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微囊藻毒素-LR对小鼠肝组织DNA甲基化的影响

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微囊藻毒素-LR对小鼠肝组织DNA甲基化的影响

DNA甲基转移酶1和DNA甲基转移酶3b基因单核苷酸多态性与结直肠癌易感性的关系

中国毒理学会第六届全国毒理学大会

作者：农清清何灏逾韦宏旷陆继培李春宏范誉广西医科大学公共卫生学院职业卫生与环境卫生学教研室

目的研究微囊藻毒素-LR(Microcystin-LR,MCLR)短期重复暴露对小鼠肝组织DNA总体甲基化水平、DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase,dnmt)mRNA表达的影响。方法 80只健康昆明小鼠,随机分为2批,每批4组,每组10只,即对照组(含0.02%二甲基... 详细信息

目的研究微囊藻毒素-LR(Microcystin-LR,MCLR)短期重复暴露对小鼠肝组织DNA总体甲基化水平、DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase,dnmt)mRNA表达的影响。方法 80只健康昆明小鼠,随机分为2批,每批4组,每组10只,即对照组(含0.02%二甲基亚砜的生理盐水0.005 ml·g)、MCLR低(5μg·kg)、中(10μg·kg)、高(20μg·kg)剂量组,每日经腹腔注射染毒,分别染毒10和20d。提取并水解小鼠肝组织DNA,采用高效液相色谱法测定DNA总体甲基化水平;提取肝组织总RNA,逆转录成cDNA,用实时荧光定量PCR法测定dnmt1,dnmt3a,dnmt3b的mRNA表达水平。结果染毒10 d后,各剂量组DNA总体甲基化水平未出现明显差异。染毒20 d中、高剂量组DNA总体甲基化水平为(2.26±0.60)%和(2.16±0.51)%,均低于对照组的(3.31±0.86)%,差异均有统计学意义(Pdnmt1、dnmt3a及dnmt3b的mRNA表达水平均下调(Pdnmt1,dnmt3a及dnmt3b的mRNA表达水平与对照组比较均下降(Pdnmt1,dnmt3a及dnmt3b的mRNA表达水平分别降至对照组的38.3%,59.9%,21.5%,差异均有统计学意义(Pdnmt1,dnmt3a,dnmt3b mRNA表达水平与DNA总体甲基化水平呈正相关关系(r=0.47,Pdnmt1、dnmt3a和dnmt3b的mRNA表达,降低DNA总体甲基化水平。MCLR引起的基因组总体DNA甲基化水平降低可能与dnmt1,dnmt3a和dnmt3b的表达下调有关。

关键词：微囊藻毒素-LR DNA总体甲基化 dnmt1 dnmt3a dnmt3b

来源： cnki会议评论

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中华实验外科杂志 2014年第10期31卷 2341-2341页

作者：布立民邹江张国梁徐峰陈立天津市第一中心医院消化科 300192 天津医科大学研究生院南开大学生命学院

最近研究结果显示DNA甲基转移酶（dnmts）异常激活与人类恶性肿瘤的发生发展密切相关[1],我们将dnmt在结肠癌发生过程中的调控作用作为切入点,采用病例-对照的分子流行病学方法,应用Sequenom MassArray质谱分析技术对dnmt1和dnmt3b的10... 详细信息

最近研究结果显示DNA甲基转移酶（dnmts）异常激活与人类恶性肿瘤的发生发展密切相关[1],我们将dnmt在结肠癌发生过程中的调控作用作为切入点,采用病例-对照的分子流行病学方法,应用Sequenom MassArray质谱分析技术对dnmt1和dnmt3b的10个单核苷酸多态性位点（SNP）与结直肠癌易感性进行研究,探讨其与结直肠癌易感性的关系及表遗传学的调控机制.

关键词： DNA甲基转移酶1 单核苷酸多态性位点癌易感性结直肠 b基因分子流行病学方法 dnmt3b 质谱分析技术

转录因子Eb在衰老心肌细胞自噬中的作用机制研究

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天津医药 2023年第3期51卷 246-252页

作者：盛思琪谢琳姜怡邓熊建团杨安宁吴凯杨勇杨晓明宁夏医科大学基础医学院 750004 宁夏医科大学国家卫生健康委代谢性心血管疾病研究重点实验室宁夏医科大学宁夏血管损伤与修复研究重点实验室宁夏回族自治区人民医院

目的探讨转录因子Eb(TFEb)在衰老心肌细胞自噬中的作用机制。方法动物实验:将20只老年Wistar大鼠采取随机数字表法分为假手术组(Sham组)和缺血再灌注组(I/R组)。细胞实验:(1)体外培养大鼠心肌细胞,采用8 g/L D-半乳糖孵育8 d后分为常氧(... 详细信息

