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drr1在神经母细胞瘤细胞分化中的作用机制研究

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DRR1在神经母细胞瘤细胞分化中的作用机制研究

作者：陈潞萍沈阳医学院

学位级别：硕士

目的神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)是一种交感神经系统的儿童恶性肿瘤,可以发生在交感神经系统组织的椎旁或主动脉周围的任何区域,被称为“儿童肿瘤之王”。近年来,神经母细胞瘤的患病率逐年递增,约占全部儿童恶性肿瘤疾病的8%0%,发... 详细信息

目的神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)是一种交感神经系统的儿童恶性肿瘤,可以发生在交感神经系统组织的椎旁或主动脉周围的任何区域,被称为“儿童肿瘤之王”。近年来,神经母细胞瘤的患病率逐年递增,约占全部儿童恶性肿瘤疾病的8%0%,发病率居儿童常发肿瘤的第3位,是最常见的儿童颅外实体瘤。尤其是高风险的神经母细胞瘤患者起病隐匿,恶性程度高,病情进展迅速,预后不佳,5年生存率低于50%。因此,对神经母细胞瘤发病机制的深入研究以及发现新的治疗靶点对临床治疗意义重大。研究发现肾细胞癌下调蛋白1(down-regulated in renal cell carcinoma 1,drr1)在正常组织中广泛表达,在多种类型的肿瘤中表达减少,因此被认为是一种肿瘤抑制因子。最新研究表明,drr1是一种肌动蛋白结合蛋白,可以通过与肌动蛋白相互作用而抑制神经母细胞瘤细胞的增殖,但作用机制尚不明确。本课题旨在分析drr1对神经母细胞瘤细胞分化的影响,揭示其在神经母细胞瘤发生发展过程中的作用机制及相关分子信号传导通路,为神经母细胞瘤的相关研究提供新的理论依据,也为神经母细胞瘤的治疗提供新的治疗靶点以及新的治疗策略。方法1.在神经母细胞瘤细胞中使用低血清或视黄酸(retinoic acid,RA)诱导细胞分化后、以及在细胞中转染drr1 sh RNA或转染drr1表达载体后,观察细胞形态变化,并利用real-time PCR检测drr1以及细胞分化标志物酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)、生长相关蛋白43(growth-associated protein-43,GAP43)的表达变化情况。2.在细胞中转染不同长度drr1蛋白片段的表达载体,观察细胞形态变化,并利用real-time PCR检测细胞分化标志物的表达情况。同时进行免疫共沉淀及Western Blot实验,探究不同长度drr1蛋白片段与肌动蛋白的结合情况。3.利用Ch IP-seq实验筛选drr1的下游基因。之后,在神经母细胞瘤细胞中转染drr1 sh RNA或drr1表达载体,利用real-time PCR检测筛选的drr1下游基因CREB的表达情况;在神经母细胞瘤细胞中转染drr1下游基因CREB的sh RNA或表达载体,观察细胞形态变化,并利用real-time PCR检测细胞分化标志物表达情况。4.利用临床患者数据库分析drr1下游基因CREB的表达与神经母细胞瘤细胞分化标识物的表达之间的相关性,以及drr1下游基因CREB的表达与患者预后之间的相关性。5.在drr1 sh RNA处理的神经母细胞瘤细胞中过表达CREB后,分别利用real-time PCR检测细胞分化标志物的表达情况;利用流式细胞术分析细胞周期分布情况;利用小鼠成瘤实验评价肿瘤生长情况。结果1.在诱导分化后的神经母细胞瘤细胞中,drr1及神经母细胞瘤细胞分化标志物TH、GAP43的表达较对照组细胞增加。敲低drr1抑制细胞中TH、GAP43的表达,过表达drr1促进细胞中TH、GAP43的表达。2.Real-time PCR结果显示,在过表达drr1(1-120)蛋白片段和过表达全长drr1蛋白的神经母细胞瘤细胞中分化标志物TH、GAP43的表达量显著增加。免疫共沉淀实验结果显示,只有drr1(1-120)蛋白片段和全长的drr1蛋白可与肌动蛋白结合。3.通过Ch IP-seq实验筛选出CREB是drr1的候选下游基因。在神经母细胞瘤细胞中差异表达drr1时,CREB表达量也会随之改变。且与对照组相比,在神经母细胞瘤细胞中敲低CREB抑制神经母细胞瘤细胞中分化标志物TH、GAP43的表达;而过表达CREB促进神经母细胞瘤细胞中TH、GAP43的表达。4.通过对临床患者数据库的分析发现,CREB的表达与分化标志物TH、GAP43的表达之间存在正相关关系,且CREB低表达与神经母细胞瘤患者的不良预后有关。5.过表达CREB可拯救由敲低drr1引起的对神经母细胞瘤细胞分化、细胞周期分布和肿瘤生长的影响。结论1.drr1促进神经母细胞瘤细胞分化,并且该作用依赖于其与F-actin的结合。2.drr1通过调控下游基因CREB的表达,实现其对神经母细胞瘤细胞的促分化作用。3.drr1-CREB轴抑制神经母细胞瘤细胞G1/S细胞周期的转换及肿瘤的生长。4.drr1-CREB轴与神经母细胞瘤患者的预后相关。

关键词： drr1 CREB 分化神经母细胞瘤

人drr1真核表达载体和稳定转染HEK293细胞株的建立及鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2011年第9期27卷 972-974页

作者：赵新宇聂春来袁铸四川大学生物治疗国家重点实验室四川成都610041

目的:构建人drr1基因的真核表达载体,通过转染HEK293细胞建立稳定的drr1表达细胞株。方法:通过改造质粒pIRES,在其MCS1和MCS2中分别引入串联亲和纯化标签和绿色荧光蛋白基因,形成一个新的表达质粒pFSIG。将PCR扩增的drr1基因插入pFSIG... 详细信息

