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乐果对U87细胞HSP70表达及AChE活性的影响

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环境与职业医学 2005年第2期22卷 105-108页

作者：谢芳周志俊吴强恩吴同俊复旦大学公共卫生学院劳动卫生教研室上海200032

[目的]研究乐果对神经胶质瘤细胞U87热应激蛋白70 (HSP70 )表达的影响规律,比较HSP70与乙酰胆碱酯酶(AChE)对乐果的敏感性。[方法]以不同浓度乐果(10 0、10、1、0 .1、0 .0 1、0 μmol/L)对体外培养的U87细胞分别进行2、4、8、16和2 4h... 详细信息

[目的]研究乐果对神经胶质瘤细胞U87热应激蛋白70 (HSP70 )表达的影响规律,比较HSP70与乙酰胆碱酯酶(AChE)对乐果的敏感性。[方法]以不同浓度乐果(10 0、10、1、0 .1、0 .0 1、0 μmol/L)对体外培养的U87细胞分别进行2、4、8、16和2 4h染毒,再分别用Western blot法和dtnb法检测各组细胞HSP70表达和AChE活性的变化,比较这两个指标变化的幅度以及引起此变化所需乐果浓度和染毒时间的差异。[结果]乐果染毒2h即可引起HSP70表达的显著增高(P <0 .0 1) ,这一变化在染毒4h时出现于各剂量组,并可持续至染毒16h。在染毒2h和4h ,HSP70表达的变化与乐果剂量之间存在相关关系(Pearson相关系数分别为0 .916和0 .989,P <0 .0 1)。AChE活性的显著降低出现在染毒4h ,且仅出现在剂量较高的3个组,变化幅度也较小。[结论]乐果可以在相对较短时间内以较低剂量引起U87细胞HSP70表达的显著变化,并存在一定的剂量反应关系。HSP70比AChE对乐果更为敏感。

关键词： AChE活性乐果热应激蛋白70(HSP70) Western-blot法 HSP70表达表达及神经胶质瘤细胞剂量一反应关系乙酰胆碱酯酶 dtnb法不同浓度体外培养染毒时间指标变化相关系数相关关系敏感性 24h 组细胞出现低剂量幅度

耐力训练和一次性力竭运动对大鼠心肌和骨骼肌硫氧还蛋白还原酶的影响

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中国运动医学杂志 2005年第3期24卷 293-296页

作者：卜于骏丁树哲华东师范大学出版社上海200062 华东师范大学体育与健康学院

目的:观察运动对大鼠心肌、骨骼肌硫氧还蛋白还原酶(TR)的影响。方法:SD大鼠30只,随机分成安静对照组、耐力训练组和力竭组。训练组进行6周渐增游泳训练,5次/周。最后1次训练后2 4小时,断头处死安静对照组和训练组大鼠,力竭组大鼠在一... 详细信息

目的:观察运动对大鼠心肌、骨骼肌硫氧还蛋白还原酶(TR)的影响。方法:SD大鼠30只,随机分成安静对照组、耐力训练组和力竭组。训练组进行6周渐增游泳训练,5次/周。最后1次训练后2 4小时,断头处死安静对照组和训练组大鼠,力竭组大鼠在一次性力竭运动后即刻处死。dtnb法检测心肌、骨骼肌TR活性,RT -PCR法观察TRmRNA水平变化。结果:6周耐力训练大鼠心肌TR活性显著高于安静对照组,一次性力竭组大鼠心肌TR活性显著低于安静对照组。各组大鼠心肌TRmRNA均无显著性差异。结论:6周耐力训练显著提高大鼠心肌TR活性,而在mRNA水平上无显著性差异。

关键词：硫氧还蛋白还原酶耐力训练力竭运动大鼠心肌骨骼肌一次性 mRNA水平 RT-PCR法显著性差异 dtnb法

高通量选育谷胱甘肽高产菌株及胞外分泌特性的研究

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高通量选育谷胱甘肽高产菌株及胞外分泌特性的研究

作者：张恩芬安徽工程大学

学位级别：硕士

谷胱甘肽(Glutathione,GSH)是一种重要的非蛋白巯基三肽,普遍存在于自然界中,具有重要的生理活性功能,在食品、医药、化妆品等领域广泛应用,目前GSH的工业生产主要是微生物发酵生产。本文首先建立及优化了发酵液中GSH快速检测方法,提高... 详细信息

