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响应面法优化南极磷虾酶法制备dpp-iv抑制肽工艺条件的研究

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广东海洋大学学报 2016年第6期36卷 100-106页

作者：吉薇章超桦吉宏武广东海洋大学食品科技学院广东湛江524088 广东海洋大学广东省水产品加工与安全重点实验室广东湛江524088 广东海洋大学水产品深加工广东普通高校重点实验室广东湛江524088

采用动物蛋白水解酶酶解制备南极磷虾二肽基肽酶-iv(dpp-iv)抑制肽,以dpp-iv抑制率和可溶性蛋白含量为主要指标,考察温度、反应时间、pH、酶添加量对南极磷虾的酶解效果。在单因素的基础上,依据中心组合实验设计原理,运用4因素3水平的... 详细信息

采用动物蛋白水解酶酶解制备南极磷虾二肽基肽酶-iv(dpp-iv)抑制肽,以dpp-iv抑制率和可溶性蛋白含量为主要指标,考察温度、反应时间、pH、酶添加量对南极磷虾的酶解效果。在单因素的基础上,依据中心组合实验设计原理,运用4因素3水平的响应面分析法,建立动物蛋白水解酶酶解南极磷虾制备dpp-iv抑制肽的二次多项式数学模型,并以dpp-iv抑制率为响应值作响应面。结果表明:南极磷虾酶法制备dpp-iv抑制肽的最佳工艺参数为酶解时间3.85 h、温度45.02℃、pH值7.58、酶添加量237.55 U/g原料;在此条件下,酶解液dpp-iv抑制率的预测值为64.82%,验证值为64.78%,优化方法可行。

关键词：南极磷虾 dpp-iv抑制肽响应面工艺参数优化

响应面优化酶法制备高粱醇溶蛋白dpp-iv抑制肽参数

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食品工业 2021年第6期42卷 132-137页

作者：蔡晓戴凌燕姜鹏阮长青张东杰李志江黑龙江八一农垦大学食品学院大庆163319 黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院大庆163319 黑龙江省杂粮加工及质量安全工程技术研究中心大庆163319 国家杂粮工程技术研究中心大庆163319

以高粱醇溶蛋白为研究对象,研究具有二肽基肽酶-iv(dpp-iv)抑制作用的生物活性肽酶解工艺。以dpp-iv抑制率作为指标评价,筛选酶解反应蛋白酶,在单因素试验的基础上,进一步通过响应面法优化酶解工艺。选用木瓜蛋白酶为反应蛋白酶,最佳酶... 详细信息

以高粱醇溶蛋白为研究对象,研究具有二肽基肽酶-iv(dpp-iv)抑制作用的生物活性肽酶解工艺。以dpp-iv抑制率作为指标评价,筛选酶解反应蛋白酶,在单因素试验的基础上,进一步通过响应面法优化酶解工艺。选用木瓜蛋白酶为反应蛋白酶,最佳酶解工艺为酶解时间3.56 h、温度50.97℃、pH 5.46、加酶量7947.45 U/g。在此酶解条件下,dpp-iv抑制率的预测值达到92.96%,验证值为91.97%。结果表明,该酶解工艺合理可行,可制备dpp-iv抑制作用较好的生物活性肽。

关键词：高粱醇溶蛋白 dpp-iv抑制肽响应面

中国毛虾二肽基肽酶-iv抑制肽的分离纯化与结构鉴定

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食品与发酵工业 2023年第1期49卷 160-167页

作者：孙洁李燕郑昌亮汪之和上海海洋大学食品学院上海201306

食源性二肽基肽酶-iv(dipeptidyl peptidase-iv,dpp-iv)抑制肽有助于调节机体血糖。为实现中国毛虾的高值化利用,从中国毛虾酶解产物中制备dpp-iv抑制肽,使用动物蛋白酶水解中国毛虾,以dpp-iv抑制率为评价指标分离多肽,并通过分子对接... 详细信息

