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作者：陈海明福建医科大学

学位级别：硕士

研究背景及目的原发性肝癌(以下简称肝癌)是临床最常见的恶性肿瘤之一,因其发病隐匿、增殖进展迅速且早期症状不典型,现有的筛查检测方法缺乏灵敏度和特异性,患者确诊时往往已到了晚期,以致贻误早期外科手术治疗的最佳时期,致使治疗效... 详细信息

研究背景及目的原发性肝癌(以下简称肝癌)是临床最常见的恶性肿瘤之一,因其发病隐匿、增殖进展迅速且早期症状不典型,现有的筛查检测方法缺乏灵敏度和特异性,患者确诊时往往已到了晚期,以致贻误早期外科手术治疗的最佳时期,致使治疗效果不理想、患者生存率较低等预后较差的结局。因此,探明肝癌的发病机制、寻找新的早期诊断标记物、研发新的靶向药物是学界亟需解决的难题。越来越多的研究证据表明组蛋白的甲基化修饰与肝癌发生发展有关。SET1和MLL家族复合物是H3K4的一类特异的甲基转移酶,负责H3K4的甲基化修饰,在基因表达和转录调控、DNA修复、细胞周期运行与增殖代谢等生物学过程发挥着重要作用,与肿瘤的发生发展密切相关。dpy30是SET1和MLL复合物的一个重要亚基,在催化H3K4和维持其三甲基化状态中起重要作用,但其在肿瘤发生发展中的作用尚未探明。本课题通过研究dpy30在肝癌中的表达情况及作用,探讨其在促进肝癌发生发展具有的病理生理作用,揭示相关临床意义。研究方法1.首先通过Human Protein Atlas(HPA人类蛋白质数据库)在线数据库找到dpy30基因,分析多种肿瘤组织中dpy30的蛋白及m RNA表达水平情况,初步了解dpy30在不同肿瘤中的分布情况,然后利用Gene Expression Profiling Interactive Analysis(GEPIA基因表达谱交互分析数据库)在线数据库进一步分析肝正常组织和肝肿瘤组织中dpy30的差异表达情况;接着通过肝癌组织芯片进行免疫组织化学染色(IHC),分析芯片中肝癌及癌旁组织中dpy30的表达情况,然后结合组织芯片的免疫组化结果和人类肿瘤基因组图谱(TCGA)数据,统计分析dpy30高低表达与肝癌患者的各病理指标之间的关系。2.细胞培养:培养课题实验所需的肝癌细胞(Hep-G2)。3.设计针对dpy30基因的短发夹RNA(sh RNA)并构建质粒载体;提纯所构建的质粒载体,并对其进行基因测序。4.将重组质粒和其他构建质粒(p MDL、VSVG、REV)共转染人肾293T细胞,包装生产慢病毒,然后构建dpy30敲低细胞模型,通过蛋白质免疫印迹法验证基因敲低效果。5.通过细胞增殖毒性检测实验及集落形成实验研究dpy30敲低对肝癌细胞生长的影响。6.通过葡萄糖摄取、乳酸释放测定实验研究dpy30表达下调对肝癌细胞糖酵解代谢的影响。结合在线数据库GEPIA,分析dpy30表达水平与糖代谢关键酶表达水平之间的关系。研究结果1.组织芯片免疫组化染色结果显示dpy30在肝癌组织中表达水平显著高于癌旁组织。2.组织芯片IHC结果显示dpy30其表达水平与肝癌临床分期、肿瘤大小、T分期密切相关(Pdpy30表达水平与术后总体生存率不存在显著相关性,但dpy30高表达者术后中位生存期较短。3.体外细胞水平上研究表明敲低dpy30时,显著抑制肝癌细胞HepG2的增殖能力,同时降低了肝癌细胞HepG2的葡萄糖摄取和乳酸释放能力。研究结论dpy30在肝癌中呈现高表达,其表达水平与肝癌临床分期、肿瘤大小、T分期密切相关。通过基因敲低手段降低dpy30表达水平可有效地抑制肝癌细胞的增殖和糖酵解水平。

关键词： dpy30 肝癌 HepG2 糖酵解

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dpy30在子宫颈癌中的表达及作用机制初步探讨

DPY30在子宫颈癌中的表达及作用机制初步探讨

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作者：贺凤喜山东第一医科大学

学位级别：硕士

背景2018年全球子宫颈癌新发病例约569847例,死亡311365例,高收入国家由于疫苗接种和筛查的普及,在过去30年间子宫颈癌的发病率和死亡率减少了一半以上,而中低收入国家却有所增加或趋于稳定。高危人乳头状瘤病毒(high risk-Human papill... 详细信息

