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尘螨1类变应原derf1和Derp1生物信息学分析

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皖南医学院学报 2014年第6期33卷 471-473页

作者：郭伟姜玉新皖南医学院形态实验中心安徽芜湖241002 皖南医学院生理学教研室安徽芜湖241002

目的:分析尘螨1类变应原的理化特性。方法:Gen Bank检索尘螨1类变应原Der f 1和Der p 1的氨基酸序列,利用生物信息学软件预测分析这两个氨基酸序列的一级结构、疏水性、跨膜区、二级结构及空间结构,并对其可能的功能位点进行预测。结果... 详细信息

目的:分析尘螨1类变应原的理化特性。方法:Gen Bank检索尘螨1类变应原Der f 1和Der p 1的氨基酸序列,利用生物信息学软件预测分析这两个氨基酸序列的一级结构、疏水性、跨膜区、二级结构及空间结构,并对其可能的功能位点进行预测。结果:尘螨1类变应原Der f 1和Der p 1分别编码321和320个氨基酸,分子量分别为36.4和36.1 ku,理论等电点(p1)分别为5.66和5.65,两蛋白均为亲水性蛋白且可能均无跨膜区,Der f 1的二级结构以不规则卷曲为主(43.93%),而Der p1的二级结构以α螺旋为主(43.75%)。两变应原均由蛋白酶抑制子I 29和木瓜蛋白酶C-端2个结构域组成,且半胱氨酸活性位点、组氨酸活性位点和天冬酰胺活性位点的位置相似。结论:Der f 1和Der p 1的这些特性有助于为螨性过敏性疾病的变应原特异性免疫治疗提供理论支持。

关键词：尘螨 derf1 Derp1 生物信息学

尘螨变应原Der f1植物表达载体的构建及表达

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中国免疫学杂志 2010年第3期26卷 250-253页

作者：彭江龙崔玉宝王华民周鹰牛莉娜吴洁海南医学院微生物学与免疫学教研室海口571101 盐城卫生职业技术学院卫生技术研究所盐城224006

目的:构建尘螨变应原Der f1植物表达载体并侵染烟草叶片表达。方法:从保存的含pET28a(+)-Der f1的甘油菌株中扩增Der f1基因,并克隆到质粒载体中,提取质粒,进行测序;以ClaⅠ、SalⅠ双酶切,将Der f1基因克隆到马铃薯X病毒(PVX)载体中,构... 详细信息

目的:构建尘螨变应原Der f1植物表达载体并侵染烟草叶片表达。方法:从保存的含pET28a(+)-Der f1的甘油菌株中扩增Der f1基因,并克隆到质粒载体中,提取质粒,进行测序;以ClaⅠ、SalⅠ双酶切,将Der f1基因克隆到马铃薯X病毒(PVX)载体中,构建植物病毒表达载体;将PVX-Der f1转化脓杆菌,挑取Kan、Tet抗性阳性的菌株侵染烟草叶片进行蛋白表达,采用SDS-PAGE和Western blot对表达蛋白进行鉴定和分析。结果:经SDS-PAGE分析,有4株烟草叶片蛋白提取物在34Mr处有特异性蛋白条带;经Western blot进一步验证其变应原,结果显示,烟草叶片中获得的重组蛋白在34Mr处与阳性血清发生特异性结合,而与阴性血清并不发生结合。结论:成功构建了植物病毒表达载体PVX-Der f1并获得表达,为尘螨变应原Der f1的研究提供新思路。

关键词：尘螨 derf1 马铃薯X病毒(PVX) 植物表达

粉尘螨过敏患者Der f 1和Der f 2特异性IgE的检测分析

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厦门大学学报（自然科学版） 2017年第1期56卷 137-141页

作者：董劲春程浩浙江大学医学院附属邵逸夫医院浙江杭州310016

为了解粉尘螨(Dermatophagoides farinae)过敏患者对粉尘螨单组分过敏原Der f 1和Der f 2特异性IgE的水平情况,收集了80例疑似尘螨过敏患者样本,对ImmunoCAP过敏原检测系统和浙江大学迪迅粉尘螨检测试剂盒检测的粉尘螨特异性IgE阳性样本... 详细信息

为了解粉尘螨(Dermatophagoides farinae)过敏患者对粉尘螨单组分过敏原Der f 1和Der f 2特异性IgE的水平情况,收集了80例疑似尘螨过敏患者样本,对ImmunoCAP过敏原检测系统和浙江大学迪迅粉尘螨检测试剂盒检测的粉尘螨特异性IgE阳性样本,进一步检测其粉尘螨单组分过敏原Der f 1和Der f 2特异性IgE水平.80例样本中2种方法检测粉尘螨均为阳性的有65例,阳性率为81.3%.65例阳性样本中,Der f 1阳性率为87.7%,Der f 2阳性率为90.8%,二者至少一个为阳性的达96.99%,Der f 2特异性IgE水平显著高于Der f 1.儿童的粉尘螨及其2种单组分过敏原Der f 1和Der f 2特异性IgE水平显著高于成人.综上,Der f 1和Der f 2这2种组分过敏原在我国粉尘螨患者中占据了主导地位,两者特异性IgE水平存在显著差异,后者高于前者,且儿童的敏感性显著高于成人.