谷胱甘肽(Glutathione,GSH)是一种重要的非蛋白巯基三肽,普遍存在于自然界中,具有重要的生理活性功能,在食品、医药、化妆品等领域广泛应用,目前GSH的工业生产主要是微生物发酵生产。本文首先建立及优化了发酵液中GSH快速检测方法,提高诱变后突变株的筛选效率;并采用常压室温等离子体及化学诱变剂处理酵母细胞,并结合ZnCl2抗性筛选,获得高产突变株D-17-51;最后通过表面活性剂的优化提高细胞膜透性,进一步提高了发酵产量。主要研究内容和结果如下:(1)GSH快速检测方法的建立与优化。为快速测定发酵液中GSH的含量,基于dtnb比色反应,采用酶标仪法测定GSH含量,并对影响该方法主要因素进行了优化。在GSH测定的反应体系为0.25 mol/L Tris-HCl(pH8.0)0.6 mL,3%甲醛0.1 mL,0.1 mmol/L dtnb为1.5 mL时,酶标仪检测可获得较高的GSH含量,并进行了精密度实验。最后,对诱变的45株突变株采用48孔板发酵后,分别使用酶标仪和分光光度计对发酵液中GSH含量进行检测及拟合度分析,得出酶标仪法和分光光度计法的相关系数R2=0.93082,说明两种检测方法具有很好的一致性。本实验结果表明酶标仪法能操作快速、简便、准确的测定发酵液中的GSH含量,为后续快速筛选高产GSH菌株奠定了实验基础。(2)复合诱变选育高产GSH菌。以菌株D作为出发菌株,采用常压室温等离子(ARTP)进行诱变处理,在平板上涂布培养后,随机挑选37株突变株,分别经摇瓶和24孔板发酵培养,采用酶标仪法测定发酵液中GSH的含量。结果显示摇瓶和24孔板发酵培养的测定结果具有很好的一致性,两种方法之间的相关系数R2为0.97653,表明24 板可代替传统的摇瓶发酵,快速从大量的突变株中筛选出高产GSH突变株,提高筛选效率。以D菌株作为出发菌株,分别使用ARTP、紫外(UV)、化学诱变剂甲基磺酸乙酯(EMS)与硫酸二乙酯(DES)进行诱变处理,筛选结果发现ARTP与EMS复合诱变效果最好,即120 s为最佳诱变时间的ARTP处理后冰浴2h,再使用0.3%的EMS处理2.5 h,获得产量最高的突变菌株D-17-51,24孔板发酵产量达到359.67 mg/L,较出发菌株提高了194.8%。对突变株D-17-51进行遗传稳定性试验,经5次传代后产量下降不大,比较稳定。(3)表面活性剂对突变株D-17-51胞外分泌GSH特性的影响。表面活性剂因其独特的分子结构——既有亲水端又有亲脂端,与细胞膜的结构类似,可用来增加细胞膜的通透性。考察了四种表面活性剂,发现阴离子型表面活性剂SDS对GSH胞外积累有积极作用,随着SDS的增加细胞干重下降,胞外GSH含量不断上升。当SDS的浓度达到2 g/L时,胞外分泌量最多,接近总产量;而当SDS的浓度为4 g/L细胞浓度减少、合成GSH的能力下降,而且发酵结束时细胞存在量很少。在发酵过程中添加终浓度为2 g/L的SDS,得到如下结果:在发酵Oh和8 h添加SDS,随着时间增长,细胞增长缓慢,没有促进GSH外排;发酵16 h和24 h添加SDS时,细胞进入稳定期,合成GSH量增加且大量向胞外分泌;而在发酵32 h和40 h添加SDS对GSH的合成没有太大影响,可以促进GSH胞外分泌但量不大。

关键词：谷胱甘肽 dtnb法酶标仪复合诱变 ZnCl2 阴离子型表面活性剂

2000年山东省部分克山病病区人群血中GSH-Px活力观察

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地方病通报 2003年第3期18卷 40-41页

作者：刘永萍边建朝相有章山东省地方病防治研究所山东济南250014

应用dtnb直接法测定克山病区人群血中GSH-Px活力,寻找克山病病因,以减轻地方病带给人们的危害,结果显示克山病患者全血中GSH-Px活性明显低于正常人;病区人群服一定量的硒有助于提高GSH-Px活性,提示改善外环境因素,使机体抗氧化能力增强... 详细信息

应用dtnb直接法测定克山病区人群血中GSH-Px活力,寻找克山病病因,以减轻地方病带给人们的危害,结果显示克山病患者全血中GSH-Px活性明显低于正常人;病区人群服一定量的硒有助于提高GSH-Px活性,提示改善外环境因素,使机体抗氧化能力增强,有助于病区人群身体健康,提高生活质量。

关键词：克山病 GSH-Px活性测定 dtnb法