的鼻咽癌组织中ZeB2、e-caderin蛋白阳性表达率差异。结果鼻咽癌组织中的ZeB2、e-caderin蛋白阳性表达率(67.78%、71.11%)显著高于癌旁组织的22.22%、74.44%,差异具有统计学意义(PeB2蛋白阳性表达率与TNM分期和浸润深度显著相关(P0.05);e-caderin蛋白阳性表达率与TNM分期和是否发生转移显著相关(P0.05)。结论ZeB2、e-caderin在鼻咽癌组织中表达上调,与鼻咽癌的发生发展密切相关。

关键词：鼻咽癌 ZeB2 e-caderin 临床应用

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Brachyury在TGF-β1诱导的肾小管上皮间充质转分化中的作用及机制研究

Brachyury在TGF-β1诱导的肾小管上皮间充质转分化中的作用及机制...

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作者：孙文娟第四军医大学

学位级别：硕士

【背景】各种进展型肾脏疾病，无论其原发病如何，最终都将导致肾纤维化，进而进展为终末期肾功能衰竭，严重影响了人类的健康。我国是慢性肾脏病大国，慢性肾脏病患者约有1.1亿，约占我国全部人口的10.8%，且目前仍有增高趋势，肾病... 详细信息

【背景】各种进展型肾脏疾病，无论其原发病如何，最终都将导致肾纤维化，进而进展为终末期肾功能衰竭，严重影响了人类的健康。我国是慢性肾脏病大国，慢性肾脏病患者约有1.1亿，约占我国全部人口的10.8%，且目前仍有增高趋势，肾病已经成为当今威胁中国人口健康的主要疾病之一，数量巨大的慢性肾病患者的存在，给国家经济带来了沉重的负担。因此，研究肾间质纤维化的发病机制、寻找能够缓解或逆转肾间质纤维化的关键靶点、延缓终末期肾衰的发生已经成为目前肾脏疾病研究领域的热点。多种肾脏损伤因素可引起肾脏纤维化，其主要的病理表现为细胞外基质沉积和肾小管上皮细胞间充质转分化（epithelialtomesenchymaltransition,eMT）。eMT是指受到外界各种病理因素刺激的上皮细胞，因失去了维持细胞之间生理功能的细胞因子间的相互作用，使其维持上皮细胞形态的基因表达受到抑制，获得间皮细胞形态的基因得到释放，上皮细胞基底膜遭到破坏，上皮细胞失去其原有表型获得间充质表型特征。在肾小管eMT过程中，细胞之间起黏附作用分子表达减少，如e-钙黏蛋白（e-cadherin）、紧密连接蛋白（zonulaoccludentesprotein,ZO-1）;而间充质标识物表达增多，如波形蛋白（vimentin）、α平滑肌肌动蛋白（α-smoothmuscleactin,α-SMA)等。eMT在胚胎的发育，肿瘤细胞侵袭、转移以及器官纤维化的发生发展过程中均发挥着重要的作用。进化几近保守的T-box转录因子家族成员Brachyury在脊椎动物中胚层的发育中，尤其是脊索的发育过程中扮演了重要的角色。近年研究表明Brachyury诱导了肿瘤细胞转分化发生，在转录水平上，上调锌指家族Slug的表达，从而抑制e-cadherin的转录，进而促进了肿瘤细胞的侵袭转移能力。e-cadherin作为转分化的经典上皮分子标志物，介导了细胞之间的粘附作用，其表达的抑制在肿瘤细胞的分化、侵袭和转移及器官纤维化过程中发挥了重要作用。TGF-β1作为公认的致肾脏纤维化细胞因子，其参与肾小管eMT进而促进肾脏纤维化的具体分子机制仍未完全阐明。目前已研究发现在非洲爪蟾胚胎发育过程中Brachyury受TGF-β超家族调控。但是到目前为止尚未有报道证实Brachyury在TGF-β1诱导的肾小管eMT中的作用。【目的】探讨Brachyury在TGF-β1诱导的肾小管eMT中的作用及其分子机制，进一步为阐明TGF-β1导致肾脏纤维化的分子机制提供新的视角，为寻找新的逆转肾脏纤维化的治疗策略提供理论依据和实验基础。【方法】 1．通过qRT-PCR与WB检测TGF-β1干预不同时间，不同浓度的TGF-β1干预的肾小管上皮细胞(HK2)中Brachyury的表达;2．通过细胞转染，分别上调和下调HK2细胞中Brachyury的表达，通过免疫荧光检测Brachyury对HK2细胞表型的影响;3．通过WB检测Brachyury对HK2细胞eMT相关蛋白水平的影响;4．通过细胞转染，上调HK2细胞中Brachyury的表达,观察其下游靶基因Snail和Slug的表达;5．通过细胞转染，分别下调HK2细胞中Snail和Slug的表达,Westernblot检测Brachyury-Snail-Slug通路对eMT的影响;6．构建单侧输尿管结扎模型（UUO），免疫组化检测Brachyury、表皮细胞及肌成纤维细胞标志分子的表达，在蛋白水平检测Brachyury的表达;7．收集IgA肾病(LeeⅢ-Ⅴ)患者病理标本，免疫组化检测TGF-β1，Brachyury及其下游靶基因在纤维化肾脏组织中的表达，并分析Brachyury与肾小管间质纤维化之间的关系。【结果】 1．实时荧光定量PCR实验与蛋白印记实验结果显示，不同TGF-β1浓度刺激HK2细胞，1ng/mlTGF-β1时Brachyury表达升高，5ng/ml时表达最高，10ng/ml时仍持续高表达;5ng/mlTGF-β1不同时间点刺激HK2细胞，结果显示，2h时mRNA表达升高，在12h表达最高，持续至24h，其蛋白表达基本与转录水平表达一致;2．免疫荧光实验结果显示：与对照组相比，Brachyury正义质粒转染后HK2细胞其上皮标志分子e-cadherin与Plakoglobin表达减少，而间皮标志物vimentin表达增强;***实验结果证实了免疫荧光的结果;下调Brachyury表达后可部分逆转由TGF-β1诱导的eMT;4．与对照细胞相比，转染Brachyury正义质粒的HK2细胞中Snail和Slug在蛋白水与mRNA水平上的表达均升高;5．与对照细胞相比，分别转染了Snail和Slug的siRNA后，可以分别部分逆转由TGF-β1诱导的