关键词：粉尘螨过敏原 derf1 derf2

粉尘螨I类变应原基因的多态性分析及表达蛋白的特性鉴定

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中国人兽共患病学报 2007年第2期23卷 156-160页

作者：白羽吉坤美刘志刚蔡成郁深圳大学生命科学学院深圳518060

目的克隆表达我国深圳地区粉尘螨I类变应原Der f 1基因,并进行该基因的多态性分析和鉴定该纯化蛋白的变应原性,为研究具有我国区域特色的粉尘螨变应原奠定基础。方法从深圳地区挑取经形态鉴定的活粉尘螨,提取总RNA,RT-PCR扩增Der f 1基... 详细信息

目的克隆表达我国深圳地区粉尘螨I类变应原Der f 1基因,并进行该基因的多态性分析和鉴定该纯化蛋白的变应原性,为研究具有我国区域特色的粉尘螨变应原奠定基础。方法从深圳地区挑取经形态鉴定的活粉尘螨,提取总RNA,RT-PCR扩增Der f 1基因,克隆到T载体测序确认。通过计算机软件进行该基因的多态性分析。将该目的基因克隆到pET-His表达载体上得到重组质粒pET-Der f 1。工程菌经IPTG诱导培养,表达Der f 1目的蛋白。重组Der f 1蛋白通过6 His-tag蛋白纯化系统进行分离、纯化,并进行Western-Blot检测纯化的Der f 1蛋白与粉尘螨过敏病人血清中IgE的反应性,以鉴定重组Der f 1的变应原性。结果以粉尘螨总RNA为模板,经RT-PCR从深圳地区克隆了4株Der f 1基因。该基因与GenBank公布的Der f 1(No.AB034946.1)比较发现核苷酸的同源性在99.48%-100%之间,理论推导的氨基酸序列同源性在99.69%-100%之间。工程菌经IPTG诱导后高效表达的Der f 1重组蛋白,并主要以包涵体形式存在。Western-Blot试验证实该4株Der f 1基因表达的重组蛋白都具有变应原性。结论本研究克隆了4株深圳地区粉尘螨I类过敏原基因并实现了原核表达,为进一步开展Der f 1蛋白研究和重组变应原免疫治疗疫苗研究奠定基础。

关键词：粉尘螨 derf1 基因多态性原核表达

粉尘螨过敏患者Der f1、Der f2特异性IgE的检测分析

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粉尘螨过敏患者Der f1、Der f2特异性IgE的检测分析

作者：董劲春浙江大学

学位级别：硕士

目的：在过去几十年,过敏性疾病发病率迅速增长,严重影响了患者的健康。尘螨是导致过敏性疾病最重要的过敏原,主要会引起哮喘、过敏性鼻炎、特应性皮炎。尘螨主要包括户尘螨和粉尘螨,尘螨Ⅰ类过敏原(Der p 1/Der f 1)和Ⅱ类过敏原(Der p... 详细信息

