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人delta-like1^ext-Fc融合蛋白毕赤酵母表达载体的构建及表达

细胞与分子免疫学杂志 2008年第5期24卷 450-452,460页

作者：黄斯勇伍艳兰李国辉何飞康志杰刘利韩骅梁英民第四军医大学唐都医院血液内科陕西西安710038 第四军医大学基础部医学遗传学与发育生物学教研室陕西西安710032

目的:构建人delta-like1ext-Fc融合蛋白毕赤酵母表达载体PIC-hDll1ext-Fc,并在毕赤酵母GS115中表达。方法:以pEF-BOSneo-hdll1ext-Fc为模板PCR扩增人delta-like1胞外段。通过DNA重组构建毕赤酵母表达载体PIC-hDll1ext-Fc。用MD平板筛选重组子,G418筛选高拷贝转化子,经甲醇诱导表达后,SDS-PAGE、Western blot分析表达蛋白。结果:hDll1基因的胞外段被有效地扩增。序列分析表明,所构建的含hDll1ext-Fc融合基因的质粒与设计相同,融合蛋白hDll1ext-Fc得到正确表达。结论:成功地扩增了人delta-like1胞外段,构建了hDll1ext-Fc融合基因的毕赤酵母表达载体PIC-hDll1ext-Fc,并在毕赤酵母中正确表达,为进一步研究奠定了实验基础。

关键词：造血干/祖细胞 Notch delta-like1 融合蛋白毕赤酵母

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delta-like1单克隆抗体对大鼠移植肾存活的影响

Delta-like1单克隆抗体对大鼠移植肾存活的影响

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作者：柯东东福建医科大学

学位级别：硕士

目的:成功建立肾移植模型,并通过delta-like 1单克隆抗体治疗探讨对大鼠移植肾存活的影响,初步探讨其在同种异体T细胞反应中的作用。方法:以BN(Brown Norway)大鼠作为供者,Lewis大鼠作为受者,通过肾动脉内套法吻合、肾静脉cuff管套法吻... 详细信息

目的:成功建立肾移植模型,并通过delta-like 1单克隆抗体治疗探讨对大鼠移植肾存活的影响,初步探讨其在同种异体T细胞反应中的作用。方法:以BN(Brown Norway)大鼠作为供者,Lewis大鼠作为受者,通过肾动脉内套法吻合、肾静脉cuff管套法吻合、输尿管膀胱植入式吻合建立移植肾急性排斥反应模型。根据处理方案不同,将受体大鼠随机分成如下两组:①实验组:行肾移植术后建立模型于当天(0天)、术后2、4、6、8天予受体经腹腔注射抗大鼠delta-like 1单克隆抗体250μg;②对照组:行肾移植术后建立模型于当天(0天)、术后2、4、6、8天予受体经腹腔注射同等剂量生理盐水。实验组和对照组再分成2个亚组,一个亚组于7天术后处死,切取移植肾行病理形态学检查,同时下腔静脉取血ELISA法检测Th1/Th2型细胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ、IL-10等的含量;另一个亚组用于观察移植肾存活时间(从肾移植到移植受体大鼠停止排尿的时间为移植肾存活时间),同时于术后0、3、5、7天尾静脉取血检测移植受体血肌酐及尿素氮含量变化。结果:经过delta-like 1单克隆抗体处理的受体大鼠移植肾平均存活时间为9.83±0.47d,而对照组平均生存时间为7.83±0.31d,差异有意义(Pdelta-like 1单克隆抗体治疗使大鼠移植肾存活时间延长、减少移植肾炎症细胞浸润的情况、保护移植肾功能,而该效应可能与Th1/Th2型细胞因子向Th2偏离有关。

关键词： delta-like1 急性排斥反应肾移植细胞因子

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DLL1在骨形态形成蛋白9诱导骨髓间充质干细胞成骨分化中的作用

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第三军医大学学报 2016年第1期38卷 38-43页

作者：廉静杨伦韵曹俊杰罗进勇何百成唐敏重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016 重庆医科大学生物化学与药理学重点实验室重庆2400016

目的探讨Notch配体delta-like1(DLL1)在骨形态形成蛋白9(bone morphogenetic proteins 9,BMP9)诱导的骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成骨分化中的作用及机制。方法利用DLL1重组腺病毒上调永生化小鼠胚胎成纤维细胞(immortalized mouse embryonic fibroblasts,i MEF)中DLL1 mRNA的表达,分别采用细胞化学染色、活性测定对早期成骨指标碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和晚期成骨指标钙盐沉积的影响;其次裸鼠皮下异位成骨实验进一步了解DLL1的体内成骨作用;最后用qRT-PCR、Western blot和荧光素酶检测DLL1对BMP9经典信号通路中Ⅰ型受体、Smad1/5/8磷酸化和Smad结合元件(smad-binding element,SBE)转录活性影响。结果与对照组相比,DLL1在体外能明显促进BMP9诱导的MSCs早期成骨指标ALP活性和晚期成骨指标钙盐沉积的生成;同时也能明显促进BMP9诱导的MSCs裸鼠皮下异位成骨作用;BMP9信号通路中ALK2表达明显增加,而对ALK1则没有影响;Smad1/5/8蛋白量没有明显变化,而p-Smad1/5/8蛋白及SBE活性明显增加(P1可以促进BMP9诱导的MSCs成骨分化,可能通过影响BMP9信号通路来实现其促成骨作用。

关键词：间充质干细胞 delta-like1 骨形态发生蛋白9 Notch信号通路

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