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dii标记的大鼠骨髓间充质干细胞与乳鼠心肌细胞在聚己内酯薄膜上接触共培养制作心肌补片的实验研究

中华心血管病杂志 2024年第5期52卷 525-531页

作者：张子畅穆军升周帆伯平尤斌首都医科大学宣武医院心脏外科北京100053 首都医科大学附属北京安贞医院心脏外科、北京市心肺血管疾病研究所北京100029 解放军总医院第三医学中心超声科北京100039

目的探讨在聚己内酯薄膜上将dii标记的骨髓间充质干细胞(BMSCs)与乳鼠心肌细胞接触共培养制作心肌补片的可能机制。方法选取5~6周龄SD大鼠2只,分离培养获得SD大鼠BMSCs,流式细胞术鉴定表面抗原。选取乳鼠15只,分离培养获得乳鼠心肌细胞... 详细信息

目的探讨在聚己内酯薄膜上将dii标记的骨髓间充质干细胞(BMSCs)与乳鼠心肌细胞接触共培养制作心肌补片的可能机制。方法选取5~6周龄SD大鼠2只,分离培养获得SD大鼠BMSCs,流式细胞术鉴定表面抗原。选取乳鼠15只,分离培养获得乳鼠心肌细胞。BMSCs培养至3代,使用dii染料标记BMSCs。在聚己内酯薄膜上将dii标记的BMSCs与心肌细胞接触共培养并设为实验组,对照组中将心肌细胞替换为等量未标记的BMSCs。共培养后24 h在荧光显微镜下观察细胞生长情况,并用扫描电镜观察共培养情况。共培养后7 d对细胞进行免疫荧光染色检测心肌标志物表达,在荧光显微镜下观察聚己内酯薄膜上BMSCs表达心肌标志物的情况。共培养的第1、7天使用流式细胞术分析BMSCs的干细胞分化率。使用钙黄绿素单独对心肌细胞染色,再在聚己内酯薄膜上将其与dii标记的BMSCs接触共培养,观察细胞间染料转移,并对细胞进行免疫荧光染色,检测缝隙连接蛋白43的表达,观察缝隙连接与接触共培养之间的关系。结果流式细胞术鉴定示BMSCs表面CD90、CD44H强阳性,CD11b/c、CD45阴性。共培养后24 h,荧光显微镜下观察到细胞依附于聚己内酯薄膜上,dii标记的BMSCs发红光,未标记的心肌细胞不发光;扫描电镜下观察到聚己内酯薄膜上细胞数量多,细胞状态正常。共培养第7天,部分dii标记的BMSCs表达心肌肌钙蛋白T、α-心肌肌动蛋白。流式细胞术分析示第7天实验组的干细胞分化率高于对照组[(20.12±0.15)%比(3.49±0.20)%,Pdii标记的BMSCs与心肌细胞在聚己内酯薄膜上接触共培养可以制作心肌补片,并且接触共培养促进分化形成心肌补片的机制可能与缝隙连接以及缝隙连接介导的细胞间信号通路有关。

关键词：干细胞心肌补片接触共培养 dii标记缝隙连接

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dii标记脂蛋白改良法的建立

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中国动脉硬化杂志 2002年第1期10卷 65-68页

作者：王建波王淳本刘志国田俊屈伸华中科技大学同济医学院生物化学教研室湖北省武汉市430030

为了改进脂蛋白的荧光标记方法 ,本实验采用经超速离心后的离心管底层血清取代商品化的去脂血清作为脂蛋白标记时的介质 ,与荧光染料dii混合孵育。经超速离心分离后获得dii标记的极低密度脂蛋白、低密度脂蛋白及β 极低密度脂蛋白。本... 详细信息

为了改进脂蛋白的荧光标记方法 ,本实验采用经超速离心后的离心管底层血清取代商品化的去脂血清作为脂蛋白标记时的介质 ,与荧光染料dii混合孵育。经超速离心分离后获得dii标记的极低密度脂蛋白、低密度脂蛋白及β 极低密度脂蛋白。本方法在标记过程中不用去脂血清 ,降低了标记成本并缩短了超速离心时间。配体与受体结合实验结果发现 ,用本方法标记的脂蛋白能以可饱和方式结合体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞和中国仓鼠卵母细胞。表明本方法标记的脂蛋白保持了正常脂蛋白的配体功能。

关键词：荧光标记脂蛋白受体改良标记方法 dii标记

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dii体外标记的大鼠骨髓间充质干细胞与乳鼠心肌细胞接触共培养诱导分化为心肌样细胞的实验研究

