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DUSP1通过AMPK/mTOR/ULK1信号通路介导BCG诱导的巨噬细胞自噬

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免疫学杂志 2022年第12期38卷 1013-1020,1029页

作者：刘占有戴帆王健宏张东涛李武宁夏大学西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室银川750021

目的探讨双特异性磷酸酶1(dual-specificity phosphatase-1,DUSP1)对卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin,BCG)感染引起的THP-1巨噬细胞自噬的调控作用。方法利用小干扰RNA技术建立DUSP1干扰巨噬细胞模型,BCG感染细胞后,通过Western blot、qRT-PCR、免疫荧光等技术检测DUSP1和自噬相关蛋白LC3-II、Beclin1、ATG5、ATG7、ATG12以及自噬相关信号通路关键蛋白p-AMPK、p-ULK1、p-mTOR的表达水平。结果BCG感染巨噬细胞后,可显著上调DUSP1和LC3-II的表达水平,并呈时间梯度依赖性(P1);与BCG单独感染组相比,si-DUSP1+BCG组自噬相关蛋白LC3-II、Beclin1、ATG5、ATG7和ATG12的表达水平显著降低(P1),自噬流减弱,同时,p-AMPK、p-ULK1的表达显著降低(P1),而p-mTOR的表达水平则显著升高(P1)。结论DUSP1可能通过AMPK/mTOR/ULK1通路促进BCG感染引起的细胞自噬。

关键词：结核分枝杆菌 DUSP1 BCG感染自噬 AMPK/mTOR/ULK1通路

DUSP1在缺氧RAW264.7细胞中的表达及其对炎症免疫反应的调控作用

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第三军医大学学报 2020年第6期42卷 560-567页

作者：董华平刘宝张二龙高钰琪陆军军医大学(第三军医大学)高原军事医学系高原特需药品与器材研究室极端环境医学教育部重点实验室全军高原医学重点实验室重庆400038

目的探讨双特异性磷酸酶1(dual specificity phosphatase-1,DUSP1)在缺氧小鼠RAW264.7巨噬细胞中的表达情况及其在缺氧诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症免疫反应中的调控作用。方法将RAW264.7细胞分别在缺氧(1%O2)条件下培养不同时间(12、24... 详细信息

目的探讨双特异性磷酸酶1(dual specificity phosphatase-1,DUSP1)在缺氧小鼠RAW264.7巨噬细胞中的表达情况及其在缺氧诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症免疫反应中的调控作用。方法将RAW264.7细胞分别在缺氧(1%O2)条件下培养不同时间(12、24和36 h),常氧组在常氧(21%O2)条件下培养;采用RNA干扰技术干扰RAW264.7细胞中DUSP1表达并进行缺氧暴露24 h。收集各对应时间点细胞培养上清液和细胞标本,提取细胞总RNA和总蛋白。使用qRT-PCR检测DUSP1、Il1b、Il10和Tnfa的mRNA表达,采用Western blot检测DUSP1的蛋白表达,采用ELISA检测细胞培养上清液中IL-1β、IL-10和TNF-α的分泌水平。结果与常氧组(缺氧0 h)相比,缺氧暴露后RAW264.7细胞中DUSP1的mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P1b、Il10 mRNA表达均显著升高(P12 h时Tnfa mRNA表达明显降低(P12、24 h和36 h RAW264.7细胞IL-1β的分泌水平明显增加(PDUSP1表达后,缺氧暴露24 h RAW264.7细胞中IL-1β的mRNA表达和分泌水平明显增加(P10的分泌水平明显增加(PDUSP1表达上调,DUSP1通过调节IL-1β、IL-10和TNF-α的表达和/或分泌参与调控缺氧诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症免疫反应。

关键词： DUSP1 缺氧 RAW264.7细胞炎症免疫反应

地红方通过miR-133b/DUSP1/JNK通路干预糖尿病肾病氧化应激损伤

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云南中医中药杂志 2024年第5期45卷 80-84页

作者：林姿何卫东杜思哲福建中医药大学附属人民医院福建福州350004

目的研究地红方对糖尿病肾病细胞模型氧化应激损伤的影响。方法地红方含药血清制备,小鼠肾小球系膜细胞常规培养、传代。按以下分组:对照组(5.5mmol/L葡萄糖+正常血清)、高糖组(30mmol/L葡萄糖+正常血清)、地红方低剂量组(30mmol/L葡萄... 详细信息