背景2018年全球子宫颈癌新发病例约569847例,死亡311365例,高收入国家由于疫苗接种和筛查的普及,在过去30年间子宫颈癌的发病率和死亡率减少了一半以上,而中低收入国家却有所增加或趋于稳定。高危人乳头状瘤病毒(high risk-Human papillomavirus,hr HPV)持续感染几乎导致所有子宫颈癌的发生,其它危险因素还有:初次性生活过早,多个性伴侣或高风险性伴侣,免疫抑制(例如器官移植后或HIV免疫缺陷),性传播感染史,未接受筛查(占子宫颈癌发病的2/3),吸烟等,但该病的具体发病机制尚不清楚。深入了解子宫颈癌的发展过程对子宫颈癌的诊断和治疗及判断生存预后是必要的。dpy30是新近发现的组蛋白H3K4甲基转移酶SET1/MLL的家族成员之一,可催化组蛋白甲基化,其功能失调可导致细胞的非正常发育或功能丧失。最近的研究发现dpy30参与肿瘤发生过程,但尚未报道子宫颈癌中dpy30的研究。目的检测子宫颈鳞癌组织中dpy30、E-cadherin的表达水平,并分析dpy30与患者年龄、疾病分期、肿瘤分化程度等临床病理特征的相关性,及与患者生存率的关系,初步探讨dpy30在子宫颈癌的发病过程中的作用。方法通过实时荧光定量PCR技术检测dpy30在新鲜子宫颈鳞癌及其癌旁正常组织中的基因定量表达情况,验证dpy30在子宫颈癌中的促癌作用;免疫组织化学技术检测正常子宫颈组织和子宫颈鳞癌组织中dpy30及E-cadherin的蛋白表达水平;统计分析dpy30的表达及与E-cadherin、临床病理特征以及与患者生存率的相关性。结果1.实时荧光定量PCR技术结果显示,和癌旁正常组织相比,dpy30在新鲜子宫颈鳞癌中的m RNA相对表达量明显升高(Pdpy30在正常子宫颈组织中不表达,在子宫颈鳞癌组织中表达率为67.69%(44/65),并且它与子宫颈鳞癌的浸润深度(P=0.010),病理组织分化程度(P=0.001)及淋巴结转移的存在与否(P=0.013)相关,与患者年龄、FIGO分期无关(P>0.05);E-cadherin在正常子宫颈组织中表达呈强阳性,但在子宫颈鳞癌中表达下降(18/65,P0.05);子宫颈鳞癌中dpy30蛋白的表达与E-cadherin呈负相关(Rs=﹣0.727,P=0.000)。***30阳性表达患者的生存率较显著低于阴性表达者(P30在子宫颈鳞癌组织中的表达明显高于正常子宫颈组织,这表明dpy30在子宫颈鳞癌进展过程中起促癌作用。2.E-cadherin蛋白在子宫颈鳞癌组织中表达降低,并与患者组织分化程度、浸润深度及淋巴结转移有关,Kalplan-Meier生存分析结果显示:E-cadherin蛋白表达降低的患者预后较差。以上提示E-cadherin与子宫颈鳞癌的浸润和转移过程有关,阴性表达者预后不良。***30蛋白在子宫颈鳞癌中的表达与患者组织分化程度、浸润深度及淋巴结转移有关,Spearman相关分析显示dpy30和E-cadherin表达存在高度负相关。表明dpy30可能通过抑制E-cadherin的表达诱导EMT过程,从而促进子宫颈鳞癌侵袭、浸润及转移。***-Meier生存分析发现dpy30阳性表达者的宫颈癌患者5年生存率明显降低,提示dpy30可能是子宫颈鳞癌患者潜在的不良预后因子。

关键词： dpy30 子宫颈鳞癌上皮间质转化 E-cadherin

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探究COMPASS复合体成员ASH2L与dpy30的关系及Ash21对神经前体细胞稳态的调控

探究COMPASS复合体成员ASH2L与DPY30的关系及Ash21对神经前体细胞...

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作者：马孟杰北京协和医学院

学位级别：硕士

在哺乳动物细胞中,Setl相关复合体(Complex associated with set1,COMPASS)催化组蛋白H3K4甲基化,影响染色质的可及性,进而调节基因的表达。COMPASS核心组分包括甲基转移酶家族蛋白和四个骨架蛋白WDR5、RbBP5、ASH2L 和 dpy30,简称为“W... 详细信息

