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Dendritic cells engineered to secrete anti-Dc R3 antibody augment cytotoxic T lymphocyte response against pancreatic cancer in vitro

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World Journal of Gastroenterology 2017年第5期23卷 817-829页

作者： Jiang Chen Xiao-Zhong Guo Hong-Yu Li Jia-Jun Zhao Wen-Da Xu Department of Gastroenterology Shenyang General Hospital of PLAShenyang 110016Liaoning ProvinceChina

AIM To investigate the enhanced cytotoxic T lymphocyte responses against pancreatic cancer(PC) in vitro induced by dendritic cells(DCs) engineered to secrete anti-dcr 3 monoclonal antibody(mA b).METHODS DCs, T lymphocytes and primary PC cells were obtained from PC patients. DCs were transfected with a designed humanized anti-Dc R3 monoclonal antibody heavy and light chain m RNA and/or total tumor RNA(DC-tumor-anti-Dc R3 RNA or DC-total tumor RNA) by using electroporation technology. The identification, concentration and function of anti-dcr 3 mA b secreted by DC-tumor-anti-Dc R3 RNA were determined by western blotting and enzyme-linked immunosorbent assay. After co-culturing of autologous isolated PC cells with target DCs, the effects of secreting anti-dcr 3 mA b on RNA-DCs' viability and apoptosis were assessed by MTT assay and flow cytometry. Analysis of enhanced antigen-specific immune response against PC induced by anti-dcr 3 mA b secreting DCs was performed using a 51 Cr releasing test. T cell responses induced by RNAloaded DCs were analyzed by measuring cytokine levels, including IFN-γ, IL-10, IL4, TNF-α and IL-12.RESULTS The anti-Dc R3 m Ab secreted by DCs reacted withrecombinant human Dc R3 protein and generated a band with 35 k Da molecular weight. The secreting m Ab was transient, peaking at 24 h and becoming undetectable after 72 h. After co-incubation with DCtumor-anti-Dc R3 RNA for designated times, the Dc R3 level in the supernatant of autologous PC cells was significantly down-regulated(P 3 m Ab could improve cell viability and slow down the apoptosis of RNA-loaded DCs, compared with DC-total tumor RNA(P 3 m Ab secreted by DC-tumor-anti-Dc R3 RNA could enhance the induction of cytotoxic T lymphocytes(CTLs) activity toward RNA-transfected DCs, primary tumor cells, and PC cell lines, compared with CTLs stimulated by DC-total tumor RNA or control group(P < 0.05). Meanwhile, the antigen-specific CTL responses were MHC class I-restricted. The CD4+ T

关键词：树枝状的房间编码抗体的 RNA Dcr3 细胞毒素的 T 淋巴细胞反应胰腺的癌症

血清Dcr3水平与急性脑梗死患者预后的相关性研究

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血清DcR3水平与急性脑梗死患者预后的相关性研究

作者：张航宁夏医科大学

学位级别：硕士

目的:通过检测急性脑梗死患者血清中Dcr3(Decoy Receptor 3)的水平,研究血清Dcr3水平与急性脑梗死的关系,评估Dcr3对急性脑梗死患者预后的预测价值,为寻找与急性脑梗死预后相关的标记物提供临床证据。方法:选取2021年5月至2021年9月宁... 详细信息

