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重组犬干扰素α1促进犬淋巴细胞增殖的e-玫瑰花环试验

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吉林畜牧兽医 2016年第1期37卷 10-11,13页

作者：谭成成付玉和柳溪林柳增善岳玉环吉林大学动物医学学院吉林长春130062 吉林农业大学吉林长春130000 吉林大学中日联谊医院吉林长春130000 解放军军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130122

重组犬干扰素α1连续给予8～12月龄肉食犬7d，利用e-玫瑰花环试验检测给药后1d、3d、7d和停药后7d的淋巴细胞水平，结果表明：重组犬干扰素cc1具有促进犬外周血淋巴细胞增殖作用。在给药7d后，其e-玫瑰花环结花率较对照组升高约12％（P... 详细信息

重组犬干扰素α1连续给予8～12月龄肉食犬7d，利用e-玫瑰花环试验检测给药后1d、3d、7d和停药后7d的淋巴细胞水平，结果表明：重组犬干扰素cc1具有促进犬外周血淋巴细胞增殖作用。在给药7d后，其e-玫瑰花环结花率较对照组升高约12％（P〈0．05），但停药7d后其水平恢复到对照组水平。

关键词：犬重组犬干扰素α1 淋巴细胞 e-玫瑰花环

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羊胎盘免疫活性小分子肽的分离纯化

食品科学 2013年第22期34卷 273-276页

作者：刘隆兴任兴宏汤禾静唐照勇何成明方廖琼西南大学生物技术学院重庆400715 重庆理工大学药学与生物工程学院重庆400054

目的:从羊胎盘中分离纯化出具有免疫活性的小分子肽。方法:采用常规方法制备羊胎盘超滤液,利用反相高效液相色谱仪(RP-HPLC)对羊胎盘提取液进行分离纯化及纯度分析,并利用e-玫瑰花环实验对各组分进行免疫活性评价,利用edman降解法对其... 详细信息

目的:从羊胎盘中分离纯化出具有免疫活性的小分子肽。方法:采用常规方法制备羊胎盘超滤液,利用反相高效液相色谱仪(RP-HPLC)对羊胎盘提取液进行分离纯化及纯度分析,并利用e-玫瑰花环实验对各组分进行免疫活性评价,利用edman降解法对其组分进行N端测序。结果:利用RP-HPLC工艺成功分离出纯度较高的3种小分子肽,并确定其中两者具有免疫活性;对活性较强的肽进行测序、检索,结果表明为未知组分。结论:RP-HPLC是分离、分析活性肽类较理想的手段之一,并证实了羊胎盘含有具有免疫活性的小分子肽。

关键词：羊胎盘小分子肽反相高效液相色谱 e-玫瑰花环

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犬脾特异性转移因子的生物学活性检测

中国兽医学报 2011年第12期31卷 1769-1772页

作者：张英刘一诺李莉马强房希碧官员刘松财吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062

采用冻融—透析法提取了免疫犬的特异性转移因子(STF),以健康非免疫犬的非特异性转移因子(NSTF)为对照,对2种转移因子的理化学特性和免疫活性进行了检测与分析。结果表明,2种转移因子的理化学性质相似,STF含有的蛋白量低而核酸量高,而N... 详细信息

采用冻融—透析法提取了免疫犬的特异性转移因子(STF),以健康非免疫犬的非特异性转移因子(NSTF)为对照,对2种转移因子的理化学特性和免疫活性进行了检测与分析。结果表明,2种转移因子的理化学性质相似,STF含有的蛋白量低而核酸量高,而NSTF含有的蛋白量高而核酸量低。e-玫瑰花环试验表明,STF和NSTF均可增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能,增加e-玫瑰花环的形成率,表明TF具有免疫增强作用,其中STF的效果明显高于NSTF(P0.05)。生理盐水组和正常小鼠的外周血淋巴细胞转化表现与免疫抑制小鼠基本一致,犬脾STF、NSTF和PHA对生理盐水组和正常小鼠的淋巴细胞均表现出一定的免疫增强活性,而且犬脾STF、NSTF免疫增强作用显著高于PHA组(P<0.01)。

关键词：犬特异性转移因子非特异性转移因子 e-玫瑰花环 MTT 免疫活性

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兔et-玫瑰花环形成实验方法探讨

中国兽医杂志 2006年第3期42卷 17-18页

作者：王娅邓俊良王湧万恩怀陈仕均陈俊杰四川农业大学动物科技学院四川雅安625014

淋巴细胞是体内最主要的免疫活性细胞,由于其表面标志和功能不同,可将其分为T淋巴细胞和B淋巴细胞两大主要类型.T淋巴细胞区别于B淋巴细胞的独特标志是前者表面有CD2分子,即为红细胞受体(eR),这种受体能与动物的红细胞结合形成玫瑰花结,... 详细信息

淋巴细胞是体内最主要的免疫活性细胞,由于其表面标志和功能不同,可将其分为T淋巴细胞和B淋巴细胞两大主要类型.T淋巴细胞区别于B淋巴细胞的独特标志是前者表面有CD2分子,即为红细胞受体(eR),这种受体能与动物的红细胞结合形成玫瑰花结,称e-玫瑰花环实验.

