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南方医科大学学报 2023年第3期43卷 340-348页

作者：马振南赵雪峰张晓微许广大刘福全大连大学附属新华医院肛肠三科辽宁大连116021

目的探讨dtx2对结直肠癌(CRC)细胞迁移侵袭的影响及作用机制。方法利用基因工具干预CRC细胞,分为敲低组(dtx2-shRNA)、敲低空载组(neg-shRNA)、未转染组(con)、过表达空载组(pcDNA)及过表达组(pcDNA-dtx2),利用qRTPCR及Western blottin... 详细信息

目的探讨dtx2对结直肠癌(CRC)细胞迁移侵袭的影响及作用机制。方法利用基因工具干预CRC细胞,分为敲低组(dtx2-shRNA)、敲低空载组(neg-shRNA)、未转染组(con)、过表达空载组(pcDNA)及过表达组(pcDNA-dtx2),利用qRTPCR及Western blotting法检测转染效率。采用划痕和Transwell侵袭实验检测dtx2基因的表达改变对CRC细胞迁移侵袭能力的影响,并通过Western blotting检测各组中Notch2、NICD、Akt、p-AKT、MMP-2及MMP-9蛋白的表达水平。CRC细胞共转染pcDNA-dtx2和Notch2 siRNA,检测回复实验对CRC细胞迁移侵袭能力的影响。结果CRC细胞中dtx2 mRNA和蛋白表达量,敲低组中明显降低(Pdtx2 shRNA显著低于con和neg-shRNA(Pdtx2显著高于con和pcDNA(P2、NICD、p-Akt及MMP-2蛋白平均表达水平,与con和neg-shRNA相比,dtx2 shRNA明显降低(Pdtx2明显升高(P0.05)。回复实验提示,siRNA-Notch2可扭转pcDNA-dtx2增强的CRC细胞迁移侵袭的能力(Pdtx2通过Notch2/Akt轴促进CRC细胞迁移侵袭的能力,dtx2可能成为CRC的新型生物学指标。

关键词： dtx2 结直肠癌细胞迁移细胞侵袭 Nohch2/Akt轴

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人类RING型锌指蛋白dtx2的全长cDNA克隆与序列分析

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华东师范大学学报（自然科学版） 2006年第4期 123-126,133页

作者：易正芳李永青袁婺洲王跃群朱传炳刘芳吴自荣吴秀山华东师范大学生命科学学院分子生物学研究室上海200062 湖南师范大学生命科学学院蛋白质化学及发育生物学教育部重点实验室湖南长沙410081

鉴定了一个人类WWE与RING型锌指基因dtx2,位于人染色体7q11．23．通过RACE获得的全长cDNA显示,dtx2编码包含两个WWE区域与一个RING锌指区域的蛋白．

关键词： dtx2 WWE区域 Ring-锌指蛋白cDNA 序列分析

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酶联免疫吸附分析检测鳍藻毒素dtx1和dtx2

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分析科学学报 2016年第4期32卷 557-560页

作者：刘丽刘磊赵芮韦宁杨琳刘仁沿梁玉波孙茜大连海洋大学水产与生命学院辽宁大连116023 国家海洋环境监测中心辽宁大连116023

利用BALB/c小鼠腹水大量制备抗大田软海绵酸(Okadaic Acid,OA)的单克隆抗体,并以此抗体为探针建立了检测鳍藻毒素(Dinophysistoxins,dtxs)dtx1和dtx2的间接竞争酶联免疫吸附分析方法(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)。dtx1和dtx2各组分的标准曲线在一定范围内都有良好的线性范围和相关系数,最低检出浓度为0.53μg/L和0.45μg/L;批内和批间平均变异系数为6.18%、5.11%和7.28%、5.79%;加标样品平均回收率为76.4%、79.9%;OA与dtx1和dtx2的交叉反应率分别为53%和79%。结果表明,该方法可用于贝类样品中dtx1和dtx2的残留检测。

关键词： dtx1 dtx2 酶联免疫吸附分析

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甲状腺乳头状癌中dtx2的表达与临床意义

甲状腺乳头状癌中DTX2的表达与临床意义

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作者：李向阳中国医科大学

学位级别：硕士

目的:通过免疫组织化学染色的方法检测dtx2(Protein deltex-2也被称作E3泛素蛋白连接酶,由dtx2基因编码)在82例甲状腺乳头状癌(Papillary Thyroid Carcinoma,PTC)及自身癌旁(与癌组织边缘距离>2cm)正常甲状腺组织中的表达情况,探讨dtx2... 详细信息