目的:通过检测急性脑梗死患者血清中Dcr3(Decoy Receptor 3)的水平,研究血清Dcr3水平与急性脑梗死的关系,评估Dcr3对急性脑梗死患者预后的预测价值,为寻找与急性脑梗死预后相关的标记物提供临床证据。方法:选取2021年5月至2021年9月宁夏医科大学总医院神经内科收治的急性脑梗死患者61例,同期健康体检人员32例作为对照组。所有急性脑梗死患者均符合《中国急性缺血性脑卒中诊治指南2018》的诊断标准。入院后采集患者相关临床资料,收集发病24小时内空腹血清,同时收集对照组空腹血清。采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)分别测定两组的血清Dcr3水平。发病3个月后回访患者并记录改良Rankin评分(m RS),依据评分情况分为预后良好(m RS≤2分)和不良组(m RS>2分),对比两组之间Dcr3水平及临床相关资料进行研究分析。两组间进行单因素分析,并将所得出差异具有统计学意义的因素纳入二元Logistic回归分析,并评价Dcr3对预后的预测价值。结果:1.急性脑梗死患者血清Dcr3水平高于对照组,差异有统计学意义(PDcr3水平低于预后不良组(m RS>2分),差异有统计学意义(PDcr3为影响急性脑梗死预后的独立危险因素,OR值=1.05,95%CI(1.001-1.102),P3.Dcr3对预后的预测价值绘制ROC曲线:Dcr3曲线下面积(AUC)为0.674(95%Cl:0.526,0.822,P=0.033),其最佳预测浓度临界值为:270.32pg/m L。灵敏度:58.9%、特异性:73.5%。4.按颈动脉狭窄情况分组,狭窄组血清Dcr3水平高于无狭窄组,两组对比差异具有统计学意义(PDcr3水平的相关性分析结果显示:Dcr3与发病后3个月时m RS评分值呈正相关(r=0.356,P=0.005);Dcr3与NIHSS评分值呈正相关(r=0.369,P=0.003)。Dcr3与颈内动脉虹吸段钙化积分呈正相关(r=0.272,P=0.034);Dcr3水平与颈动脉内-中膜厚度呈正相关(r=0.295,P=0.021)。结论:1.急性脑梗死患者发病24小时内血清Dcr3水平升高。2.预后不良组血清Dcr3水平明显高于预后良好组,血清Dcr3是影响急性脑梗死患者预后的独立危险因素。3.急性脑梗死患者血清Dcr3水平对预后具有一定的预测作用。

关键词：急性脑梗死 Dcr3 血清预后

宫颈癌组织Dcr3的表达与高危型人乳头状瘤病毒感染的相关性研究

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中华疾病控制杂志 2019年第1期23卷 85-89页

作者：韩晶苗卉冯向先长治医学院附属和平医院生殖科长治046000 长治医学院预防医学系长治046000

目的观察宫颈癌组织诱捕受体3(decoy receptor 3,Dcr3)表达与高危型人乳头状瘤病毒(high-risk human papilloma virus,HR-HPV)感染的相关性。方法分别采用免疫组织化学(streptavidin-perosidase,SP)法和第2代杂交捕获法检测35例正常宫颈组织(normal cervical tissues,NCE)、39例宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasm,CIN)及44例宫颈癌组织(cervical squamous epithelial carcinoma,CSES) Dcr3和HR-HPV的表达。设计并合成靶向HR-HPV16E7基因的HR-HPV16 E7小干扰RNA(siRNA)和阴性对照HR-HPV16 E7 siRNA,脂质体法转染SiHa细胞,实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)法和蛋白质印迹(western blot,WB)法检测HR-HPV16 E7基因沉默对Dcr3 mRNA和蛋白表达的影响,四甲基偶氮唑盐比色(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)法检测细胞增殖情况。结果NCE、CIN及CSES组Dcr3蛋白阳性表达率分别为8. 6%(3/35)、48. 7%(19/39)、77. 3%(34/44),表达呈逐渐增高趋势,差异具有统计学意义(X^2=36. 942,P 35)、56. 4%(22/39)、93. 2%(41/44),差异具有统计学意义(X^2=60. 322,P Dcr3表达与HR-HPV感染呈正相关(r=0. 893,P=0. 004)。HR-HPV基因沉默后Dcr3在mRNA和蛋白水平的表达均明显降低,且细胞增殖受到抑制。结论 Dcr3在宫颈癌中异常高表达,其表达升高与HR-HPV感染密切相关,提示Dcr3可能参与了宫颈癌的发生发展。siRNA技术成功诱导HR-HPV基因沉默可通过下调Dcr3的表达抑制人宫颈癌Si Ha细胞增殖。

关键词：宫颈癌 Dcr3 人乳头瘤状病毒

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Dcr3对肝纤维化动物模型的影响

中国免疫学杂志 2016年第11期32卷 1589-1592页

作者：潘留兰贾胜男张倩柳思琪邵雪金珍婧吉林大学第二医院肝胆胰内科长春130041

目的：研究Dcr3基因对肝纤维化大鼠的预防性治疗的作用。方法：SPF级健康雄性Wistar大鼠30只,体重范围180~220g,随机分为3组,每组10只,分别为正常对照组、Dcr3基因预防性治疗组（1%DMN＋Dcr3组）、造模组（1%DMN组）。采用1%DMN诱导大... 详细信息