食源性二肽基肽酶-iv(dipeptidyl peptidase-iv,dpp-iv)抑制肽有助于调节机体血糖。为实现中国毛虾的高值化利用,从中国毛虾酶解产物中制备dpp-iv抑制肽,使用动物蛋白酶水解中国毛虾,以dpp-iv抑制率为评价指标分离多肽,并通过分子对接确定抑制作用位点。结果表明,酶解液经超滤、Sephadex G15和反相高效液相色谱分离纯化和液相-质谱联用技术鉴定后,得到了5条dpp-iv抑制肽,氨基酸序列分别为YGGQFPTRPD、PALPSIPH、IFTAPQVP、PAFPHPLP和LGDAPGEVP;其中PALPSIPH和PAFPHPLP对dpp-iv的抑制活性较高,二者的IC_(50)值分别为(2.68±0.06)和(1.61±0.06)mmol/mL。分子对接结果表明PALPSIPH和PAFPHPLP主要通过氢键与dpp-iv活性中心及其以外的位点相结合,以此达到抑制作用。该研究基于中国毛虾制备食源性dpp-iv抑制肽,为水产蛋白来源降血糖功能性食品开发利用和新型dpp-iv抑制肽的研究提供参考。

关键词：中国毛虾 dpp-iv抑制肽分离纯化结构鉴定分子对接

海参二肽基肽酶iv抑制肽的酶解制备及结构鉴定

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现代食品科技 2020年第8期36卷 166-174页

作者：刘志彤郑淋王晨阳赵谋明华南理工大学食品科学与工程学院广东广州510640

通过抑制二肽基肽酶iv(Dipeptidyl-peptidase iv, dpp-iv)的活性,从而减少GLP-1的降解,提高血液中胰岛素的水平,是控制血糖水平的一种重要手段。本文以海参(Holothariatubulosa)为原料,通过探究蛋白酶种类、加酶量和酶解时间对酶解产物D... 详细信息

通过抑制二肽基肽酶iv(Dipeptidyl-peptidase iv, dpp-iv)的活性,从而减少GLP-1的降解,提高血液中胰岛素的水平,是控制血糖水平的一种重要手段。本文以海参(Holothariatubulosa)为原料,通过探究蛋白酶种类、加酶量和酶解时间对酶解产物dpp-iv抑制活性、蛋白回收率和水解度的影响,确定了海参dpp-iv抑制肽的制备条件,并进一步测定了其分子量分布和总氨基酸组成,最后通过UPLC-MS/MS鉴定了其潜在的活性肽序列。结果发现,木瓜蛋白酶与复合蛋白酶1:1的复配酶解具有最佳的酶解效果,其产物的得率和dpp-iv抑制活性均最高,且在加酶量为干海参质量的1%,酶解时间为4 h时,海参酶解产物在终浓度为2 mg/mL时的dpp-iv抑制率为66.97%,蛋白回收率为76.25%,水解度为6.10%。酶解产物的分子量大都小于5000 u,且富含脯氨酸(Pro)和丙氨酸(Ala)等与抑制dpp-iv活性有关的氨基酸。将获得的酶解物中的肽段进行液质联用检测,并通过Mascot分析筛选得到28条具dpp-iv抑制肽的肽序列,分子量在500~1936 u。本实验结果为以海参为原料进行降血糖产品的开发奠定了基础。

关键词：海参 dpp-iv抑制肽制备鉴定

酶解法制备乳清蛋白二肽基肽酶抑制肽及调节血糖代餐粉的开发

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酶解法制备乳清蛋白二肽基肽酶抑制肽及调节血糖代餐粉的开发

作者：马赞河北科技大学

学位级别：硕士

随着高蛋白、高脂、高糖食物摄入的增加以及久坐少运动等不良生活方式的盛行,癌症、糖尿病的发病率日益增加。据统计,我国成年人糖尿病患病率为12.8%,患者人数约1.3亿,其中二肽基肽酶(dpp-iv)抑制剂是治疗糖尿病的一个重要方向。食源性D... 详细信息

