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免疫学杂志 2007年第4期23卷 413-415页

作者：喻召才刘文超刘都户范黎第四军医大学西京医院肿瘤科西安710032

目的探讨Notch配体delta-1在髓系造血细胞分化过程中对膜结合和可溶性IL-6受体所介导信号的调节作用。方法分离正常脐血单核细胞,然后利用CD34免疫磁珠试剂盒和FACSVantage流式细胞仪从所获单核细胞中拣选CD34+CD38-细胞;将CD34+CD38-... 详细信息

目的探讨Notch配体delta-1在髓系造血细胞分化过程中对膜结合和可溶性IL-6受体所介导信号的调节作用。方法分离正常脐血单核细胞,然后利用CD34免疫磁珠试剂盒和FACSVantage流式细胞仪从所获单核细胞中拣选CD34+CD38-细胞;将CD34+CD38-细胞利用SCF、Flt3L、TPO和IL-3(4GFs)培养7 d,用CD36免疫磁珠试剂盒分离掉培养细胞中的CD36+红系祖细胞,然后用FACSVantage流式细胞仪将细胞再次拣选出CD15-CD14-CD1a-IL-6R+表型的细胞,将这种表型的细胞用含有4GFs、4GFs+IL-6或4GFs+FP6培养基在有或无delta-1存在的条件下进行培养11 d,并对CD15+粒细胞、CD14+单核细胞和CD14-CD1a+树突状细胞进行计数。结果发现所有CD15、CD14或CD1a阳性的细胞均表达IL-6R;IL-6和FP6可促进CD15+细胞的分化;delta-1在无IL-6和FP6存在时对CD15+细胞的分化表现出轻度的抑制作用;在IL-6和FP6存在时对CD15+粒细胞的分化表现出明显的抑制作用;相反,IL-6和FP6抑制CD14-CD1a+细胞的分化,而delta-1促进CD14-CD1a+细胞的分化。结论delta-1可通过抑制mIL-6R-和sIL-6R所介导的IL-6生物学效应抑制IL-6R+髓系祖细胞分化为粒细胞和单核细胞,但促进其分化为树突状细胞。

关键词： Notch 配体 delta-1 髓系祖细胞白细胞介素6受体

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Notch配体delta-1基因真核表达载体的构建

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中国老年学杂志 2015年第11期35卷 2898-2900页

作者：李伟胡红梅陈彩芬黄玉珊井冈山大学临床医学院口腔系江西吉安343000 井冈山大学医学院基础部

目的利用基因工程技术克隆delta-1结构基因,构建delta-1基因真核表达载体。方法通过Genbank公布的delta-1基因的序列分析,设计合适的酶切位点,将delta-1基因定向克隆到真核表达载体pc DNA3.1中,完成delta-1真核表达载体构建,并用生物学... 详细信息

目的利用基因工程技术克隆delta-1结构基因,构建delta-1基因真核表达载体。方法通过Genbank公布的delta-1基因的序列分析,设计合适的酶切位点,将delta-1基因定向克隆到真核表达载体pc DNA3.1中,完成delta-1真核表达载体构建,并用生物学软件对delta-1基因序列测定及分析。结果经酶切将delta-1基因定向克隆到真核表达载体pc DNA3.1中,序列分析结果表明,pc DNA3.1-delta-1基因序列与Genbank delta-1序列相比,氨基酸编码是相同的。结论成功构建了delta-1基因真核表达载体。

关键词： delta-1 构建载体

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rhBMP-2和delta-1对人牙髓干细胞分化影响的实验研究

rhBMP-2和Delta-1对人牙髓干细胞分化影响的实验研究

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作者：于娜第三军医大学

学位级别：硕士

牙髓干细胞是存在于牙髓组织中具有干细胞性质的未分化间充质细胞,具有多向分化潜能,可形成功能性成牙本质细胞和牙本质。 Notch受体、配体在牙齿发育早期有表达,在正常牙髓组织中Notch受体不表达,而当成年牙髓损伤后早期其配体delta-1... 详细信息

