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daam1在肺癌中表达的研究

Daam1在肺癌中表达的研究

作者：段鸿梅中国医科大学

学位级别：硕士

目的 daam1是蓬乱蛋白相关形态形成活化因子1或称形态发生紊乱关联激活因子1,为形成素蛋白家族的成员。daam1是WNT/PCP通路的组成因子之一,此通路参与原肠胚形成以及细胞骨架重排等生理过程,在胚胎癌细胞系F9中,KristiLaMonica等... 详细信息

目的 daam1是蓬乱蛋白相关形态形成活化因子1或称形态发生紊乱关联激活因子1,为形成素蛋白家族的成员。daam1是WNT/PCP通路的组成因子之一,此通路参与原肠胚形成以及细胞骨架重排等生理过程,在胚胎癌细胞系F9中,KristiLaMonica等人观察了壁层内胚层的迁移并证明了PCP通路通过Rho/ROCK调控内胚层细胞的迁移。抑制PCP通路中的daam1的表达不但能够引起迁移细胞数量增加,也能导致细胞定向障碍。有活性的的daam1能够抑制细胞的定向障碍。目前,关于daam1在肺癌组织中的表达与肿瘤的恶性程度,组织学分型及侵袭转移能力之间的关系均不清楚。本研究通过检测肺腺癌、肺鳞癌及癌旁组织中的的daam1的表达情况,分析其与临床病理因素的关系,探讨daam1在肺癌发生发展中的作用。并通过检测不同侵袭能力肺癌细胞系的daam1表达水平,研究它们与组织学分型的关系,进一步验证daam1在肺癌中的表达及与肺癌组织学类型的关系。材料与方法 1、Western Blot 39例新鲜肺癌及相应癌旁组织标本,均取自中国医科大学附属医院2007年-2008年间行外科手术切除的肺癌患者标本。人肺巨细胞癌细胞系BE1（高侵袭能力亚型）、LH7（低侵袭能力亚型）、人肺腺癌细胞系A549,人肺腺癌细胞系SPC、人肺腺癌细胞系LTE及人支气管上皮细胞系HBE,为本实验室冻存。提取组织与细胞的蛋白,采用考马斯亮蓝法进行蛋白定量。取等量蛋白,进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和转印,一抗（anti-daam1 1:200稀释,anti-β-actin 1:500稀释）和辣根过氧化物酶标记二抗（1:2000稀释）孵育,ECL发光。以β-actin为内对照,结果判定为PVDF膜上出现灰色条带,并对条带进行灰度值测定。 2、RT-PCR 37例新鲜肺鳞癌,腺癌,及相应癌旁组织取自中国医科大学附属医院2007年-2008年间手术切除的标本。人肺巨细胞癌细胞系BE1（高侵袭能力亚型）、LH7（低侵袭能力亚型）、人肺腺癌细胞系A549,人肺腺癌细胞系SPC、人肺腺癌细胞系LTE及人支气管上皮细胞系HBE,为本实验室冻存。提取组织与细胞的mRNA,用紫外分光光度计测定RNA的浓度,并用RNAnase flee H20将RNA浓度稀释成500ng/ul后,逆转录获得cDNA,测量并调节cDNA浓度,进行PCR,PCR扩增产物经溴化乙啶（EB）染色,凝胶成像系统（BioImageing System,UVP,CA）下观察。以β-actin为内对照,计算daam1的相对平均表达量。 3、统计分析应用SPSS13.0统计软件分析数据,P＜0.05为有统计学意义。结果 1、daam1在肺癌和癌旁肺组织中的表达对39例新鲜肺鳞癌、腺癌和癌旁组织进行Western Blot分析,结果显示:daam1在肺鳞癌、腺癌和癌旁正常肺组织中均有表达,分子量约为123kDa,但在癌组织中的表达明显高于癌旁组织（P＜0.01）。对37例新鲜肺鳞癌、腺癌和癌旁组织进行RT-PCR分析,结果显示:daam1在肺鳞、腺癌和癌旁正常肺组织中均表达,分子量为235kDa,但在癌组织中的表达明显高于癌旁组织。（P=0.032）。 2、daam1蛋白在肺癌细胞系和人支气管上皮细胞系中的表达 daam1蛋白在5种肺癌细胞系及人支气管上皮细胞系中均表达,但在肺癌细胞系中daam1的蛋白表达量高于正常人支气管上皮细胞,肺巨细胞癌细胞系BE1、LH7、人肺腺癌细胞系LTE的daam1蛋白表达量明显高于人肺腺癌细胞系A549,人肺腺癌细胞系SPC、及人支气管上皮细胞系HBE。经两两比较,BE1、LH7、LTE和HBE之间表达daam1蛋白的差异均具有统计学意义。 3、daam1 mRNA在肺癌细胞系和人支气管上皮细胞系中的表达 daam1mRNA在5种肺癌细胞系及人支气管上皮细胞系中均表达,但在肺癌细胞系中daam1mRNA的表达量高于正常人支气管上皮细胞,以肺巨细胞癌细胞系低侵袭能力亚型LH7 daam1 mRNA表达量最高,其次依次为肺巨细胞癌细胞系高侵袭能力亚型BE1、人肺腺癌细胞系LTE、人肺腺癌细胞系SPC、最后为腺癌细胞系A549和人支气管上皮细胞系HBE。除人肺腺癌细胞系A549与人支气管上皮细胞系HBE表达daam1 mRNA的差异无统计意义（P=0.299）以外,经两两比较,各肺癌细胞系与HBE、以及各种肺癌细胞系之间表达daam1 mRNA的差异均具有统计学意义。然后,我们又采用了倍比稀释的方法进一步验证了daam1 mRNA在各种细胞系中的表达情况。并对肺癌细胞系及人支气管上皮细胞系中表达的daam1 mRNA、