目的探讨转录因子Eb(TFEb)在衰老心肌细胞自噬中的作用机制。方法动物实验:将20只老年Wistar大鼠采取随机数字表法分为假手术组(Sham组)和缺血再灌注组(I/R组)。细胞实验:(1)体外培养大鼠心肌细胞,采用8 g/L D-半乳糖孵育8 d后分为常氧(Normoxia)组和缺氧/复氧(H/R)组。(2)在衰老心肌细胞中分别转染过表达和干扰TFEb腺病毒分为过表达对照(Ad-GFP)组、过表达对照+缺氧/复氧(Ad-GFP+H/R)组、过表达TFEb(AdTFEb)组、过表达TFEb+缺氧/复氧(Ad-TFEb+H/R)组、干扰对照(sh-NC)组、干扰对照+缺氧/复氧(sh-NC+H/R)组、干扰TFEb(sh-TFEb)组、干扰TFEb+缺氧/复氧(sh-TFEb+H/R)组。(3)分别用dnmt1、dnmt3a、dnmt3b的特异性抑制剂DC-05、TFD、NA处理缺氧/复氧后的衰老心肌细胞分为H/R组、DC-05组、TFD组、NA组。(4)在衰老心肌细胞中转染干扰dnmt3b腺病毒分为干扰对照(sh-NC)组、干扰对照缺氧/复氧(sh-NC+H/R)组、干扰dnmt3b(shdnmt3b)组、干扰dnmt3b缺氧/复氧(sh-dnmt3b+H/R)组。实时荧光定量PCR(qPCR)检测TFEb的mRNA表达水平;Western blot检测衰老心肌细胞中自噬相关蛋白TFEb、LC3b和p62的蛋白表达;巢式甲基化特异性PCR(nMSPCR)检测TFEb启动子区的DNA甲基化水平。结果与Sham组或Normoxia组比较,I/R组和H/R组中TFEb的mRNA和蛋白表达水平降低(Pb后,与Ad-GFP组比较,Ad-TFEb组LC3b-Ⅱ/Ⅰ的蛋白表达水平降低,p62的蛋白表达水平升高(Pb后得到相反的结果(Pb启动子区DNA甲基化水平升高(Pb mRNA和蛋白表达水平升高(Pdnmt3b后,与sh-NC组比较,sh-dnmt3b组TFEb mRNA和蛋白表达水平升高(Pdnmt3b通过调控TFEb启动子区DNA甲基化抑制TFEb的表达,进而促进衰老心肌细胞自噬。

关键词：肌细胞心脏细胞衰老转录因子Eb 细胞自噬 DNA甲基化 dnmt3b

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DNA甲基转移酶1、3b基因在肾癌的表达

现代泌尿生殖肿瘤杂志 2009年第5期1卷 302-302,307页

作者：刘宜敏谢文练罗欣刘宏伟朱定军中山大学附属第二医院肿瘤科广州510120 中山大学附属第二医院泌尿外科广州510120

肾细胞癌是我国泌尿系统常见的肿瘤之一.肿瘤的发生与抑癌基因的失活有关,研究发现,抑癌基因甲基化是其失活的重要机制之一.甲基化并不使基因序列发生改变,而是使抑癌基因转录失活,表达受抑制,导致肿瘤形成.DNA甲基化是由DNA甲基转移酶(... 详细信息

肾细胞癌是我国泌尿系统常见的肿瘤之一.肿瘤的发生与抑癌基因的失活有关,研究发现,抑癌基因甲基化是其失活的重要机制之一.甲基化并不使基因序列发生改变,而是使抑癌基因转录失活,表达受抑制,导致肿瘤形成.DNA甲基化是由DNA甲基转移酶(dnmt)催化,将胞嘧啶转化为5-甲基胞嘧啶[1].人类dnmt在CpG岛甲基化过程中至少有dnmt1、dnmt3a和dnmt3b参与[2,3].dnmt1和dnmt3b是DNA甲基化的关键酶,其表达直接影响着DNA甲基化状态[4].本研究采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测dnmt1、dnmt3b mRNA在肾细胞癌组织及正常肾组织中的表达,并探讨其表达的临床意义.

关键词： DNA甲基转移酶1 抑癌基因甲基化逆转录-聚合酶链反应 5-甲基胞嘧啶 b基因 DNA甲基化 dnmt3b CpG岛甲基化

利用CRISPR/Cas9技术实现快速、经济的大鼠条件基因敲除技术

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中国比较医学杂志 2014年第3期24卷 66-66页

作者：马元武张连峰

在2014年第1期的Cell Research杂志上发表了一篇利用CRISPR／Cas9技术进行大鼠条件基因敲除技术的技术性论文（Ma，et al．，Generating rats with conditional alleles using CRISPR／Cas9， Cell Research （2014）24：122-125．），这篇论文利用CRISPR／Cas9在靶基因的特定外显子产生DNA双链断裂，同时提供一个环形质粒模板，该质粒包含两端被loxP位点标记的、且与被打断外显子相同的DNA片段。在受精卵内同源重组修复系统（ homologous recombination repair pathway ）的作用下，可实现高效率的靶基因loxP位点标记，从而用于大鼠的条件性基因敲除。论文中利用该技术实现了三个甲基化酶基因（dnmt1， dnmt3a， dnmt3b）loxP位点标记，效率高达30％，使得制备一个含loxP位点标记大鼠的周期仅2～3个月，成为目前为止最经济、快速的大鼠条件基因敲除技术。

关键词：基因敲除技术大鼠 DNA双链断裂条件性基因敲除 loxP dnmt3b Cell 质粒模板