关键词： e-玫瑰花环实验方法探讨免疫活性细胞 B淋巴细胞 T淋巴细胞环形细胞免疫功能细胞受体外周血液

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有机硒和某些中草药对鸡免疫功能的影响

畜牧与兽医 2003年第10期35卷 37-38页

作者：崔保安杨明凡张素梅王学斌苗舜尧魏战勇河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002 南京农业大学江苏南京210095

将购进的 1日龄雏鸡分组 ,其中 1组饲料中添加有机硒 ,另 3组分别添加中草药黄芪、女贞子、淫羊藿 ,另设 1组空白对照。饲养至 60日龄空腹称重 ,采血分离淋巴细胞 ,测其e 玫瑰花环形成率 ,计算其脾指数和法氏囊指数。结果其玫瑰花环形... 详细信息

将购进的 1日龄雏鸡分组 ,其中 1组饲料中添加有机硒 ,另 3组分别添加中草药黄芪、女贞子、淫羊藿 ,另设 1组空白对照。饲养至 60日龄空腹称重 ,采血分离淋巴细胞 ,测其e 玫瑰花环形成率 ,计算其脾指数和法氏囊指数。结果其玫瑰花环形成率、脾指数和法氏囊指数分别为 :有机硒组 (37 79±0 0 2 ) %、 0 2 73、 0 474;黄芪组 (38 63± 0 0 6) %、 0 2 91、 0 486;女贞子组 (35 1 4± 0 0 3) %、 0 2 67、 0 467;淫羊藿组 (36 42± 0 2 ) %、 0 2 69、 0 468;对照组为 (2 6 0 6± 0 0 3) %、 0 2 4 8、 0 42 5。试验组与对照组结果差异显著 ,说明有机硒、黄芪、女贞子、淫羊藿对鸡体的免疫增强作用明显。

关键词：有机硒中草药鸡免疫功能 e-玫瑰花环脾指数法氏囊指数免疫增强剂饲料添加剂

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中草药制剂提高肉鸡细胞免疫力的研究

安徽农业科学 2006年第18期34卷 4598-4599页

作者：姜金庆杨国有许艳凤王香云河南科技学院动物科学学院河南新乡453003 河南省辉县市胡桥乡畜牧站河南辉县453600

采用e-玫瑰花环(eRFC)形成试验的方法,探索中草药制剂对鸡是否有提高非特异性免疫功能的作用。将中草药白头翁、黄连、板兰根、大青叶、甘草、马齿苋、黄芪、蒲公英、山楂、干姜等按一定比例制成粉剂,将受试动物分为3个试验组和1个对照... 详细信息

采用e-玫瑰花环(eRFC)形成试验的方法,探索中草药制剂对鸡是否有提高非特异性免疫功能的作用。将中草药白头翁、黄连、板兰根、大青叶、甘草、马齿苋、黄芪、蒲公英、山楂、干姜等按一定比例制成粉剂,将受试动物分为3个试验组和1个对照组。从1日龄开始,3个试验组分别按0.5%、1%、1.5%的比例将中草药制剂加到日粮中进行饲喂,对照组不加任何添加剂,按常规方法进行饲养,35d后采血分离淋巴细胞,进行玫瑰花环(eRFC)试验。结果显示,3个实验组的细胞免疫活性与对照组相比均有显著提高。

关键词：肉鸡中草药制剂 e-玫瑰花环细胞免疫

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紫芪颗粒对小鼠免疫功能的影响

中国兽医杂志 2012年第1期48卷 43-45页

作者：易先国雷咸波何书海孙伟刘汉儒信阳农业高等专科学校动物科学系河南信阳464000 河南省信阳市光山县动物卫生监督所河南信阳464000 西南大学药学院重庆北碚400700