关键词： Brachyur 上皮间充质转分化(eMT) 转化生长因子β1(TGF-β1) e-caderin

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黄芪总皂苷对特发性肺纤维化小鼠上皮间质转分化的干预作用

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河南中医 2019年第5期39卷 686-691页

作者：韩佳徐昌君黄霂晗欧江琴林昶丁倩杨长福贵阳中医学院贵州贵阳550002

目的:探讨黄芪总皂苷对博莱霉素(Bleomycin,BLM)诱导的特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)小鼠上皮间质转分化(epithelial-mesenchymal transdifferentiation,eMT)的干预作用。方法:将90只小鼠按照随机数字表法分为空白组、模型组、地塞米松组、黄芪总皂苷高剂量组、黄芪总皂苷中剂量组、黄芪总皂苷低剂量组,每组各15只。模型组及黄芪总皂苷各剂量组小鼠气管内一次性滴注博莱霉素(5 mg·kg^(-1)),造模后,黄芪总皂苷各剂量组以120mg·kg^(-1)、60 mg·kg^(-1)、30 mg·kg^(-1)灌胃,地塞米松组予地塞米松0. 0125 mg·kg^(-1)灌胃,模型组每天予等体积生理盐水灌胃。给药28 d后取材,进行He、Masson染色分析肺组织形态及胶原蛋白表达水平,羟脯氨酸含量测定胶原蛋白含量,免疫组织化学法检测eMT相关蛋白表达,western-bloting检测TGF-β/smad信号及eMT相关蛋白表达。结果:黄芪总皂苷各剂量组小鼠肺质量指数低于模型组,黄芪总皂苷中剂量组降低明显,但均高于空白组,差异具有统计学意义(P e-caderin表达减少,黄芪总皂苷各剂量组e-caderin表达增多(P eMT抑制作用最好,其抗炎作用优于对胶原纤维的抑制作用。

关键词：特发性肺纤维化上皮间质转分化博莱霉素 α-SMA e-caderin Smad3 黄芪总皂苷小鼠

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黄芪甲苷和黄芪总皂苷对特发性肺纤维化小鼠治疗作用的对比研究

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辽宁中医杂志 2019年第10期46卷 2198-2201,2242页

作者：韩佳徐昌君黄霂晗欧江琴林昶丁倩杨长福贵州中医药大学

目的:研究比较黄芪甲苷和黄芪总皂苷对BLM诱导的肺纤维化模型eMT的干预作用。方法:KM小鼠随机分为空白组、模型组、地塞米松阳性组、黄芪甲苷组、黄芪总皂苷组。模型组及药物处理组小鼠气管内一次性滴注博莱霉素(10 mg·kg-1),造模后治... 详细信息

目的:研究比较黄芪甲苷和黄芪总皂苷对BLM诱导的肺纤维化模型eMT的干预作用。方法:KM小鼠随机分为空白组、模型组、地塞米松阳性组、黄芪甲苷组、黄芪总皂苷组。模型组及药物处理组小鼠气管内一次性滴注博莱霉素(10 mg·kg-1),造模后治疗组予黄芪甲苷和黄芪总皂苷灌胃,模型组予等量生理盐水灌胃。给药28 d后取材,进行He、Masson染色分析肺组织形态及胶原蛋白表达水平,羟脯氨酸含量测定胶原蛋白含量,免疫组化检测eMT相关蛋白表达,western-bloting检测TGF-β/smad信号及eMT相关蛋白表达。结果:BLM诱导肺纤维化TGF-β1明显上调(PeMT标记蛋白α-SMA表达增高而e-cadherin减少(P eMT的形成。结论:黄芪甲苷和黄芪总皂苷对BLM诱导的肺纤维化小鼠模型eMT有抑制作用,从而延缓肺纤维化的发生发展,黄芪甲苷和黄芪总皂苷在对于炎症的治疗作用较明显,对于胶原纤维的抑制作用不甚明显,总体看来,黄芪甲苷的抑制作用优于黄芪总皂苷。

关键词：特发性肺纤维化 α-SMA e-caderin 黄芪甲苷黄芪总皂苷

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