目的：研究Dcr3基因对肝纤维化大鼠的预防性治疗的作用。方法：SPF级健康雄性Wistar大鼠30只,体重范围180~220g,随机分为3组,每组10只,分别为正常对照组、Dcr3基因预防性治疗组（1%DMN＋Dcr3组）、造模组（1%DMN组）。采用1%DMN诱导大鼠肝纤维化模型,腹腔注射Dcr3质粒进行预防性干预。分别采用HE染色和Masson染色观察肝组织病理情况;qRT-PCR和Western blot法检测Dcr3、Fas、FasL、α-SMA和TGF-β1的mRNA和蛋白表达水平。结果：与模型组相比,Dcr3预防治疗组大鼠肝组织炎性细胞浸润及胶原类物质沉积有所改善;Dcr3基因可显著降低肝纤维化大鼠Fas、FasL、α-SMA和TGF-β1 mRNA和蛋白表达水平,Dcr3基因预防性治疗组与对照组和造模组有显著性差异（P〈0.05）;同时Dcr3基因预防性治疗组Dcr3 mRNA和蛋白表达水平显著升高（P〈0.05）。结论：Dcr3基因可有效防治大鼠肝纤维化,其作用机制可能是Dcr3通过降低肝脏炎症反应,减少胶原类物质沉积,抑制α-SMA和TGF-β1表达,从而抑制HSC活化;下调Fas和FasL表达,抑制Fas/FasL途径诱导的肝细胞凋亡。

关键词： Dcr3 肝纤维化 Fas/FasL α-SMA TGF-β1

宫颈癌组织中Dcr3表达与外周血T细胞亚群的相关性研究

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免疫学杂志 2015年第3期31卷 246-249页

作者：王凤杰王科坤陈显兵向海付桑才艺刘锦红刘昕湖北民族学院科技学院恩施445000 湖北民族学院医学院恩施445000 恩施州疾控中心 445000 民大医院病理科

目的探讨宫颈癌组织中诱骗受体3(Dcr3)表达与外周血T细胞亚群之间的相关性。方法免疫组织化学法检测宫颈上皮内瘤变(CIN)、宫颈癌(CC)及正常宫颈组织中Dcr3表达情况,并检测宫颈癌组织中实质及间质内T细胞表面抗原CD3、CD4、CD8阳性细胞... 详细信息

目的探讨宫颈癌组织中诱骗受体3(Dcr3)表达与外周血T细胞亚群之间的相关性。方法免疫组织化学法检测宫颈上皮内瘤变(CIN)、宫颈癌(CC)及正常宫颈组织中Dcr3表达情况,并检测宫颈癌组织中实质及间质内T细胞表面抗原CD3、CD4、CD8阳性细胞数量;应用流式细胞术分析患者外周血中CD3+、CD4+、CD8+T数量变化情况,分析研究宫颈癌组织中Dcr3表达与患者外周血T细胞亚群之间的相关性。结果 Dcr3表达强度与宫颈病变严重程度有关;宫颈癌患者外周血中T细胞数明显降低,且宫颈组织中Dcr3表达与患者外周血中CD3+T、CD4+/CD8+呈负相关;宫颈癌变后实质内T细胞数明显减少,T细胞主要聚集于肿瘤间质内。结论 Dcr3参与了宫颈癌细胞免疫逃逸,外周血T细胞亚群联合Dcr3检测可作为宫颈癌免疫诊断指标,为患者免疫治疗提供基础。

关键词：宫颈癌 Dcr3 免疫逃逸 T细胞

Dcr3在肝细胞癌免疫逃逸中分子机制的研究

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DcR3在肝细胞癌免疫逃逸中分子机制的研究

作者：张营慧新乡医学院

学位级别：硕士

背景肝细胞癌（Hepatocellular Carcinoma,HCC）是我国最常见的恶性肿瘤之一,占我国肿瘤死因的第二位。目前对HCC发生发展的分子机制研究,特别是HCC如何使机体免疫系统受损、如何抑制免疫功能使HCC免疫逃逸还有待于进一步深入研究。Dcr3... 详细信息

