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山东水稻黑条矮缩病毒dsrna提取与RT-PCR检测研究

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山东农业科学 2012年第7期44卷 1-3,7页

作者：徐建第吴修张全芳马加清陈峰杨连群山东省农业科学院水稻研究所山东济南250100 山东省农业科学院高新技术研究中心山东济南250100

水稻黑条矮缩病是由灰飞虱和白背飞虱等传播的病毒性病害,给水稻生产带来严重危害。通过提取水稻黑条矮缩病毒dsrna发现,感病植株的dsrna凝胶电泳存在8条带,而健康植株是空白结果,与报道的玉米粗缩病毒结果相同。根据水稻黑条矮缩病毒... 详细信息

水稻黑条矮缩病是由灰飞虱和白背飞虱等传播的病毒性病害,给水稻生产带来严重危害。通过提取水稻黑条矮缩病毒dsrna发现,感病植株的dsrna凝胶电泳存在8条带,而健康植株是空白结果,与报道的玉米粗缩病毒结果相同。根据水稻黑条矮缩病毒基因组序列的信息,在其S1和S10片段分别设计合成两对引物,对感染病毒植株和健康植株进行扩增,可在感病植株中分别扩增出水稻黑条矮缩病毒基因组特有的条带,而在健康植株中未能扩增出条带。利用此种方法可以建立水稻黑条矮缩病检测体系,对水稻黑条矮缩病进行早期检测和预报。

关键词：水稻黑条矮缩病 dsrna 病毒检测 RT-PCR

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天然dsrna诱导干扰素生成研究进展

黑龙江医药科学 2011年第3期34卷 54-55页

作者：张虎梁启超杜新娜朱金玲罗佳斌佳木斯大学基础医学院黑龙江佳木斯154007 牡丹江医学院黑龙江牡丹江157011 佳木斯大学口腔医学院黑龙江佳木斯154002

干扰素（Interferon,IFN）是一类具有多种功能的免疫活性蛋白质,主要是糖蛋白。干扰素在抗病毒性疾病和增强机体免疫调节能力以及恶性肿瘤方面有明显效果。近年来,干扰素一直是细胞学、病毒学、分子生物学、临床医学、细胞学、肿瘤学、... 详细信息

干扰素（Interferon,IFN）是一类具有多种功能的免疫活性蛋白质,主要是糖蛋白。干扰素在抗病毒性疾病和增强机体免疫调节能力以及恶性肿瘤方面有明显效果。近年来,干扰素一直是细胞学、病毒学、分子生物学、临床医学、细胞学、肿瘤学、免疫学等相关领域的研究热点生。干扰素临床应用的突出问题是这些细胞因子在体内的半衰期都很短，

关键词： dsrna 干扰素

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四川省食用菌中dsrna的检测

食用菌 2012年第1期34卷 16-18页

作者：肖奎叶华智李明元黄家莉徐锦成都榕珍菌业有限公司四川成都611733 四川农业大学四川雅安625014 西华大学生物工程学院四川成都610039

应用dsrna技术检测了从四川省主要食用菌产区和科研院所收集的76个主要栽培的食用菌菌株,发现其中有26个菌株呈阳性,占34.2%。所检测的16个双孢蘑菇都呈dsrna阴性。菌类不同,dsrna的电泳图谱差别较大;同一菌类中,dsrna电泳图谱也不尽相... 详细信息

应用dsrna技术检测了从四川省主要食用菌产区和科研院所收集的76个主要栽培的食用菌菌株,发现其中有26个菌株呈阳性,占34.2%。所检测的16个双孢蘑菇都呈dsrna阴性。菌类不同,dsrna的电泳图谱差别较大;同一菌类中,dsrna电泳图谱也不尽相同。对不同菌类的几个阳性菌株进行33℃高温和cycloheximide处理,个别菌株dsrna电泳图谱有变化。未见dsrna阳性的菌株其子实体有异常。

关键词：食用菌 dsrna 病毒

应用dsrna介导的RNAi对烟曲霉菌生命必须基因的研究

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中国病原生物学杂志 2007年第2期2卷 85-88页

作者：李晓瑾刘家云苏明权郝晓柯第四军医大学西京医院检验科陕西西安710032

目的初步探讨应用RNAi研究烟曲霉菌必须基因的方法。方法液氮研磨烟曲霉菌,提取总mRNA,用含T7启动子序列的特异引物进行RT-PCR,扩增出两端含T7启动子序列的nudC基因,以此为模版使用MEGAscriptTMRNAi Kit体外转录合成dsrna,用合成的dsRN... 详细信息