目的研究地红方对糖尿病肾病细胞模型氧化应激损伤的影响。方法地红方含药血清制备,小鼠肾小球系膜细胞常规培养、传代。按以下分组:对照组(5.5mmol/L葡萄糖+正常血清)、高糖组(30mmol/L葡萄糖+正常血清)、地红方低剂量组(30mmol/L葡萄糖+5%地红方含药血清)、地红方中剂量组(30mmol/L葡萄糖+10%地红方含药血清)、地红方高剂量组(30mmol/L葡萄糖+20%地红方含药血清)。采用实时荧光定量PCR检测miR-133b、DUSP1 mRNA表达。Western blotting检测DUSP1、p-JNK、Drp1、Fis1蛋白表达。Elisa检测SOD、MDA表达。结果与高糖组比较,地红方组miR-133b、MDA、p-JNK、Drp1、Fis1表达明显下降(PDUSP1、SOD表达显著升高(P133b/DUSP1/JNK通路调控线粒体分裂改善糖尿病肾病氧化应激损伤。

关键词：地红方糖尿病肾病 miR-133b DUSP1 JNK 氧化应激

白藜芦醇通过miR-512-3P/DUSP1轴抑制葡萄膜黑色素瘤细胞的自噬并促进细胞凋亡

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中国药理学通报 2024年第2期40卷 292-298页

作者：孙正杨刘楠楠范学菲陈苏环陈唔奇陈广祎邵玉宝陈晓宇安徽医科大学组织胚胎学教研室安徽合肥230032 中国科技大学医院眼科安徽合肥230002 安徽医科大学临床医学系安徽合肥230032 安徽医科大学形态学实验中心安徽合肥230032

目的探究白藜芦醇(resveratrol,RES)抑制葡萄膜黑色素瘤细胞(choroidal melanoma cells,MUM2B)自噬并促进其凋亡的调控作用及机制。方法将MUM2B分为对照组、实验组,分别用不同浓度的RES(0、10、20、40、60、80μmol·L-1)处理细胞。划... 详细信息

目的探究白藜芦醇(resveratrol,RES)抑制葡萄膜黑色素瘤细胞(choroidal melanoma cells,MUM2B)自噬并促进其凋亡的调控作用及机制。方法将MUM2B分为对照组、实验组,分别用不同浓度的RES(0、10、20、40、60、80μmol·L-1)处理细胞。划痕实验检测细胞迁移率,CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,通过qRT-PCR和Western blot检测miR-512-3P、DUSP1以及其他目的蛋白的表达,RIP实验验证miR-512-3P靶向沉默DUSP1,使用miR-512-3P的mimic,体外评估miR-512-3P的生物学意义。结果RES抑制了MUM2B细胞的增殖与侵袭,减弱细胞自噬,促进细胞凋亡;MUM2B细胞p-ERK、p-MTOR蛋白表达明显增加,miR-512-3P表达增加;过表达miR-512-3P靶向抑制了DUSP1的表达,并促进了MUM2B细胞的凋亡。结论RES通过促进miR-512-3P的表达靶向抑制DUSP1,从而抑制MUM2B的自噬并促进其凋亡。

关键词：葡萄膜黑色素瘤白藜芦醇 miR-512-3P DUSP1 自噬凋亡

Identification of single nucleotide polymorphisms of PIK3R1 and DUSP1 genes and their genetic associations with milk production traits in dairy cows

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Journal of Animal Science and Biotechnology 2020年第1期11卷 9-19页

作者： Bo Han Yuwei Yuan Lijun Shi Yanhua Li Lin Liu Dongxiao Sun Department of Animal Genetics Breeding and ReproductionCollege of Animal Science and TechnologyKey Laboratory of Animal GeneticsBreeding and Reproduction of Ministry of Agriculture and Rural AffairsNational Engineering Laboratory for Animal BreedingChina Agricultural UniversityNo.2 Yuanmingyuan West RoadHaidian DistrictBeijing 100193China Beijing Dairy Cattle Center Beijing 100192China.