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中国分子心脏病学杂志 2021年第6期21卷 4344-4350页

作者：张子畅周帆郑建伟穆军升伯平尤斌首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所心脏外科解放军总医院第三医学中心超声科阳光融和医院心脏中心

目的对dii标记的大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)与乳鼠心肌细胞(CMs)进行接触共培养,观察接触共培养对dii标记的干细胞向CMs分化的影响,对其内在机制进行初步探究。在细胞标记下,为干细胞治疗心肌梗死寻找一种合适的诱导分化方法。方法分... 详细信息

目的对dii标记的大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)与乳鼠心肌细胞(CMs)进行接触共培养,观察接触共培养对dii标记的干细胞向CMs分化的影响,对其内在机制进行初步探究。在细胞标记下,为干细胞治疗心肌梗死寻找一种合适的诱导分化方法。方法分离培养获得SD大鼠BMSCs,流式细胞鉴定表面标志物。分离获得乳鼠CMs。BMSCs培养至3代后,使用dii染料对BMSCs进行标记。将dii标记的BMSCs与CMs接触共培养,并设仅有dii标记的BMSCs为对照组,24 h后在显微镜下观察细胞生长情况。在共培养7日后,使用心肌标志物(cTnT、α-actin)对细胞进行免疫荧光染色,在荧光显微镜下观察干细胞的分化情况。在共培养的第1、7日使用流式分析BMSCs向CMs的定向分化效率。使用钙黄绿素对CMs染色,观察接触共培养细胞间染料转移;使用缝隙连接蛋白43(Cx43)对细胞进行免疫荧光染色,观察缝隙连接与接触共培养之间存在的关系。结果 BMSCs流式细胞术鉴定:CD90、CD44H强阳性,CD11b/c、CD45阴性。共培养24 h后显微镜下观察可见:细胞贴壁,荧光激发时dii标记的BMSCs发红光,未标记的CMs不发光。第7日,部分dii标记的BMSCs表达cTnT、α-actin。流式分析显示:实验组第7日干细胞分化率高于对照组(20.06%:2.45%,P dii标记的BMSCs在与CMs接触共培养下可被诱导分化为心肌样细胞,并且接触共培养促进其分化为心肌样细胞,可能与通过缝隙连接传递相关信号通路有关。

关键词：干细胞治疗骨髓间充质干细胞心肌细胞接触共培养 dii标记

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单色光对鸡视网膜节细胞密度和大小的影响

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解剖学报 2008年第1期39卷 18-22页

作者：曹静王子旭陈耀星中国农业大学动物医学院北京100094

目的研究单色光对鸡视网膜节细胞（RGCs）分布的影响。方法采用二极管光（light-emittingdiodes,LED）灯作为光源,将60只刚出壳的雄性AA肉鸡分别饲养在红（660nm）、绿（560nm）、蓝（480nm）和白光（400--760nm）照下49d（n=15）,光照... 详细信息

目的研究单色光对鸡视网膜节细胞（RGCs）分布的影响。方法采用二极管光（light-emittingdiodes,LED）灯作为光源,将60只刚出壳的雄性AA肉鸡分别饲养在红（660nm）、绿（560nm）、蓝（480nm）和白光（400--760nm）照下49d（n=15）,光照强度15 lux,光照制度23h∶1h（L∶D）。取两侧视网膜分别做Nissl染色和dii标记RGCs,利用图像分析法观察视网膜面积、RGCs细胞密度与大小的变化。结果蓝、绿光组视网膜面积、RGCs细胞总数显著高于红、白光组（10.35%和17.07%,P〈0.05）;绿光组RGCs平均细胞密度比其他光组高14.61%（P〈0.05）;绿光组视网膜中央区（CA）的RGCs密度最高,显著高于蓝光组28.91%（P〈0.05）,其CA/NP的比值比其他光组高29.71%（P〈0.05）;蓝光组CA的RGCs胞体面积最小,颞侧周边区（TP）和鼻侧周边区（NP）的胞体最大,其TP/CA的比值比其他光组高26.65%（P〈0.05）且与其他光组相比差异显著（P〈0.05）。结论蓝、绿光可使视网膜面积、RGCs细胞总数增加;从视网膜的中央区到周边部,绿光组的RGCs密度梯度下降幅度和蓝光组的RGCs大小梯度增大幅度最明显。

关键词：单色光视网膜节细胞细胞密度细胞大小 Nissl染色 dii标记鸡

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