目的:构建人drr1基因的真核表达载体,通过转染HEK293细胞建立稳定的drr1表达细胞株。方法:通过改造质粒pIRES,在其MCS1和MCS2中分别引入串联亲和纯化标签和绿色荧光蛋白基因,形成一个新的表达质粒pFSIG。将PCR扩增的drr1基因插入pFSIG中进行酶切和测序验证。用重组质粒pFSIG-drr1转染HEK293细胞,通过G418和绿色荧光检测筛选drr1稳定表达细胞株。通过W esternb lot鉴定FS-drr1蛋白的表达。结果:酶切、PCR和测序证实成功构建了pFSIG-drr1表达质粒;建立了稳定转染的HEK293细胞系,W estern b lot检测证明重组drr1在该细胞系中成功表达。结论:融合有串联亲和纯化标签的drr1真核表达载体的构建和稳定表达细胞HEK293株的建立为在生理条件下研究drr1的相互作用蛋白奠定了基础。

关键词： drr1 肿瘤抑制基因肿瘤发生串联亲和纯化

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drr1生物学功能的研究进展

生命科学研究 2019年第4期23卷 310-315页

作者：曹振楠牟萍沈阳医学院基础医学院中国辽宁沈阳110034 沈阳医学院生物化学与分子生物学教研室中国辽宁沈阳110034

drr1 (down-regulated in renal cell carcinoma 1)最早被发现在肾癌组织中表达水平降低,因此被认为是一种肿瘤抑制因子。进一步的研究发现,drr1 在脊椎动物的各种组织细胞内广泛表达,其在神经系统中的表达水平最高,并且在维持神经系统... 详细信息

drr1 (down-regulated in renal cell carcinoma 1)最早被发现在肾癌组织中表达水平降低,因此被认为是一种肿瘤抑制因子。进一步的研究发现,drr1 在脊椎动物的各种组织细胞内广泛表达,其在神经系统中的表达水平最高,并且在维持神经系统正常生物学功能方面起重要作用。近年来的研究还发现drr1 在肿瘤发生发展过程中起着双重作用。一方面,drr1 被发现在多种肿瘤组织中存在表达降低或表达缺失的现象,其表达水平高低与肿瘤细胞增殖能力强弱呈负相关关系。另一方面,drr1 在恶性度高的胶质母细胞瘤组织中的表达水平较正常组织显著升高,其表达水平高低与胶质母细胞瘤细胞侵袭能力强弱呈正相关关系。本文通过对近年来drr1 相关研究的总结,揭示了drr1 在正常神经系统发育及肿瘤发生发展过程中的重要作用,对全面了解drr1 的生物学功能提供了必要的参考,同时也为进一步研究drr1 的生物学功能提供了新的依据。

关键词： drr1 神经系统肿瘤抑制因子细胞侵袭

drr1与COMMD1基因在人肾上皮细胞HEK293T中相互作用的研究

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中国继续医学教育 2021年第27期13卷 192-195页

作者：陈潞萍刘宇希蔡云龙陈晓孙晓雨卢方晋沈阳医学院基础医学院辽宁沈阳110034 沈阳医学院药学院辽宁沈阳110034

目的到目前为止,肿瘤抑制基因drr1被发现在各种组织中表达广泛,但其作用机制尚未完全揭示。本研究主要对drr1在细胞核内与COMMD1基因之间相互的作用进行研究。方法采用免疫荧光染色的方法检测drr1和COMMD1在HEK293T细胞核内表达情况,同... 详细信息

目的到目前为止,肿瘤抑制基因drr1被发现在各种组织中表达广泛,但其作用机制尚未完全揭示。本研究主要对drr1在细胞核内与COMMD1基因之间相互的作用进行研究。方法采用免疫荧光染色的方法检测drr1和COMMD1在HEK293T细胞核内表达情况,同时,在细胞中过表达drr1后检测细胞核内COMMD1含量变化。结果drr1主要在细胞核内表达,且drr1与COMMD1在细胞核内相互结合;过表达drr1可以促进细胞核内COMMD1的富集。结论drr1对COMMD1在细胞核内富集具有调控作用,为drr1的作用机制提供了新的理论依据。

关键词： drr1 COMMD1 细胞核过表达 HEK293T细胞系免疫荧光染色

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drr1在人脑胶质瘤中的表达及意义

长治医学院学报 2013年第5期27卷 329-331页

作者：刘劝赵兴宇白瑞珍秦艳华东无锡市第四人民医院肿瘤中心 214062 四川大学生物治疗国家重点实验室

目的:探讨drr1基因在胶质瘤患者组织标本中的表达及其临床意义。方法:免疫组化检测57例胶质瘤患者中drr1的表达,SPSS软件检测drr1表达与胶质瘤患者年龄、性别及病理分期的关系。结果:drr1在胶质瘤患者中的表达阳性率为87.7%,其表达与病... 详细信息

目的:探讨drr1基因在胶质瘤患者组织标本中的表达及其临床意义。方法:免疫组化检测57例胶质瘤患者中drr1的表达,SPSS软件检测drr1表达与胶质瘤患者年龄、性别及病理分期的关系。结果:drr1在胶质瘤患者中的表达阳性率为87.7%,其表达与病理分期显著相关(Pdrr1表达越高。其与年龄(P>0.05)、性别(P>0.05)无显著相关性。结论:drr1基因表达与脑胶质瘤病理分期显著相关,或可成为脑胶质瘤新的分子靶标。

关键词：胶质瘤 drr1 免疫组化