Background:Previously,phosphoinositide-3-kinase regulatory subunit 1(PIK3R1)and dual specificity phosphatase 1(DUSP1)were identified as promising candidate genes for milk production traits due to their being differentially expressed between the dry period and the peak of lactation in livers of dairy cows.Hence,in this study,the single nucleotide polymorphisms(SNPs)of PIK3R1 and DUSP1 genes were identified and their genetic associations with milk yield,fat yield,fat percentage,protein yield,and protein percentage,were investigated using 1067 Chinese Holstein cows from 40 sire families.Results:By re-sequencing the entire coding region and 2000 bp of the 5′and 3′flanking regions of the two genes,one SNP in the 5′untranslated region(UTR),three in the 3′UTR,and two in the 3′flanking region of PIK3R1 were identified,and one in the 5′flanking region,one in the 3′UTR,and two in the 3′flanking region of DUSP1 were found.Subsequent single-locus association analyses showed that five SNPs in PIK3 R1,rs42590258,rs210389799,rs208819656,rs41255622,rs133655926,and rs211408208,and four SNPs in DUSP1,rs207593520,rs208460068,rs209154772,and rs210000760,were significantly associated with milk,fat and protein yields in the first or second lactation(P values≤0.0001 and 0.0461).In addition,by the Haploview 4.2 software,the six and four SNPs in PIK3R1 and DUSP1 respectively formed one haplotype block,and the haplotype-based association analyses showed significant associations between their haplotype combinations and the milk traits in both two lactations(P values≤0.0001 and 0.0364).One SNP,rs207593520(T/G),was predicted to alter the transcription factor binding sites(TFBSs)in the 5′flanking region of DUSP1.Further,the dual-luciferase assay showed that the transcription activity of allele T in rs207593520 was significantly higher than that of allele G,suggesting the activation of transcriptional activity of DUSP1 gene by allele T of rs207593520.Thus,the rs207593520 SNP was highlighted as a potential causal mutation that should be further

关键词： Chinese Holstein DUSP1 Genetic association Milk production PIK3R1 SNP

沉默ECEL1对肝癌细胞DUSP1、THBS1、PTEN及EGR1表达的影响

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沉默ECEL1对肝癌细胞DUSP1、THBS1、PTEN及EGR1表达的影响

作者：彭柳南华大学

学位级别：硕士

目的:研究沉默ECEL1对人肝癌细胞（BEL-7404）DUSP1、THBS1、PTEN及EGR1表达的影响。方法:（1）利用ECEL1基因RNA干扰慢病毒感染人肝癌细胞（BEL-7404）,与此同时设立对照组,在荧光显微镜下来观察肝癌细胞的慢病毒感染效率;（2）使用qPC... 详细信息

目的:研究沉默ECEL1对人肝癌细胞（BEL-7404）DUSP1、THBS1、PTEN及EGR1表达的影响。方法:（1）利用ECEL1基因RNA干扰慢病毒感染人肝癌细胞（BEL-7404）,与此同时设立对照组,在荧光显微镜下来观察肝癌细胞的慢病毒感染效率;（2）使用qPCR技术来检测沉默ECEL1后人肝癌细胞（BEL-7404）ECEL1,DUSP1、THBS1、PTEN及EGR1 mRNA的表达水平。（3）使用WB技术检测沉默ECEL1后人肝癌细胞（BEL-7404）DUSP1、THBS1、PTEN及EGR1蛋白质的表达水平。结果:（1）慢病毒感染人肝癌细胞（BEL-7404）72h后,荧光显微镜下显示肝癌细胞状态良好,感染效率达到80%以上;qPCR技术检测结果显示ECEL1基因的沉默率高达84.1%,shECEL1组ECEL1基因的mRNA表达受到显著抑制（p＜0.05）。（2）qPCR技术检测肝癌细胞相关基因mRNA的表达,结果显示:沉默ECEL1后,DUSP1、THBS1、PTEN mRNA表达上调,EGR1 mRNA表达下调。（3）WB技术检测肝癌细胞相关基因蛋白质的表达,结果显示:沉默ECEL1后,DUSP1、THBS1、PTEN蛋白质表达上调,EGR1蛋白质表达下调。结论:沉默ECEL1基因,可以导致人肝癌细胞（BEL-7404）DUSP1、THBS1、PTEN基因表达上调,EGR1基因表达下调。