目的初步探讨应用RNAi研究烟曲霉菌必须基因的方法。方法液氮研磨烟曲霉菌,提取总mRNA,用含T7启动子序列的特异引物进行RT-PCR,扩增出两端含T7启动子序列的nudC基因,以此为模版使用MEGAscriptTMRNAi Kit体外转录合成dsrna,用合成的dsrna电转化烟曲霉菌后,观察烟曲霉菌表型变化,对转化菌进行RT-PCR,分析mRNA变化。结果电转化后,转化菌的nudC基因mRNA水平降低,与18srRNA的比值为0.50±0.07,显著低于零对照1.09±0.06和无关对照1.10±0.09(F=9.38,Pdsrna介导的RNA能沉默烟曲霉菌靶基因,产生类似基因敲除的表型,为研究靶基因功能,识别烟曲霉菌生命必须基因,寻找新的抗菌药物作用靶位奠定了良好的基础。

关键词：烟曲霉菌 RNA干扰 dsrna nudC基因

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报春花dsrna病毒的分子鉴定

报春花dsRNA病毒的分子鉴定

中国植物病理学会2007年学术年会

作者：田清花李力强陈集双浙江理工大学生物工程研究所浙江理工大学生物工程研究所浙江理工大学生物工程研究所

2007年春,在杭州地区栽培的观赏性植物报春花（Primula malacoides Franch）普遍存在叶边缘黄化症,部分发展至叶尖和叶缘干枯。从叶组织中抽提 dsrna,进行电泳分析,检测到大小约2300bp 的 dsrna 条带。从叶组织中提纯病毒粒子,并进一步... 详细信息

2007年春,在杭州地区栽培的观赏性植物报春花（Primula malacoides Franch）普遍存在叶边缘黄化症,部分发展至叶尖和叶缘干枯。从叶组织中抽提 dsrna,进行电泳分析,检测到大小约2300bp 的 dsrna 条带。从叶组织中提纯病毒粒子,并进一步从病毒粒子中分离病毒核酸, 经 RNase A 和 DNase 消化验证,确定病毒基因组为 dsrna 形式。病毒 dsrna 与直接从植物叶组织中提取的 dsrna 大小基本一致。

关键词：报春花 dsrna RdRp CP Partitiviridae

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植物病毒源dsrna原核表达条件的研究

青岛农业大学学报（自然科学版） 2011年第2期28卷 103-106页

作者：胡有燕牛娜迟胜起青岛农业大学农学与植保学院山东青岛266109

利用PVYN-CP和PLRV-CP基因构建了dsrna原核表达载体L4440RYl,转至大肠杆菌HT115(DE3),获得菌株HTRYl。绘制了菌株HTRYl的生长曲线,研究了IPTG浓度和诱导时间对该菌株dsrna表达量的影响。结果表明,接种3.5h,菌体浓度OD600为0.6,加入终浓... 详细信息

利用PVYN-CP和PLRV-CP基因构建了dsrna原核表达载体L4440RYl,转至大肠杆菌HT115(DE3),获得菌株HTRYl。绘制了菌株HTRYl的生长曲线,研究了IPTG浓度和诱导时间对该菌株dsrna表达量的影响。结果表明,接种3.5h,菌体浓度OD600为0.6,加入终浓度为0.3～0.4mmol/L的IPTG,诱导4～5h时,dsrna表达量最高。dsrna表达条件的研究,为dsrna的应用研究奠定了基础。

关键词： PVY PRLV dsrna 原核表达

牛蒡病毒dsrna的分离鉴定及病毒部分序列分析

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牛蒡病毒dsRNA的分离鉴定及病毒部分序列分析

泛环渤海地区九省市生物化学与分子生物学会——2011年学术交流会

作者：刘权王贵军任惠张鹏牛颜冰山西农业大学

牛蒡(Arctium lappa L.)属菊科牛蒡属,二年生草本植物,根和叶子可作蔬菜,种子和根均可入药。近年来,随着中药材市场的不断扩大,我国药用植物的栽培规模也不断增大,然而,药用植物遭受病毒侵染和衰退的现象却愈来愈严重。2008年,研究者在... 详细信息