关键词： daam1 肺癌肺癌细胞系

形成素蛋白daam1结合Fascin促进微丝形成和乳腺癌转移的机制研究

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形成素蛋白Daam1结合Fascin促进微丝形成和乳腺癌转移的机制研究

作者：郝雷雨南京医科大学

学位级别：硕士

肿瘤远处转移是临床上肿瘤治疗的最大挑战,也是癌症患者死亡的重要原因。细胞运动是导致癌细胞转移的最基本细胞行为,其依赖于肌动蛋白动力学。肌动蛋白是参与微丝构成的主要蛋白,并在微丝相关蛋白参与或调控下共同完成微丝的组装与解... 详细信息

肿瘤远处转移是临床上肿瘤治疗的最大挑战,也是癌症患者死亡的重要原因。细胞运动是导致癌细胞转移的最基本细胞行为,其依赖于肌动蛋白动力学。肌动蛋白是参与微丝构成的主要蛋白,并在微丝相关蛋白参与或调控下共同完成微丝的组装与解聚。本实验室曾证明形成素蛋白daam1(dishevelled-associated activator of morphogenesis 1)可以调控侵入伪足的延长以及乳腺癌细胞的趋触性。然而,daam1如何参与微丝组装和伪足形成的分子机制仍知之甚少。Fascin是一个重要的束状捆绑蛋白。在乳腺癌细胞MCF-7中,敲降Fascin后,微丝的形态被破坏且数量减少。免疫共沉淀实验显示,daam1与Fascin在细胞外可相互结合。我们收集了100例乳腺癌患者病理标本,通过免疫组化实验检测daam1和Fascin的表达和分布。另外,划痕实验和博伊登小室实验被用来检测乳腺癌细胞的迁移和伪足延伸。免疫荧光实验观察daam1与Fascin是否共定位并共同调节微丝的组装。实验结果显示:1)对比癌旁组织,Fascin在乳腺癌组织中显著高表达;2)敲降Fascin导致乳腺癌细胞的伪足数量减少及细胞运动能力下降;3)daam1可以通过FH结构域(尤其是FH2结构域)与Fascin结合;4)免疫荧光实验证明daam1与Fascin可以部分共定位于微丝,并且daam1或Fascin的敲降会导致二者都无法定位于微丝。本课题的实验结果说明daam1可以特异性的通过FH结构域与Fascin结合,共同促进微丝的组装及乳腺癌细胞的迁移,为深入探讨daam1调节微丝的形成提供了新思路。

关键词： daam1 Fascin 微丝伪足迁移

daam基因家族在胰腺癌中的表达及其与免疫检查点的相关性

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南京医科大学学报（自然科学版） 2022年第12期42卷 1681-1686页

作者：梅杰许隽颖顾丁一王惠宇刘超英南京医科大学附属无锡人民医院肿瘤科江苏无锡214023

目的:探究蓬乱蛋白相关形态形成活化因子(dishevelled-associated activator of morphogenesis,daam)1和daam2在胰腺癌中的表达及临床意义。方法:购买胰腺癌组织芯片(HPanA120Su02),包含66例癌及54例癌旁样本;采用免疫组织化学法检测DA... 详细信息

目的:探究蓬乱蛋白相关形态形成活化因子(dishevelled-associated activator of morphogenesis,daam)1和daam2在胰腺癌中的表达及临床意义。方法:购买胰腺癌组织芯片(HPanA120Su02),包含66例癌及54例癌旁样本;采用免疫组织化学法检测daam1、daam2在胰腺癌及癌旁组织中的表达水平;下载癌症基因组图谱(the Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中daam1、daam2及细胞程序性死亡配体1(programmed cell death ligand 1,PDL1)等免疫检查点分子的表达谱数据;采用t检验、χ~2检验、log-rank检验、相关性分析等统计学方法分别分析daam1、daam2在癌与癌旁组织间表达的差异,二者的共表达关系,与临床病理参数、预后的关系,及其与免疫检查点分子表达的相关性。结果:相较于癌旁组织,daam1、daam2在胰腺癌中的表达均显著上调(P 1),且胰腺癌组织中daam1与daam2的表达呈显著正相关(P 1);daam1表达水平与肿瘤分化程度(P=0.062)和患者生存状态(P=0.061)存在一定相关性,但差异无统计学意义,与其他临床病理参数无显著相关性(P> 0.05),而daam2表达水平与各项临床病理参数均无显著相关性(P> 0.05);TCGA数据库中,daam1及daam2与PDL1等多个免疫检查点的表达呈显著正相关(P 1)。结论:daam1、daam2在胰腺癌中的表达显著上调,与PDL1等免疫检查点的表达呈正相关,可能是胰腺癌发生、发展及免疫逃避的关键调控因素。