为研究紫芪颗粒对小鼠免疫功能的影响,利用氢化可的松造免疫抑制小鼠病理模型,分组后分给高、中、低浓度的紫芪颗粒溶液,检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率及吞噬指数;外周血淋巴细胞e-玫瑰花环形成率;血清溶血素值;脾脏指数。结果显示,紫芪... 详细信息

为研究紫芪颗粒对小鼠免疫功能的影响,利用氢化可的松造免疫抑制小鼠病理模型,分组后分给高、中、低浓度的紫芪颗粒溶液,检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率及吞噬指数;外周血淋巴细胞e-玫瑰花环形成率;血清溶血素值;脾脏指数。结果显示,紫芪颗粒对特异性体液免疫功能和特异性细胞免疫功能以及非特异性免疫功能有增强作用。

关键词：紫芪颗粒吞噬功能 e-玫瑰花环溶血素免疫抑制

羊胎盘免疫调节因子SPIF-Ⅰ分离纯化和鉴定初步研究

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羊胎盘免疫调节因子SPIF-Ⅰ分离纯化和鉴定初步研究

作者：吴开平第三军医大学

学位级别：硕士

近年来羊胎盘提取液的研究引起了广大学者浓厚的兴趣,但这些研究只是集中在羊胎盘提取液的功能和应用方面。羊胎盘中含有的生物活性组分非常丰富,羊胎盘提取液中究竟哪些成分在免疫调节中起主导作用及如何从中分离纯化出单一活性组分等... 详细信息

近年来羊胎盘提取液的研究引起了广大学者浓厚的兴趣,但这些研究只是集中在羊胎盘提取液的功能和应用方面。羊胎盘中含有的生物活性组分非常丰富,羊胎盘提取液中究竟哪些成分在免疫调节中起主导作用及如何从中分离纯化出单一活性组分等方面的研究一直未见报道。为此,我们开展本课题的研究,主要研究内容和结果如下: 1.羊胎盘免疫调节活性因子(SPIF-Ⅰ)的分离与纯化将本实验室通过匀浆、冻融、超虑等步骤制备的分子量小于5000道尔顿的羊胎盘提取液,首先以20mg/ml浓度上样于Sephadex G-50(柱高100cm,直径1 cm)凝胶柱层析,pH7.4浓度为0.01mol/L的Tris-HCl缓冲液以0.5ml/min流速进行洗脱。结果得到洗脱峰A和B,反相HPLC检测分析发现洗脱峰B含组分较少,只有两个主要成分峰,便于进一步分离。多次重复此步并将洗脱峰B收集,冻干,再经Sephadex G-25凝胶柱(柱高60 cm,直径1 cm)层析,上样浓度、缓冲液的浓度、pH以及洗脱流速均同样于Sephadex G-50凝胶层析.结果得到洗脱峰C和D,反相HPLC检测分析发现此次层析恰好将洗脱峰B中的两个主要成分峰分开。将洗脱峰C、D收集冻干,分别命名为羊胎盘免疫调节因子-Ⅱ和Ⅰ.将两因子冻干粉再经Sephadex G-10(柱高30 cm,直径1.5 cm)凝胶柱脱盐后,反相HPLC柱检测分析,发现此步层析不仅达到脱盐效果,峰C、D中的其它一些含量较小的组分也被分离开来,层析出的目的组分羊胎盘免疫调节因子-Ⅰ和Ⅱ纯度进一步得到提高,分别达到98.89%和88.51%。因羊胎盘免疫调节因子-Ⅰ的纯度较高,将对其进行深入研究。 2.羊胎盘免疫调节活性因子(SPIF-Ⅰ)的光谱、质谱检测将SPIF-Ⅰ稀释在波长100～400nm进行紫外扫描,结果显示在273nm处有单一特征吸收峰。SPIF-Ⅰ经eSI-MS质谱分析,m/z 304.8为其单电荷峰[M+H]+,所以SPIF-Ⅰ的分子量为303.8。SPIF-Ⅰ的光谱、质谱图谱均显示SPIF-Ⅰ为组分单一、纯度较高的小分子多肽。 3.免疫活性检测e-玫瑰花环实验条件的筛选参照文献,对免疫活性测定脱e受体法中两个影响玫瑰花环形成的重要因素—脱e受体和受体重新合成时间分别设时间点,45℃恒温水浴脱e受体的时间设30min,