背景肝细胞癌（Hepatocellular Carcinoma,HCC）是我国最常见的恶性肿瘤之一,占我国肿瘤死因的第二位。目前对HCC发生发展的分子机制研究,特别是HCC如何使机体免疫系统受损、如何抑制免疫功能使HCC免疫逃逸还有待于进一步深入研究。Dcr3（decoy receptor 3,诱骗受体3,又称TNFRSF6B/TR6）,是近年来被研究者们发现的一种新型肿瘤坏死因子受体,其编码的基因在20q13.3,mRNA长1.2kb。Dcr3由271个主要氨基酸残基结合组成,氨基酸残基在细胞序列中通常缺乏一个可以跨细胞膜的结构域,是一种分泌型细胞因子。研究显示Dcr3在大多数的癌组织中高表达,且可以多种方法诱导肿瘤细胞免疫逃逸。因此,理解肝癌与免疫系统之间的关系,阐释肝癌免疫逃逸的机制,对于研究肝癌发生发展规律及进一步提出抗肿瘤免疫治疗具有非常重要的意义。目的检测Dcr3在HCC的肿瘤组织和癌旁组织以及在T淋巴细胞中的表达情况,寻找Dcr3所结合T细胞的亚型,探究Dcr3调控T细胞所利用的信号通路。以期为HCC的免疫治疗提供新靶点及新思路。方法1.采用免疫组织化学染色法（Immunohistochemistry,IHC）通过检测Dcr3在不同HCC肿瘤患者的癌组织和癌旁组织中的表达,并综合分析正常组织与癌中的表达差异性,以及Dcr3的表达水平与肿瘤患者的性别、年龄、分化程度、有无淋巴结转移等相关临床病理参数的关系。2.利用蛋白质免疫印记法（Western blotting,WB）实验检测Dcr3在肝癌细胞株中的表达和在NF-kB信号通路中相关蛋白的表达。3.绘制细胞增殖毒性检测（Cell Counting Kit-8,CCK-8）标准曲线;采用Transwell实验观察肝癌细胞分泌的Dcr3对T淋巴细胞的迁移能力的影响。4.利用蛋白质免疫沉淀（Immunoprecipitation,IP）实验方法分析Dcr3互相作用的蛋白。5.利用免疫荧光（Immunofluoresceence,IF）实验方法检测Dcr3在T淋巴细胞中的定位。结果1.Dcr3在肝癌组织中的表达情况:免疫组织化学染色显示肝癌细胞胞浆为阳性,统计学表示肝癌组织与癌旁组织的表达具有差异性（P＜0.05）。2.WB实验检测Dcr3在T淋巴细胞中的表达:T淋巴细胞经过Dcr3因子刺激后,在0.15ug/ml、48h的条件下表达最佳。3.Transwell实验结果:用Dcr3因子诱导和肝细胞癌细胞株诱导,T淋巴细胞迁移的细胞数量都比对照组和Dcr3抗体诱导的多,数据统计分析具有差异性（P＜0.05）。4.IP实验结果:肝细胞癌细胞分泌的Dcr3可以拉下LIGHT蛋白。5.IF实验结果:Dcr3和LIGHT均可结合在T淋巴细胞表面。6.WB实验检测NF-kB信号通路中重要蛋白的结果:与NC组相比,Dcr3因子刺激组P65的表达水平低,P-P65的表达高（P＜0.05）。肝癌细胞HepG-2、Huh-7与T淋巴细胞共培养组与对照组相比,肝癌细胞共培养组中P65、P-P65的表达水平较高（P65:HepG-2:P＜0.05、Huh-7:P＜0.01;P-P65:HepG-2:P＜0.01、Huh-7:P＜0.05）。肝癌细胞HepG-2、Huh-7与T淋巴细胞共培养组与Dcr3因子刺激组相比,共培养组中P65的表达高（HepG-2:P＜0.05、Huh-7:P＜0.01）,而P-P65的表达无统计学意义（P＞0.05）。肝癌细胞HepG-2、Huh-7与T淋巴细胞共培养组与Dcr3Ab组相比,共培养组中P65、P-P65的表达均高（P65:HepG-2:P＜0.05、Huh-7:P＜0.01;P-P65:HepG-2:P＜0.01、Huh-7:P＜0.01）。结论1.Dcr3在肝细胞癌组织中高表达,肝细胞癌细胞分泌的Dcr3增强T淋巴细胞的迁移能力且可以激活NF-kB信号通路。2.Dcr3可以与LIGHT相互作用,且均可结合于T淋巴细胞表面。

关键词： Dcr3 肝细胞癌 NF-kB信号通路迁移

Dcr3、ALT与AFP联合检测对肝细胞癌的诊断价值

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中国科技期刊数据库医药 2023年第2期 0085-0089页