目的：在过去几十年,过敏性疾病发病率迅速增长,严重影响了患者的健康。尘螨是导致过敏性疾病最重要的过敏原,主要会引起哮喘、过敏性鼻炎、特应性皮炎。尘螨主要包括户尘螨和粉尘螨,尘螨Ⅰ类过敏原(Der p 1/Der f 1)和Ⅱ类过敏原(Der p 2/Der f 2)在诱发过敏性疾病中起着主要作用。吸入性过敏性疾病根治的唯一手段是免疫治疗,而免疫治疗疗效的前提是正确的过敏原诊断。传统的过敏原诊断方法一般采用的原料是天然的蛋白提取物,里面包含了一系列的致敏性蛋白成分和非致敏性蛋白成分,引起了较多的交叉反应,影响了诊断结果的准确性,造成患者被过度治疗。过敏原分型诊断(component-resolved diagnosis, CRD)主要采用重组表达或天然纯化的单一过敏原,来查明诱发患者过敏的具体成分,这有利于明确患者病因并进行有针对的免疫治疗。分型诊断在对花生、小麦、荞麦过敏的研究中应用较多,但在对尘螨过敏的研究中少见。在皮试实验中,特异性IgE与屋尘螨Ⅰ类、Ⅱ类过敏原具有显著反应,提示在尘螨过敏患者中也可展开分型诊断研究。本研究对浙江地区80例疑似尘螨过敏患者血清中粉尘螨特异性IgE进行检测,进一步对粉尘螨单组分过敏原Der f1、Der f2特异性IgE抗体进行分析,为尘螨过敏患者疾病的免疫治疗提供分型诊断数据。方法：1、研究对象：2014年10月到2015年6月在我院皮肤科门诊就诊的80例疑似尘螨过敏初诊患者,其中男46例,女34例,年龄在3-78岁之间,平均年龄22.4岁,包括29名儿童(年龄3-14岁)和51名成人(15-78岁)。纳入患者主要表现出过敏性鼻炎、特应性皮炎、哮喘等临床症状,且均为进行免疫治疗。2、方法：所有患者经过医生面对面的评估,填写相应的问卷调查,评估过敏性鼻炎的四个主要症状——痒,打喷嚏,流鼻涕和鼻塞。哮喘主要通过呼吸困难史、喘息、咳嗽并进行阳性气道可逆性测试来确诊。特应性皮炎的诊断为皮肤瘙痒、典型性形态特征分布、典型的慢性复发过程。对经过两种方法平行检测确认为粉尘螨过敏(特异性IgE阳性)的样本,进一步检测其粉尘螨单组分过敏原Der f1和Der f2特异性IgE水平。3、统计学分析：运用SPSS 19.0统计软件进行统计分析,粉尘螨IgE和特异性IgE水平用平均值±标准差表示。两种检测方法的比较采用配对四格表,并进行McNemar检验和一致性检测。Der f1 Der f2的致敏性通过McNemar’ stest进行比较,不同组间的比较采用卡方检验,p1、80例样本两种方法检测粉尘螨均为阳性65例,阳性率为81.3%。65例粉尘螨阳性样本中,Der f1阳性率87.7%,Der f2阳性率90.8%,二者至少一个为阳性的达到97%,Der f2特异性IgE水平显著高于Der f1者。2、儿童的粉尘螨及其两种单组分过敏原Der f1 Der f2特异性IgE水平显著高于成人。结论：1、 Der f1和derf2是浙江地区粉尘螨患者的主要过敏原。2. Der f1、derf2特异性IgE水平存在显著差异,后者高于前者。3、儿童对Der f1和Der f2的敏感性显著高于成人。4、建议临床对粉尘螨过敏患者(尤其是儿童患者)应主要针对这两种过敏原组分(尤其是der f2)开展免疫治疗。

关键词：粉尘螨过敏过敏原 derf1 derf2

粉尘螨主要变应原基因Der f1和Der f3改组的研究

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皖南医学院学报 2013年第2期32卷 87-91页

作者：姜玉新郭伟马玉成刘志明陈琪李朝品皖南医学院生理学教研室安徽芜湖241002 皖南医学院医学寄生虫学教研室安徽芜湖241002

目的:探索粉尘螨变应原基因Der f1和Der f3改组条件,以期获得粉尘螨变应原融合突变基因。方法:RT-PCR方法扩增粉尘螨变应原Der f 1和Der f3基因,用DnaseⅠ分别酶解Der f 1和Der f3基因10、15、20、25、30 min;酶解相同时间的Der f1和Der... 详细信息

目的:探索粉尘螨变应原基因Der f1和Der f3改组条件,以期获得粉尘螨变应原融合突变基因。方法:RT-PCR方法扩增粉尘螨变应原Der f 1和Der f3基因,用DnaseⅠ分别酶解Der f 1和Der f3基因10、15、20、25、30 min;酶解相同时间的Der f1和Der f3基因片段两两混合,采用DNAshuffling技术对粉尘螨变应原Der f1和Der f3基因进行重组,琼脂糖凝胶电泳检测重组子。结果:以Der f 2 F和Der f2 R为引物在酶切10、15、20、25、30min均可扩增出清晰条带;以Der f1 F和Der f1 R、Der f1 F和Der f2 R、Der f2 F和Der f1 R为引物在酶切10、15、20、25、30min的模板中均无条带出现;而其他引物组合则在不同酶切时间的模板中均出现条带。结论:通过多种条件的组合,可获得多个粉尘螨变应原基因Der f1和Der f3间的融合基因,为大规模制备高效、低价的哮喘疫苗奠定了基础。

关键词： DNA改组 derf1 derf3 融合基因