目的:通过免疫组织化学染色的方法检测dtx2(Protein deltex-2也被称作E3泛素蛋白连接酶,由dtx2基因编码)在82例甲状腺乳头状癌(Papillary Thyroid Carcinoma,PTC)及自身癌旁(与癌组织边缘距离>2cm)正常甲状腺组织中的表达情况,探讨dtx2在甲状腺乳头状癌与其自身癌旁正常甲状腺组织中的表达情况及其与患者年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤多灶性、颈部淋巴结转移、甲状腺腺体外侵犯及TNM分期的关系。研究方法:研究对象为2016年9月---2017年3月之间于中国医科大学附属盛京医院南湖院区普通外科住院行手术治疗的甲状腺乳头状癌(均为术中快速冰冻证实且与术后病理一致)患者,留取其甲状腺癌组织标本和自身癌旁正常甲状腺组织标本,通过免疫组织化学染色的方法检测癌组织标本及自身癌旁正常甲状腺组织标本中的dtx2的表达情况,根据阳性细胞的百分比及染色强度进行分级,以阳性细胞百分比的评分与染色强度评分之积表示dtx2的表达强度,采用SPSS 22.0统计软件包对所得数据进行统计分析,探讨dtx2在甲状腺乳头状癌癌组织及自身癌旁正常甲状腺组织中的表达情况与临床病理学特征的关系。结果:dtx2免疫组化阳性物质定位于细胞膜。在甲状腺乳头状癌癌组织中,dtx2高水平阳性表达于癌细胞细胞膜,阳性率为69.51%;在癌旁正常甲状腺组织中,dtx2表达基本阴性,仅于少许正常甲状腺滤泡上皮细胞胞膜有散在微弱阳性表达,阳性率为9.76%。甲状腺乳头状癌癌组织及自身癌旁正常甲状腺组织中的表达差异显著(Pdtx2蛋白表达与甲状腺乳头状癌中患者的年龄存在相关性,dtx2阳性表达率明显高于>45岁年龄组(Pdtx2的表达与患者的淋巴结转移、性别、肿瘤大小、病灶数目、甲状腺腺体外侵犯及TNM分期无关。结论:dtx2高表达于甲状腺乳头状癌癌组织中,可能dtx2在甲状腺乳头状癌的发生中起到一定作用;dtx2的表达与甲状腺乳头状癌中患者年龄存在相关性,与临床上甲状腺乳头状癌好发于45岁年龄以下人群相符。

关键词： dtx2 甲状腺乳头状癌 Notch信号通路

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Hsa-let-7e-5p靶向Deltex2抑制肺腺癌细胞迁移的研究

Hsa-let-7e-5p靶向Deltex2抑制肺腺癌细胞迁移的研究

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作者：李云安徽医科大学

学位级别：硕士

癌症是世界上造成人类死亡的最主要的原因之一,而肺癌是全世界发病率和死亡率最高的实体肿瘤之一。根据病理组织类型的不同,肺癌可以分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌,其中非小细胞肺癌占肺癌的80%以上,肺腺癌是非小细胞肺癌最常见的分型... 详细信息

癌症是世界上造成人类死亡的最主要的原因之一,而肺癌是全世界发病率和死亡率最高的实体肿瘤之一。根据病理组织类型的不同,肺癌可以分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌,其中非小细胞肺癌占肺癌的80%以上,肺腺癌是非小细胞肺癌最常见的分型。虽然用于肺癌治疗的方法在不断改善,但并没有从根本上改变肺癌高发病率和高死亡率的现状。由于肺癌易转移扩散和耐药等特征可能导致肿瘤反复发生的情况,因此,对肺癌的发生发展和转移扩散等分子机制仍需要进一步深入研究。miRNA是一类长度约为22个核苷酸,由内源基因编码的非编码单链RNA分子,已有大量文献报道其与肿瘤的发生发展等过程密切相关。本文通过对5对肺腺癌组织和肺组织正常对照的miRNA芯片数据分析,筛选出了576个在肺腺癌中差异表达的miRNA,通过进一步验证以及文献调研,我们选择了在肺腺癌中低表达的hsa-let-7e-5p进行研究。我们通过TCGA数据库进一步分析了hsa-let-7e-5p在肺腺癌组织中的表达情况,发现hsa-let-7e-5p在肺腺癌组织中低表达,并具有统计学意义。我们检测了肺腺癌细胞中hsa-let-7e-5p的内源性表达水平,发现与对照相比hsa-let-7e-5p在肺腺癌细胞中低表达。功能实验结果显示hsa-let-7e-5p能抑制肺腺癌细胞的迁移。我们运用三个miRNA靶基因预测数据库对hsa-let-7e-5p的潜在靶基因进行了预测,并取交集进行了验证,结果显示dtx2显著改变,通过蛋白免疫印迹分析和双荧光素酶报告实验进一步验证dtx2是hsa-let-7e-5p的靶基因。我们运用TCGA数据库分析了dtx2在肺腺癌组织中的表达水平,发现dtx2在肺腺癌中高表达,并具有统计学意义。我们同期通过细胞实验证实了dtx2在肺腺癌细胞中高表达,过表达dtx2能促进肺腺癌细胞的迁移。这些研究结果显示hsa-let-7e-5p在肺腺癌中可通过直接靶向调控dtx2的表达来抑制肺腺癌细胞的迁移,拓展了我们对肺腺癌发病机理的认识,也为后续深入研究hsa-let-7e-5p和dtx2在肺癌中的功能和机制研究奠定了基础。