关键词： ECEL1 shRNA 肝癌细胞 DUSP1 THBS1 PTEN EGR1

miR-141-3p/DUSP1在女性生殖系统常见恶性肿瘤的表达以及对肿瘤细胞的生物学影响

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miR-141-3p/DUSP1在女性生殖系统常见恶性肿瘤的表达以及对肿瘤细...

作者：郭祎男广西医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨女性生殖系统不同恶性肿瘤类型中分子之间的共性,为早期筛查、精准治疗的标志物选择提供理论基础。方法:1.纳入女性生殖系统常见恶性肿瘤石蜡包埋组织各60例,对应正常对照组织各30例,利用免疫组织化学技术检测DUSP1的表达水平... 详细信息

目的:探讨女性生殖系统不同恶性肿瘤类型中分子之间的共性,为早期筛查、精准治疗的标志物选择提供理论基础。方法:1.纳入女性生殖系统常见恶性肿瘤石蜡包埋组织各60例,对应正常对照组织各30例,利用免疫组织化学技术检测DUSP1的表达水平分析其与临床参数之间的关系。2.在宫颈癌HeLa细胞,卵巢癌A2780细胞,子宫内膜癌HEC1B细胞中转染DUSP1过表达质粒载体,构建DUSP1过表达细胞株,随后进行CCK8增殖实验,划痕实验,Transwell小室侵袭实验,运用流式细胞术检测细胞凋亡与细胞周期,探讨过表达DUSP1对肿瘤细胞生物学功能的影响。3.纳入女性生殖系统常见恶性肿瘤石蜡包埋组织各70例,对应正常对照组织各30例,利用实时荧光定量技术检测miR-141-3p的表达水平分析其与临床参数之间的关系。采用双荧光素酶实验验证miR-141-3p与DUSP1的靶向关系。4.对网络数据库表达谱数据进行整理,通过差异分析、RRA整合得到女性生殖系统常见恶性肿瘤的差异基因,随后进行GO、KEGG、WIKI通路富集分析,利用String数据库分析女性生殖系统常见恶性肿瘤的差异基因的蛋白互作网络。提取所纳入的表达谱中miR-141-3p与DUSP1的表达数据进行Meta分析并绘制森林图。结果:1.DUSP1在宫颈癌组织的阳性率为10.0%(6/60),正常对照组织阳性率为76.7%(23/30);在卵巢癌组织的阳性率为18.3%(11/60),正常对照组织阳性率为70.0%(21/30)。在子宫内膜癌组织的阳性率为15.0%(9/60),正常对照阳性率为63.3%(19/30)。分析DUSP1表达水平与女性生殖系统常见恶性肿瘤病例临床病理参数的关系发现,DUSP1的表达水平与女性生殖系统肿瘤患者目前所统计的临床病理参数尚无明显相关性。2.相对于空白组与阴性对照组,过表达组的肿瘤细胞增殖能力均明显下降,细胞迁移能力均明显下降,侵袭进入小室的数量均明显减少,细胞早期及晚期凋亡比例均明显增加,细胞阻滞在G1期的比例均明显增加。3.miR-141-3p在女性生殖系统肿瘤中的表达水平均高于正常对照组织,卵巢癌中miR-141-3p的表达水平与是否感染解脲支原体相关。双荧光素酶实验结果证实miR-141-3p与DUSP1具有靶向关系。4.差异分析结果显示miR-141-3p与DUSP1在女性生殖系统常见恶性肿瘤中均存在差异,Meta分析结果显示各个独立研究中miR-141-3p与DUSP1的表达具有一致性,miR-141-3p的表达水平分别在三种女性生殖系统肿瘤中的表达量明显高于其对应正常组织,而DUSP1的表达水平明显低于其对应正常组织。GO、KEGG、Wiki pathways的富集分析的结果均显示这些DEGs参与了细胞周期的调节,PPI结果提示核心模块中CDCA2、CDKN3和NCAPG2三个基因分值最高。结论:1.三种女性生殖系统常见恶性肿瘤组织中DUSP1蛋白的表达水平均明显低于对应正常组织,提示DUSP1可能作为抑癌基因参与女性生殖系统常见恶性肿瘤的进展。2.过表达DUSP1可以显著抑制三种女性生殖系统恶性肿瘤细胞的增殖,侵袭,迁移能力,并且可以明显促进肿瘤细胞的凋亡,并且可以使肿瘤细胞阻滞在G0/G1期,抑制肿瘤发展。3.三种女性生殖系统常见恶性肿瘤组织中miR-141-3p的表达水平均明显高于对应正常组织。miR-141-3p与DUSP1存在负调控关系。4.DUSP1与细胞周期调控相关蛋白可能存在相互作用,参与女性生殖系统常见恶性肿瘤细胞周期的调控。