牛蒡(Arctium lappa L.)属菊科牛蒡属,二年生草本植物,根和叶子可作蔬菜,种子和根均可入药。近年来,随着中药材市场的不断扩大,我国药用植物的栽培规模也不断增大,然而,药用植物遭受病毒侵染和衰退的现象却愈来愈严重。2008年,研究者在田间发现许多牛蒡植株表现出典型的褪绿枯斑症状,病毒危害严重,因此,

关键词：牛蒡 dsrna 病毒病分离鉴定

湘渝地区栗疫病菌低毒力菌株dsrna的转化研究

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湘渝地区栗疫病菌低毒力菌株dsRNA的转化研究

重庆市首届工程师大会

作者：罗正均任本权彭跃明陈林川重庆市森林病虫防治检疫站

通过对采自湘渝两地区板栗上的溃疡斑进行分离,共得到56个菌株,各菌株经检测,有11个中低、低毒力菌株和1个中等毒力菌株含dsrna,所有供试强毒菌株均不形成电泳带。通过弱毒菌株对毒菌株的转化,结果表明,弱毒力菌株对毒力菌株的转化率表... 详细信息

通过对采自湘渝两地区板栗上的溃疡斑进行分离,共得到56个菌株,各菌株经检测,有11个中低、低毒力菌株和1个中等毒力菌株含dsrna,所有供试强毒菌株均不形成电泳带。通过弱毒菌株对毒菌株的转化,结果表明,弱毒力菌株对毒力菌株的转化率表现出较大差异,其中,弱毒力菌株185,618,293对所试的10个毒力菌株转化情况较好,转化率均在90%以上。弱毒力菌株729,518,392对毒菌株的转化差异较大,转化率在20%～80%不等。

关键词：板栗疫病菌低毒力转化 dsrna

利用来源于病毒基因的dsrna阻断水稻齿叶矮缩病毒在褐飞虱体内的侵染

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利用来源于病毒基因的dsRNA阻断水稻齿叶矮缩病毒在褐飞虱体内的...

中国植物病理学会2012年学术年会

作者：郭年梅贾东升魏太云福建农林大学植物病毒研究所/福建省植物病毒学重点实验室

RNA干扰（RNAi）在生物体内是dsrna诱导同源基因沉默的一个过程。它已经被用于生物体抵抗多种病毒的工具,其中包括呼肠孤病毒。水稻齿叶矮缩病毒（Rice ragged stuntvirus,RRSV）是为害水稻生产的一种植物呼肠孤病毒,由介体昆虫褐飞虱（... 详细信息

RNA干扰（RNAi）在生物体内是dsrna诱导同源基因沉默的一个过程。它已经被用于生物体抵抗多种病毒的工具,其中包括呼肠孤病毒。水稻齿叶矮缩病毒（Rice ragged stuntvirus,RRSV）是为害水稻生产的一种植物呼肠孤病毒,由介体昆虫褐飞虱（Nilaparvata lugens）以持久增殖型方式传播,但不经卵传播。RRSV随着褐飞虱的长距离迁飞而传播到其他的地区,所以,控制RRSV在褐飞虱体内的复制是控制RRSV蔓延的一种有效方法。在本实验中,我们选取了RRSV编码的Pns7（844bp）和Pns9（806bp）基因片段分别设计了含有T7启动子的引物序列,通过T7 RiboMAX试剂盒体外合成dsrna。合成的dsrna与10%的蔗糖配制成人工饲料饲喂褐飞虱,针对绿色荧光蛋白（GFP）基因的dsrna和只含有蔗糖饲喂的褐飞虱作为对照。用RRSV P6蛋白的抗体和RRSV病毒的抗体免疫荧光共定位褐飞虱的消化道检测RRSV在褐飞虱体内的分布和带毒率。我们的结果表明,饲喂了针对Pns7和Pns9基因片段的dsrna的褐飞虱的带毒率相对于饲喂针对GFP基因的dsrna和只有蔗糖的带毒率下降了将近50%。进一步研究表明,在饲毒后3d和6d的时候,来源于Pns7和P9基因的dsrna可以较好地干扰病毒在介体昆虫体内的侵染和扩散。我们的研究证实了利用来源于病毒基因的dsrna能够阻断水稻齿叶矮缩病毒在褐飞虱体内的侵染。

关键词： RNAi 水稻齿叶矮缩病毒褐飞虱 dsrna 病毒侵染