关键词： daam1 daam2 胰腺癌预后免疫检查点

形态发生紊乱关联激活因子l和Fascin在乳腺癌组织中的表达及与临床病理参数和预后的关系研究

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中华普通外科学文献（电子版） 2023年第3期17卷 211-216页

作者：邢如温李双进侯勇强魏彦田文娟石家庄市第六医院普外科 050011 石家庄燕赵医院骨外科 050035 保定易县杏林医院骨科 074200 正定县人民医院外科石家庄050800

目的探讨乳腺癌组织中形态发生紊乱关联激活因子l (daam1)和Fascin表达的相关性及其与临床病理参数和预后的关系。方法选取2019年1月至2021年12月石家庄市第六医院收治的92例乳腺癌患者作为研究对象。通过免疫组织化学法和实时荧光定... 详细信息

目的探讨乳腺癌组织中形态发生紊乱关联激活因子l (daam1)和Fascin表达的相关性及其与临床病理参数和预后的关系。方法选取2019年1月至2021年12月石家庄市第六医院收治的92例乳腺癌患者作为研究对象。通过免疫组织化学法和实时荧光定量PCR法分别检测乳腺癌组织及相应癌旁组织中daam1和Fascin蛋白及mRNA表达情况,分析daam1和Fascin蛋白表达与乳腺癌临床病理参数的关系;Kaplan-Meier法分析daam1和Fascin表达与乳腺癌预后的关系;daam1和Fascin表达的相关性采用Spearman秩相关或Pearson相关分析。结果乳腺癌组织中daam1、Fascin蛋白阳性率及mRNA表达水平均显著高于癌旁正常组织,差异均有统计学意义(P1)。daam1阳性表达与乳腺癌远处转移显著相关(Pdaam1和Fascin阳性表达组累积无病生存率均显著低于daam1和Fascin阴性表达组,差异有统计学意义(Log-rankχ^(2)=3.883、5.159;P=0.049、0.023)。乳腺癌组织中daam1和Fascin蛋白及mRNA表达均明显正相关(r=0.742、0.689,Pdaam1和Fascin在乳腺癌组织中呈正相关性高表达,均与患者临床病理特征及预后密切相关,可能共同参与了乳腺癌的发生、发展及转移。

关键词：乳腺肿瘤 daam1 Fascin 临床病理参数预后

Wnt/PCP信号通路在大鼠缺氧或炎症诱导肺动脉高压形成的作用

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宁夏医学杂志 2013年第12期35卷 1139-1142页

作者：杨桂兰郑西卫杨艳娟訾瑞程德云宁夏医科大学总医院呼吸内科宁夏银川750004 四川大学华西医院呼吸内科四川成都610041

目的探讨Wnt/PCP信号通路在大鼠缺氧或炎症诱导肺动脉高压形成过程中的作用机制。方法将40只雄性SD大鼠,分为对照组、低氧组、百合碱组、低氧+百合碱组,测大鼠平均肺动脉压力(MPAP),右心室肥厚指数(RVHI)肺小动脉相应管壁中膜厚度占其... 详细信息

目的探讨Wnt/PCP信号通路在大鼠缺氧或炎症诱导肺动脉高压形成过程中的作用机制。方法将40只雄性SD大鼠,分为对照组、低氧组、百合碱组、低氧+百合碱组,测大鼠平均肺动脉压力(MPAP),右心室肥厚指数(RVHI)肺小动脉相应管壁中膜厚度占其管径的百分比(WT%);采用RT-PCR法,从基因水平观察Wnt11、Wnt5a、Dvl-3、daam1以及Rho A在缺氧或炎症诱导肺动脉高压形成大鼠肺组织中的表达情况。结果低氧组、百合碱组及低氧+百合碱组大鼠的MPAP与对照组比较差异有统计学意义(P0.05),低氧组与低氧+百合碱组的RVHI比较无统计学意义(P=0.761);3组的WT%与对照组比较均显著升高(P11、Wnt5a、Dvl-3、daam1、Rho A、mRNA,在低氧组、百合碱组及低氧+百合碱组的表达较对照组均显著下调(P11、Dvl-3、daam1、Rho A、mRNA,表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论在缺氧或炎症诱导肺动脉高压形成的过程中Wnt11、Wnt5a、Dvl-3、daam1以及RHOA均处于下调,提示Wnt/PCP信号通路在缺氧或炎症诱导肺动脉高压形成的过程中具有一定的作用,但其作用可能受到某种机制的抑制。

关键词： Wnt5a Wnt11 Dvl-3 daam1 Rho A Wnt PCP信号通路低氧炎症肺动脉高压