关键词： DUSP1 miR-141-3p 宫颈癌卵巢癌子宫内膜癌

低温胁迫下斑马鱼bmp10，DUSP1分子调控机制的研究及gsdf转基因品系的构建

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低温胁迫下斑马鱼bmp10，dusp1分子调控机制的研究及gsdf转基因品...

作者：郭安宁上海海洋大学

学位级别：硕士

鱼类作为变温动物,温度是鱼类生存过程中最重要的环境因素之一,它不仅决定了鱼类的分布,且直接和间接的影响着鱼类的生理功能和行为。在细胞和分子水平,低温不仅会大大降低酶促反应和体内转运速率,还会诱导蛋白质变性、抑制转录和翻译... 详细信息

鱼类作为变温动物,温度是鱼类生存过程中最重要的环境因素之一,它不仅决定了鱼类的分布,且直接和间接的影响着鱼类的生理功能和行为。在细胞和分子水平,低温不仅会大大降低酶促反应和体内转运速率,还会诱导蛋白质变性、抑制转录和翻译、破坏细胞骨架结构和改变细胞膜通透性等,此外,冷应激还会改变细胞脂双层的特性,包括相变和脂肪酸组成。鱼类的鳃组织直接暴露于外环境中是鱼类感知外部环境压力的第一个器官。鳃对鱼类适应外部环境温度的变化和调节体内生理反应起到至关重要的作用。本实验前期运用CRISPR/CAS9技术分别敲除斑马鱼的bmp10(bone morphogenetic protein 10,bmp10)和DUSP1(dual-specificity phosphatase 1,DUSP1)基因,发现bmp10和DUSP1在低温环境下对斑马鱼的鳃组织凋亡有明显的调控作用,但引起凋亡的分子机制仍不清楚。Bmp10属于TGF-β超家族成员,已有研究证明bmp10在小鼠心脏发育过程中具有重要作用,但在斑马鱼的研究中还缺乏相关报道。本实验室前期运用CRISPR/CAS9技术敲除斑马鱼bmp10基因,成功获得能稳定遗传的F2代,研究发现低温环境下bmp10在鱼类鳃组织细胞凋亡过程中起着重要的调控作用。但其具体的分子调控机制还不清楚。因此,本研究以前期获得的bmp10纯合突变体斑马鱼为研究对象,发现与野生型斑马鱼相比,bmp10纯合突变体斑马鱼在低温环境下P53蛋白表达水平明显增加。同时bmp10纯合突变体斑马鱼在低温环境下P53及其靶基因的mRNA表达水平会迅速升高,鳃组织发生凋亡产生严重损伤,加快bmp10纯合突变体斑马鱼的死亡。双特异性磷酸酶-1(DUSP1/MKP1)作为苏氨酸-酪氨酸双特异性磷酸酶家族的成员,最初在培养的鼠科细胞中被发现。先前的研究表明,DUSP1是通过介导细胞外信号调节蛋白激酶的去磷酸化作用行使功能。