关键词：肺腺癌 miRNA hsa-let-7e-5p dtx2 迁移

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人类心脏发育相关新基因dtx2A和ZNF480的表达与功能研究

人类心脏发育相关新基因DTX2A和ZNF480的表达与功能研究

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作者：易正芳湖南师范大学

学位级别：硕士

在很大程度上，细胞分化是由转录因子调节的。人们已经鉴定了几个大的转录因子家族。在哺乳动物中，锌指蛋白可能是最庞大的家族。锌指蛋白结构域主要由组氨酸和半胱氨酸组成，它们结合一个锌离子，环化后组成其二级结构。本文利用krup... 详细信息

在很大程度上，细胞分化是由转录因子调节的。人们已经鉴定了几个大的转录因子家族。在哺乳动物中，锌指蛋白可能是最庞大的家族。锌指蛋白结构域主要由组氨酸和半胱氨酸组成，它们结合一个锌离子，环化后组成其二级结构。本文利用kruppel型(cys2／His2型)以及RING型锌指基因顺序上的保守特征，设计简并引物从人类早期胚胎cDNA文库中初步筛选克隆出三个krupple型锌指蛋白新基因，经国际基因命名委员会批准命名为dtx2A、ZVF480、 ZNF323，其中dtx2A基因全长2781个碱基，含有11个外显子，全基因在基因组序列上长达44kb，Deletx2A编码一种包含一个WWE区域与一个RING锌指区域，Northern结果显示Deletx2A在成人的骨骼肌、心脏有高表达，在胰腺，胎盘与肝脏中表达较弱，在胚胎心脏中也有表达，提示该基因可能与心脏发育有关。ZNF48基因全长4732个碱基，开放阅读框长1551个碱基，编码一个KRAB框和12个C2H2型锌指，Northern结果显示ZNF480在六月胚胎中只在心脏中有表达，而成人的心脏、胰腺有较强的表达，在骨骼肌、肾脏、肝脏、胎盘有弱表达，ZNF480的过表达激活转录因子AP-1与SRE的活性，这两种因子是MAPK信号途径介导的重要因子，这说明ZNF480蛋白可能在MAPK信号途径中作为激活因子介导细胞功能。ZNF323基因全长3179个碱基，含8个外显子，定位于6p22.1一22.3，在基因组DNA上长29.45Kb，其编码蛋白质全长406个氨基酸，含有1个SCAN框和6个krupple型锌指。Northern Blot分析表明Z样召23基因在人类早期胚胎不同时期(18一25周)表达水平不同，在肺，肾和肝脏的表达水平较强，其它组织表达较弱。在成体组织的肝和肾脏中的表达较强，在肺、胰腺、脑、肌肉、心脏等组织中的表达较弱。综合这些基因的结构和表达特征，我们可以初步得出一个结论:它们编码的是参与多种人类胚胎器官发生的锌指转录调控因子。此外我们还收集人类药物流产的早期胚胎，观察发现胚胎畸形占17.860k，早期致死占32.54%;采用组织切片技术将胚胎制成一系列石蜡连续切片，染色后显微观察畸形和正常的早期胚胎内部心脏等器官的发育情况，发现胚胎外部畸形与体内畸形存在一定关联，对此我们将做进一步的研究。

关键词： Ring型 krüpple型锌指 dtx2 KRAB 新的转录调控因子基因表达早期胚胎发育 ZNF480 MAPK信号途径

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