作者：赵静静陶勇良上海市松江区中心医院检验科上海201600

探讨血清诱骗受体3(decoy receptor,Dcr3)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)和甲胎蛋白(alpha fetoprotein ,AFP)联合检测对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的临床诊断价值。方法选取127例临床诊断为HCC的患者作为研究对象(HCC组)。采用ELISA检测Dcr3,全自动生化分析检测ALT、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST),γ-谷氨酰胺转移酶(γ–glutamyl transpeptidase,γ-GGT)), 总蛋白(Total protein,TP),白蛋白(AlbuminALB)及AFP化学发光法测定的水平。采用受试者工作曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)曲线分析Dcr3及相关实验室指标对HCC患者的诊断价值。比较两组间的差异采用t检验,PDcr3、AFP 、ALT、AST、GGT的检测水平明显高于对照组(P Dcr3、ALT和AFP联合检测对HCC的诊断灵敏度为96.3%,而单项检测的诊断敏感性分别为85.2%、92.6%和81.5%。结论Dcr3、ALT和AFP联合检测提高了HCC的诊断敏感性,升高的Dcr3对HCC可能具有很重要的诊断价值。

关键词：肝细胞癌 Dcr3 AFP

Dcr3在预防博莱霉素大鼠模型发生肺纤维化中的作用

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中国老年学杂志 2014年第9期34卷 2462-2465页

作者：杨洋任锦刘晶马忠森天津市胸科医院天津130051 吉林大学第二医院

目的探讨Dcr3在预防博莱霉素大鼠模型发生肺纤维化中的作用。方法采用博莱霉素复制肺纤维化动物模型。分为正常对照组、博莱霉素组、博莱霉素+Dcr3组,给药时间2 w,各组分别于2、4、6、8 w处死大鼠6只,收集肺泡灌洗液的细胞和上清检测细... 详细信息

目的探讨Dcr3在预防博莱霉素大鼠模型发生肺纤维化中的作用。方法采用博莱霉素复制肺纤维化动物模型。分为正常对照组、博莱霉素组、博莱霉素+Dcr3组,给药时间2 w,各组分别于2、4、6、8 w处死大鼠6只,收集肺泡灌洗液的细胞和上清检测细胞因子含量。左肺组织冻存留作羟脯氨酸检测;右肺组织固定用作组织染色。结果博莱霉素+Dcr3组肺泡炎的程度表现为逐渐减轻的过程,炎症程度均低于BL组(PDcr3组肺纤维化程度无明显加重趋势,与对照组比较差异显著(PDcr3的早期应用,可减轻博莱霉素大鼠模型肺的的局部炎症,可能在一定程度上达到预防肺纤维化形成的目的。

关键词： Dcr3 炎症肺纤维化

Dcr3在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义

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中国细胞生物学学报 2013年第12期35卷 1772-1778页

作者：赖永锋邢萍徐锦叶权明明金晓燕杨晶金张强梁勇温州医科大学第一临床学院温州325000 台州学院附属市立医院肿瘤外科台州318000 台州学院医学院台州318000

应用RT-PCR、Western blot、免疫组化分别检测甲状腺乳头状癌组织与癌旁正常甲状腺组织标本中Dcr3 mRNA及蛋白的表达情况,探讨Dcr3在甲状腺乳头状癌组织中的表达及临床意义。RT-PCR检测显示,甲状腺乳头状癌中Dcr3 mRNA的表达明显高于正... 详细信息

应用RT-PCR、Western blot、免疫组化分别检测甲状腺乳头状癌组织与癌旁正常甲状腺组织标本中Dcr3 mRNA及蛋白的表达情况,探讨Dcr3在甲状腺乳头状癌组织中的表达及临床意义。RT-PCR检测显示,甲状腺乳头状癌中Dcr3 mRNA的表达明显高于正常甲状腺组织(PDcr3蛋白在甲状腺乳头状癌中表达比正常甲状腺组织高(PDcr3蛋白在甲状腺乳头状癌中高表达(PDcr3 mRNA及蛋白质在甲状腺乳头状癌及正常甲状腺组织间的表达差异有统计学意义(PDcr3基因及蛋白在甲状腺乳头状癌中高表达,提示Dcr3可能促进了甲状腺乳头状癌的发生发展。

关键词：甲状腺乳头状癌 Dcr3 肿瘤坏死因子受体