且在细胞的增殖,分化和凋亡过程中具有重要的调控作用,本实验室前期的研究发现DUSP1纯合突变体斑马鱼在低温环境下鳃组织细胞的凋亡明显增加,但引起鳃组织发生凋亡的相关分子调控机制尚不清楚,本研究通过对前期获得的DUSP1纯合突变体斑马鱼蛋白水平的检测发现,DUSP1纯合突变体斑马鱼在低温环境会导致鳃组织细胞凋亡显著增加,主要是由于MAPK通路中的P38和ERK的磷酸化水平增加,从而加快了鳃组织细胞凋亡,导致鳃组织产生损伤。Gsdf是TGF-β超家族的一个特异成员,主要在硬骨鱼类雄性性腺中表达,但在精巢发育过程中的具体分子调控机制尚未清楚。因此,本研究以斑马鱼为研究对象,构建了以小鼠gamma-crystalin启动子启动的Tg(Crystal-pro-gsdf-2A-egfp)荧光素酶报告质粒,采用显微注射技术注射Tg(Crystal-pro-gsdf-2A-egfp)质粒至1细胞期的斑马鱼受精胚胎中。在倒置荧光显微镜下观察和筛选,最终获得19条能够在斑马鱼眼部晶状体特异性表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的嵌合体F0代,然后将表达了绿色荧光蛋白的斑马鱼同野生型(WT)非转基因斑马鱼杂交,最终获得能稳定遗传和表达绿色荧光蛋白的F2代。综上所述,本研究主要揭示了斑马鱼bmp10和DUSP1在低温应激过程中鳃组织细胞凋亡调控的相关分子机制,为研究低温对鱼类生长发育的影响提供了重要的理论依据。同时,成功建立了Tg(Crystal-pro-gsdf-2A-egfp)斑马鱼转基因品系,为观察和研究gsdf在精巢发育过程和分子调控机制方面的作用提供了新的方法。总之,研究在低温环境中的相关基因对斑马鱼正常生长发育的影响和性别关键基因在斑马鱼雌雄分化过程中的功能作用,对了解鱼类适应寒冷进化和鱼类性别分化等都有重要的科学意义,同时也为培育抗寒抗冻新种和全雄经济鱼类奠定了重要的生物学基础。

关键词：斑马鱼低温胁迫 bmp10 DUSP1 gsdf 精巢发育

DUSP1在涎腺腺样囊性癌中的作用及相关机制研究

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DUSP1在涎腺腺样囊性癌中的作用及相关机制研究

作者：曹君浙江中医药大学

学位级别：硕士

目的涎腺腺样囊性癌（SACC）是较常见的涎腺恶性肿瘤,具有嗜神经侵袭并顺其逐渐扩散转移的生物学特性,进而导致SACC患者术后的转移率、复发率均较高,预后不佳,然而目前对SACC高侵袭性及转移的机制仍缺乏认识。双特异性磷酸酶1（DUSP1）... 详细信息