随着高蛋白、高脂、高糖食物摄入的增加以及久坐少运动等不良生活方式的盛行,癌症、糖尿病的发病率日益增加。据统计,我国成年人糖尿病患病率为12.8%,患者人数约1.3亿,其中二肽基肽酶(dpp-iv)抑制剂是治疗糖尿病的一个重要方向。食源性dpp-iv抑制肽具有能对高血糖患者起到降血糖作用,对血糖正常者无降血糖作用的优点。因此,开发相应的调节血糖的功能性食品具有现实意义。本文以乳清蛋白为原料,通过超声波辅助蛋白酶解法制备乳清蛋白dpp-iv抑制肽,以燕麦粉和乳清蛋白dpp-iv抑制肽为基料,葛根粉、奇亚籽、低聚木糖、魔芋精粉为辅料,开发一种调节血糖代餐粉。主要研究内容如下:(1)研究超声预处理及不同蛋白酶处理对乳清蛋白水解度的影响。研究了碱性蛋白酶、风味蛋白酶等六种蛋白酶对乳清蛋白水解度的影响,并确定碱性蛋白酶为最佳蛋白酶;在乳清蛋白浓度3%,酶解温度45°C、酶解p H 10.5、加酶量100 000 AU/g蛋白的条件下,研究了超声功率、超声温度、超声时间对碱性蛋白酶酶解乳清蛋白水解度的影响,并通过响应面试验对超声条件进行优化。结果如下:超声功率60 W、超声温度37°C、超声时间45 min,此时乳清蛋白的水解度为20.07%。(2)研究超声预处理对乳清蛋白酶解动力学规律及dpp-iv抑制率的影响。在超声功率60 W,超声温度37°C、超声时间45 min的条件下,研究了酶解温度、酶解p H、酶解时间、加酶量以及底物浓度对乳清蛋白酶解液dpp-iv抑制率的影响。当酶解温度为55℃,酶解p H为10,酶解时间为80 min,加酶量为100 000 AU/g蛋白、底物浓度为6%时,酶解产物dpp-iv活性抑制率为67.54%。研究超声辅助酶解动力学以及常规酶解动力学,结果如下:超声辅助碱性蛋白酶酶解动力学参数Vmax=1.90 mmol/(kg·min),Km=25.88 g/kg,K2=4.90 mmol/(g·min),动力学方程符合一级反应动力学。在扫描电镜下对比未处理与超声预处理后的乳清蛋白的结构,超声预处理后的乳清蛋白结构变得更松散,乳清蛋白内部的结构暴露,乳清蛋白表面呈现出片面化和空洞化。(3)研究乳清蛋白酶解液的分离纯化以及乳清蛋白dpp-iv抑制肽的稳定性。以乳清蛋白酶解液为原料,经过大孔树脂脱盐、活性炭脱色后,乳清蛋白dpp-iv抑制肽得到一定程度的富集,dpp-iv抑制率升高至74.57%。超滤膜纯化处理后,50k Da的dpp-iv抑制肽抑制率最高,为76.29%;对乳清蛋白dpp-iv抑制肽的稳定性分析,得出乳清蛋白dpp-iv抑制肽的活性受温度和p H的影响很小,人体胃肠道环境对dpp-iv抑制活性的影响不大,可以发挥其应有的抑制dpp-iv的功能,起到调节血糖的作用。(4)dpp-iv抑制肽调节血糖代餐粉的研制。以燕麦粉和乳清蛋白dpp-iv抑制肽为基料,将其和魔芋精粉、低聚木糖、葛根粉、奇亚籽混合制作代餐粉。通过单因素试验研究了魔芋精粉添加量、葛根粉添加量、奇亚籽添加量对代餐粉感官品质的影响,在此基础上响应面试验确定了代餐粉的最佳配方。即在燕麦粉添加量12 g,乳清蛋白dpp-iv抑制肽粉末5.0 g、低聚木糖2.0 g的基础上,奇亚籽粉添加量2.88 g、魔芋精粉4.77 g、葛根粉2.94 g,制得的代餐粉感官品质良好,感官评分为91.63分。

关键词：乳清蛋白超声波酶解分离纯化 dpp-iv抑制肽代餐粉