在哺乳动物细胞中,Setl相关复合体(Complex associated with set1,COMPASS)催化组蛋白H3K4甲基化,影响染色质的可及性,进而调节基因的表达。COMPASS核心组分包括甲基转移酶家族蛋白和四个骨架蛋白WDR5、RbBP5、ASH2L 和 dpy30,简称为“WRAD”。“WRAD”具有调控 COMPASS复合体的组装和辅助甲基转移酶发挥催化功能的作用。然而,对于WRAD成员之间的相互作用及调控关系,目前研究的还不够透彻。我们利用Ash21条件敲除小鼠、HEK293T、HeLa和N1E-115细胞系作为研究对象,分别在体内和体外敲低Ash21之后,观察到dpy30表达量呈现出显著的下调。通过对敲除小鼠ASH2L的ChIP-seq和RNA-seq数据的分析,显示Ash21缺失并不会影响dpy30的转录水平。接着,我们验证了 ASH2L主要通过其SDI结构域上的三个氨基酸残基与dpy30结合。另外,我们首次发现dpy30在细胞内通过泛素-蛋白酶体途径降解。一旦ASH2L-dpy30的结合被特异性破坏,dpy30蛋白水平就会呈现出急剧的下调,并且被泛素-蛋白酶体降解增多。此外,Ash21敲除之后会导致细胞周期G1期相关蛋白CyclinD1表达下调,我们发现,当敲低Ash21并同时过表达外源的dpy30时,Cyclin D1的表达量会被部分回复。这提示着dpy30的生物学功能不仅仅依赖于与ASH2L的结合,即COMPASS复合体的功能,它可能参与其他的复合体来调节基因表达。综上,我们揭示了 ASH2L-dpy30结合与dpy30稳定性之间的关系,发现了 dpy30在体的降解途径,并进一步表明dpy30的功能存在独立于COMPASS复合体的可能性。神经祖细胞(Neural progenitor cells,NPCs)具有分裂、增殖和分化的能力,产生不同类型的子代神经元和神经胶质细胞。因此,NPCs稳态的维持是保证新皮层生理功能的先决条件。任何影响NPCs状态和命运决定的改变,都有可能损害NPCs的稳态从而导致多种疾病,尤其是神经系统发育异常和肿瘤。我们发现在Ash21敲除之后,NPCs的细胞周期发生了剧烈的改变。这表现在细胞阻滞于G1期、细胞S期缩短和分布紊乱等,以上的结果说明了 NPCs的稳态严重受损。进一步,我们猜测Ash21敲除之后,NPCs从活跃状态逐渐转向静息或衰老的状态。

关键词： COMPASS Ash21 dpy30 蛋白降解细胞周期

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三胸家族核心成员dpy30与ASH2L的表达相关性分析

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基础医学与临床 2020年第8期40卷 1047-1052页

作者：文畅李梁舒鹏程强伯勤彭小忠中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室医学灵长类研究中心神经科学中心北京100005 中国医学科学院医学生物学研究所云南昆明650118

目的探究三胸家族(TrxG)核心成员dpy30与ASH2L表达是否具有相关性。方法Northern blot检测dpy30与ASH2L在多种人体组织中的表达及佛波醇肉豆蔻酸酯(PMA)诱导人慢性髓源白血病(K562)细胞分化过程中的dpy30与ASH2L表达变化;Western blot与... 详细信息

目的探究三胸家族(TrxG)核心成员dpy30与ASH2L表达是否具有相关性。方法Northern blot检测dpy30与ASH2L在多种人体组织中的表达及佛波醇肉豆蔻酸酯(PMA)诱导人慢性髓源白血病(K562)细胞分化过程中的dpy30与ASH2L表达变化;Western blot与RT-qPCR分别检测ASH2L条件性敲除小鼠(ASH2L-cKO)大脑皮质TrxG成员的蛋白及TrxG核心成员RNA表达情况;利用IGV软件可视化分析小鼠大脑皮质ChIP-seq结果中ASH2L、H3K4me3在ASH2L、dpy30基因染色质上的分布情况。结果dpy30与ASH2L的表达在人体各组织中分布有一定相似性;dpy30与ASH2L在PMA诱导K562细胞分化过程中的表达均逐渐减少;ASH2L-cKO小鼠大脑皮质中dpy30蛋白水平减少,dpy30的RNA水平改变无统计学意义。结论dpy30与ASH2L的表达具有相关性,ASH2L可能调控了dpy30蛋白水平。

关键词： dpy30 ASH2L 基因表达

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A chromatin modulator sustains self-renewal and enables differentiation of postnatal neural stem and progenitor cells

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Journal of Molecular Cell Biology 2020年第1期12卷 4-16页

作者： Kushani Shah Gwendalyn D.King Hao Jiang Department of Biochemistry and Molecular Genetics University of Alabama at BirminghamBirminghamAL 35294USA Department of Neurobiology University of Alabama at BirminghamBirminghamAL 3529AUSA Department of Biochemistry and Molecular Genetics University of VirginiaCharlottesvilleVA 22908USA

It remains unknown whether H3K4 methylation,an epigenetic modification associated with gene activation,regulates fate determination of the postnatal neural stem and progenitor cells(NSPCs).By inactivating the dpy30 subunit of the major H3K4 methyltransferase complexes in specific regions of mouse brain,we demonstrate a crucial role of efficient H3K4 methylation in maintaining both the self-renewal and differentiation capacity of postnatal ***30 deficiency disrupts development of hippocampus and especially the dentate gyrus and subventricular zone,the major regions for postnatal NSC ***30 is indispensable for sustaining the self-renewal and proliferation of NSPCs in a cell-intrinsic manner and also enables the differentiation of mouse and human neural progenitor cells to neuronal and glial ***30 directly regulates H3K4 methylation and the induction of several genes critical in *** findings link a prominent epigenetic mechanism of gene expression to the fundamental properties of NSPCs and may have implications in neurodevelopmental disorders.

关键词： neural stem cell self-renewal differentiation epigenetics H3K4 methylation dpy30

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