目的涎腺腺样囊性癌（SACC）是较常见的涎腺恶性肿瘤,具有嗜神经侵袭并顺其逐渐扩散转移的生物学特性,进而导致SACC患者术后的转移率、复发率均较高,预后不佳,然而目前对SACC高侵袭性及转移的机制仍缺乏认识。双特异性磷酸酶1（DUSP1）,是一种双向特异性苏/酪氨酸磷酸酯酶,其可通过脱磷酸来调节MAPK信号通路的活性,进而在细胞生长周期及细胞增殖等方面起到极其重要的调控作用。近年来表观遗传学在肿瘤研究中日益受到重视,DNA甲基化是恶性肿瘤常见的生物学现象,甲基化为转录水平调控,可通过抑制甲基化基因nRNA的产生而使蛋白生成减少。目前在SACC中已有抑癌基因异常甲基化的相关报道,但DUSP1在SACC中的表达及甲基化状态仍未见报道。方法1.采用免疫组化法检测48例SACC石蜡组织和20例癌旁石蜡组织中DUSP1表达水平,并收集临床资料,分析DUSP1与SACC患者临床病理特征的关系。2.采用RT-PCR法检测32对SACC和癌旁冰冻组织中DUSP1的RNA水平。3.采用Kaplan-Meier法、Cox回归分析法,检验DUSP1表达情况与患者预后的关系。4.实时定量甲基化特异性PCR（qMSP）法检测SACC癌细胞及对应癌旁细胞中DUSP1基因启动子区域的甲基化状态,并运用不同浓度5-Aza-dc处理涎腺腺样囊性癌细胞株SACC-83和SACC-LM,采用western blot检测5-Aza-dc处理后DUSP1基因蛋白表达的改变情况。5.运用慢病毒转染技术,建立DUSP1过表达细胞株（SACC-83-DUSP1, SACC-LM-DUSP1）和阴性对照细胞株（SACC-83-vector, SACC-LM-vector）。6.运用克隆形成实验、Transwell Insert细胞侵袭实验、体外划痕愈合实验和MTT细胞增殖实验,来测定DUSP1表达上调对涎腺腺样囊性癌细胞的增殖、侵袭及迁移等的影响。7.采用人全基因组芯片测序法,检测SACC-83-DUSP1和SACC-83-vector两细胞株下游调控通路的不同。8.采用裸鼠成瘤试验,检测DUSP1表达上调对裸鼠涎腺腺样囊性癌成瘤及转移等的影响。结果1.免疫组化结果示：DUSP1在20例癌旁组织中均呈阳性表达,表达阳性率100%;48例SACC组织中,18例阳性表达,表达阳性率为37.5%,将两组表达阳性率比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。不同T分期、淋巴结转移、神经侵犯、局部侵犯患者的DUSP1的表达量的差异有统计学意义（均P＜0.05）,而不同性别、年龄、肿瘤部位、组织学类型、远处转移患者的DUSP1的表达量的差异均无统计学意义（均P＞0.05）。2. RT-PCR结果示：SACC组织中DUSP1的表达量显著低于癌旁组织,差异有统计学意义（P＜0.05）。3.单因素生存曲线比较（Kaplan-Meier 法）显示：30例DUSP1阴性表达患者中,发生肿瘤复发者为21例（70%）,18例DUSP1日性表达患者中,发生肿瘤复发者为4例（22.2%）,差异有统计学意义（P=0.028）,但多因素生存分析（Cox回归分析）显示DUSP1表达仍不是患者预后的独立指标。4.实时定量甲基化特异性PCR （qMSP）法检测发现,SACC癌细胞DUSP1基因启动子甲基化程度明显比对应癌旁细胞高,且运用western blot检测发现,经5-Aza-dc处理后,SACC-83和SACC-LM细胞中DUSP1蛋白的表达水平显著提高。5. DUSP1过表达慢病毒转染SACC-83、SACC-LM细胞后,发现两细胞株的DUSP1蛋白表达水平均明显上调,成功建立了DUSP1过表达细胞株（SACC-83-DUSP1, SACC-LM-DUSP1）和阴性对照细胞株（SACC-83-vector, SACC-LM-vector）。6.克隆形成实验、Transwell Insert细胞侵袭实验、体外划痕愈合实验和MTT细胞增殖实验结果示：DUSP1过表达的细胞株（SACC-83-DUSP1, SACC-LM-DUSP1）的克隆形成能力、侵袭力、迁移能力和细胞增殖能力均弱于阴性对照细胞株（SACC-83-vector, SACC-LM-vector）。7.全基因组芯片数据发现：在GO功能富集分析中,过表达DUSP1后SACC-83细胞中差异表达基因主要富集于olfactory transduction, metabolic pathways以及neuroactive ligand-receptor interaction等重要过程;KEGG通路富集分析结果提示过表达DUSP1影响到cytoskeleton、positive regulation of gene expression和integrin-mediated signaling pathway等多条信号通路的激活。8.裸鼠成瘤试验结果示：

关键词： DUSP1 涎腺腺样囊性癌预后甲基化裸鼠