关键词：羊胎盘提取液凝胶层析 e-玫瑰花环免疫活性 SPIF-Ⅰ MTT HPLC T淋巴细胞

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羊胎盘免疫活性小分子肽的分离纯化

羊胎盘免疫活性小分子肽的分离纯化

作者：任兴宏西南大学

学位级别：硕士

胎盘是哺乳类胎生动物在妊娠时为胎儿供应养分,供胚胎生长的特殊器官。其组织细胞内含有丰富的类固醇激素,肽类激素,前列腺素,生长因子,细胞因子等胎儿生长所需的物质成分。自从1943年日本京都医院山岛教授从羊胎盘中成功地提取出羊胎素... 详细信息

胎盘是哺乳类胎生动物在妊娠时为胎儿供应养分,供胚胎生长的特殊器官。其组织细胞内含有丰富的类固醇激素,肽类激素,前列腺素,生长因子,细胞因子等胎儿生长所需的物质成分。自从1943年日本京都医院山岛教授从羊胎盘中成功地提取出羊胎素后,对羊胎盘提取液的研究引起了广大学者的浓厚兴趣。近年来研究发现,羊胎盘提取液中富含包括小分子肽类的多种生物活性物质。但是对羊胎盘提取液中功能组分的纯化、功能组分的组成研究的相关报道甚少。本研究采用组织匀浆、反复冻融、冷冻离心、超滤的方法制备羊胎盘提取液;采用加脲的Tricine-SDS-PAGe电泳初步鉴定胎盘肽的存在;采用RP-HPLC逐级分离、纯化羊胎盘提取液肽组分,并采用e-玫瑰花环试验检测各肽组分的免疫活性;用edman降解法测活性组分N末端氨基酸序列。其目的是通过超滤和反相高效液相色谱将结合的方法分离纯化出有免疫活性的胎盘肽,并对所纯化的羊胎盘肽的免疫活性进行分析和氨基酸序列鉴定,为进一步阐明其生物活性的作用机理和免疫活性小分子肽的进一步研发提供必要的依据。本实验的研究内容如下：1、采用组织匀浆、反复冻融和超滤相结合的方法制备羊胎盘提取液。2、对所制备的羊胎盘提取液进行理化性质鉴定,并采用Tricine-SDS-PAGe电泳方法鉴定羊胎盘肽是否存在。3、采用RP-HPLC方法对所制备的羊胎盘提取液逐一纯化得到纯度比较高的单一组分,并采用e-玫瑰花环实验对各个纯化物进行免疫活性检测。4、对免疫活性高且纯度较高的组分,采用edman降解法测定N端氨基酸序列。实验结果：1、羊胎盘提取液均为无色或微黄色的透明液体,冷冻干燥后呈疏松多孔的海绵状白色粉末,其PH为6.40±0.02,蛋白质定性反应检测中颜色均变成紫红色,沉淀反应中蛋白质反应呈阴性,电泳结果显示羊胎盘提取液中含有小分子肽类物质,多肽含量为2.14±0.05mg/ml,在190-340nm范围内分别在212nm和253nm附近有两个吸收峰。2、RP-HPLC纯化出3个纯度较高的组分,分别为峰1-5、峰1-7、峰2-3,其纯度分别达到90.6%、91.4%、99.6%。3、通过e-玫瑰花环实验对3个纯度较高组分的活性测定表明峰1-5、峰2-3有免疫活性。edman降解法测得峰2-3的N端的前10个氨基酸序列为：Trp-Glu-Pro-Asn-Val-Ser-Ala-His-Ala-Phe,将该段氨基酸序列登录美国国立生物技术信息中心,应用BLAST检索工具进行短序列匹配的蛋白质数据库检索,发现没有与此多肽同源的序列,为一新的多肽。该多肽的免疫功能稳定性及其作用机制尚需要进一步的研究。结论：（1）采用反复冻融结合超滤方法获得PH6.40±0.02、多肽含量为2.14±0.05mg/ml羊胎盘提取液。（2）利用RP-HPLC逐级分离纯化羊胎盘提取液,纯化峰1-5、峰1-7、峰2-3三个肽组分,其肽纯度分别为90.6%、91.4%、99.6%。e-玫瑰花环试验检测发现峰1-5、峰2-3组分具有增强脱受体的淋巴细胞恢复其表面受体的功能,促进人外周血T淋巴细胞e玫瑰花环形成,并具有剂量效应依赖关系,表明两个纯化组分具有T细胞免疫活性。（3） edman降解法测定峰2-3组分的氨基酸测序,发现N端前十个氨基酸序列为Trp-Glu-Pro-Asn-Val-Ser-Ala-His-Ala-Phe,经Blast蛋白质数据库检索发现该多肽为一个新的多肽。

关键词：羊胎盘小分子肽 e-玫瑰花环纯化