牙髓干细胞是存在于牙髓组织中具有干细胞性质的未分化间充质细胞,具有多向分化潜能,可形成功能性成牙本质细胞和牙本质。 Notch受体、配体在牙齿发育早期有表达,在正常牙髓组织中Notch受体不表达,而当成年牙髓损伤后早期其配体delta-1表达上调,揭示Notch信号参与了牙髓损伤修复过程,并且delta-1在牙髓干细胞分化中也起重要作用。BMPs属于TGF-β超家族成员,有多种BMPs参与了牙齿的发育。其中BMP-2主要存在于未分化的造牙本质细胞中,并且参与了牙齿形态的早期形成,并在成牙本质细胞的分化形成中起重要的调控作用,其基因的转录在早期的牙胚上皮和后来的成牙本质细胞中都有发现。另外,研究表明BMP-2参与体内牙髓组织损伤修复过程,且在体外可通过调节细胞的增殖状态,促进牙髓细胞ALP合成等作用,诱导牙髓细胞向成牙本质细胞分化。Notch通路和BMPs信号同为调控细胞增殖、分化的关键信号,其作用存在交叉点。 rhBMP-2对牙髓干细胞自身delta表达以及二者共同作用对牙髓干细胞分化有何影响?目前有关这一问题的研究报道较少。本课题在对人牙髓干细胞体外分离、培养和鉴定的基础上,进一步研究分析rhBMP-2和delta与人牙髓干细胞分化的关系,为探讨影响人牙髓干细胞分化的因素提供参考依据。目的研究rhBMP-2对DPSCs分化及delta表达的影响,并进一步研究rhBMP-2和delta-1共同作用对牙髓干细胞分化的影响。方法 1.细胞培养与鉴定:牙髓干细胞来源于临床上因正畸或阻生而拔除的健康牙齿,采用酶消化法分离获得并常规原代及传代培养;观察细胞生长状态、形态及其变化;细胞克隆形成率;免疫荧光、免疫组化及RT-PCR法检测细胞表型。 2.细胞分化的检测:为检测rhBMP-2对牙髓干细胞ALP活性的影响,取第5代牙髓干细胞,按以下分组:空白对照组,25,50,100ng/ml rhBMP-2组,分别在培养的第7,14,21天采用ALP活性测定试剂盒进行检测。rhBMP-2作用于牙髓干细胞后RT-PCR检测DSPP表达的情况;Western blot方法检测连续培养第7、14、21天delta表达情况。为检测rhBMP-2和delta-1联合应用对人牙髓干细胞分化的影响,用含delta-1质粒转染COS7细胞,从而在培养液中获得含deltal-Fc融合蛋白。取第5代牙髓干细胞,按以下分组:空白对照组,rhBMP-2、delta-1以及二者联合作用组,在连续作用的第7、14、21d检测细胞碱性磷酸酶活性。结果: 1.连续培养的人牙髓干细胞增殖快,细胞呈集落状生长,克隆形成率为4-35个/10细胞,采用免疫组化染色及RT-PCR方法显示细胞表达vimentin、GFAP、nestin、osteocalcin、Ⅲ型胶原,免疫荧光法显示细胞表达STRO-1。 ***-2作用组ALP活性明显高于空白对照组(P＜0.01),并检测出本实验所用rhBMP-2最佳作用浓度为50ng/ml,RT-PCR检测rhBMP-2作用后细胞有DSPP表达。Western-blot检测在细胞生长第21天rhBMP-2刺激组delta表达高于对照组(P＜0.05)。 ***-2和delta-1联合作用组ALP活性明显高于对照组及二者单独作用组(P＜0.01)。结论: ***-2可明显增强牙髓干细胞的ALP活性,促进人牙髓干细胞向成牙本质细胞分化。 ***-2可促进人牙髓干细胞Notch配体delta的表达。 ***-2和delta-1之间存在相互协同作用,可明显增强人牙髓干细胞ALP活性。

关键词：牙髓干细胞细胞分化骨形成蛋白2 delta-1

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Notch配体delta-1对人牙髓干细胞体外增殖的影响

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牙体牙髓牙周病学杂志 2005年第8期15卷 435-438页

作者：何飞杨峥嵘谭颖徽第三军医大学附属新桥医院 400037 第三军医大学复合伤研究所四川重庆400038

目的:探讨Notch配体delta-1对人牙髓干细胞(dentalpulpstemcells,DPSCs)体外增殖活性的影响。方法:用delta-1-EGFP重组逆转录病毒感染培养的人牙髓干细胞,获得稳定高表达人delta-1蛋白的人牙髓干细胞系;利用CFU-F计数、四唑盐(MTT)比色... 详细信息

目的:探讨Notch配体delta-1对人牙髓干细胞(dentalpulpstemcells,DPSCs)体外增殖活性的影响。方法:用delta-1-EGFP重组逆转录病毒感染培养的人牙髓干细胞,获得稳定高表达人delta-1蛋白的人牙髓干细胞系;利用CFU-F计数、四唑盐(MTT)比色法及流式细胞仪等方法检测delta-1基因转导人牙髓干细胞的克隆形成率、细胞生长曲线和细胞周期变化。结果:与正常牙髓干细胞相比,delta-1转导人牙髓干细胞的CFU-F计数为62～89clones/103cell,约为前者的10倍;接种1～7d,转导细胞的活细胞数量增加显著;S期细胞比例及增殖指数,分别从转导前的20.6%和35.8%提高到63.8%和75.7%。结论:Notch配体delta-1可显著促进人牙髓干细胞的体外增殖,Notch-delta-1信号转导途径在人牙髓干细胞的自我更新中起重要作用。

关键词： Notch delta-1 牙髓干细胞增殖

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