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Identification of a dnase activated in Xenopus egg extracts undergoing apoptosis

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Chinese Science Bulletin 1998年第6期43卷 522-526页

作者： Shan Zhu Zhengfan Jiang Bo Zhang Zhigang Lu Zhonghe Zhai Peking Univ Coll Life Sci Beijing 100871 Peoples R China

A cell-free apoptosis system was established by adding dATP and cytochrome c to Xenopus laevis egg extracts S-150. Accompanied by an incubation process, an apoptosis-specific dnase was activated in egg extracts which depended on Mg 2+ and inhibited by Zn 2+. Two nucleases existing in egg extracts were revealed by in-gel nuclease assay. Further experiments showed that 27 ku nuclease which was different from other Ca 2+/Mg 2+-dependent nucleases was a possible candidate involved in apoptosis.

关键词： apoptosis dnase cell-free system Xenopus egg extracts

禽多杀性巴氏杆菌C48-1株胞外分泌蛋白的dnase活性分析

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中国预防兽医学报 2022年第9期44卷 984-989页

作者：陈耀华董何凡李琦牛俊辉钱满王晓利全映颖刘桂坤雷显前程相朝廖成水河南科技大学动物科技学院河南洛阳471023 洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室河南洛阳471023

为探究多杀性巴氏杆菌(Pm)胞外分泌蛋白的dnase活性及对该蛋白dnase活性影响的因素,本研究经琼脂培养法以λDNA为底物鉴定禽Pm C48-1株胞外蛋白的dnase活性,将Pm培养5 h后采用低温透析法收集禽Pm C48-1株的胞外分泌蛋白,并采用BCA试剂... 详细信息

为探究多杀性巴氏杆菌(Pm)胞外分泌蛋白的dnase活性及对该蛋白dnase活性影响的因素,本研究经琼脂培养法以λDNA为底物鉴定禽Pm C48-1株胞外蛋白的dnase活性,将Pm培养5 h后采用低温透析法收集禽Pm C48-1株的胞外分泌蛋白,并采用BCA试剂盒测定其浓度,进一步利用Kunitz法检测Pm胞外分泌蛋白的dnase活性。结果显示,禽Pm分泌的胞外蛋白能够降解λDNA,即其有dnase活性,且获得的胞外分泌蛋白的浓度为1.32μg/mL,其降解λDNA的活性水平为6.07×10^(6) Kunitz Unit/mg。利用琼脂糖凝胶电泳法检测胞外分泌蛋白降解不同底物DNA的能力以及酸碱、温度和不同浓度金属阳离子对胞外分泌蛋白降解λDNA活性的影响。结果显示,Pm胞外分泌蛋白的dnase活性具有广谱性,可降解λDNA、细菌基因组DNA、质粒DNA和PCR扩增的DNA片段。dnase活性影响因素的检测结果显示,Pm胞外分泌蛋白降解λDNA的最适温度为30℃,在pH7.0~pH9.0时该蛋白的dnase活性较好,而在酸性和强碱性时该蛋白则无dnase活性。不同浓度的Na^(+)、K^(+)和Ba^(2+)对胞外分泌蛋白的dnase活性均无明显影响;不同浓度的Ca^(2+)、Mg^(2+)和Mn^(2+)可提高胞外分泌蛋白的dnase活性;1 mmol/L和5 mmol/L的Co^(2+)以及0.01 mmol/L和0.1 mmol/L的Cu^(2+)则可抑制该蛋白的dnase活性,而1 mmol/L和5 mmol/L的Cu^(2+)则对该蛋白的dnase活性无明显影响。本研究首次证实了禽Pm C48-1株胞外分泌蛋白的dnase活性,且该活性具有广谱性,并明确了影响该活性的因素,为进一步探究胞外dnase在Pm感染及与宿主互作中的作用提供参考。

关键词：多杀性巴氏杆菌 C48-1株分泌蛋白 dnase 胞外核酸酶

Systematically investigating the key features of the dnase deactivated Cpf1 for tunable transcription regulation in prokaryotic cells

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Synthetic and Systems Biotechnology 2019年第1期4卷 1-9页

作者： Chensi Miao Huiwei Zhao Long Qian Chunbo Lou CAS Key Laboratory of Microbial Physiological and Metabolic Engineering State Key Laboratory of Microbial ResourcesInstitute of Microbiology Chinese Academy of SciencesBeijing100101China College of Life Science University of Science and Technology of ChinaHefei230027China Center for Quantitative Biology Peking UniversityBeijing100871China University of Chinese Academy of Science Beijing100149China

With a unique crRNA processing capability,the CRISPR associated Cpf1 protein holds great potential for multiplex gene *** the well-studied Cas9 protein,however,conversion of Cpf1 to a transcription regulator and its related properties have not been systematically explored *** this study,we investigated the mutation schemes and crRNA requirements for the dnase deactivated Cpf1(dCpf1).By shortening the direct repeat sequence,we obtained genetically stable crRNA co-transcripts and improved gene repression with multiplex targeting.A screen of diversity-enriched PAM library was designed to investigate the PAMdependency of gene regulation by dCpf1 from Francisella novicida and Lachnospiraceae *** found novel PAM patterns that elicited strong or medium gene *** a computational algorithm,we predicted regulatory outputs for all possible PAM sequences,which spanned a large dynamic range that could be leveraged for regulatory *** newly identified features will facilitate the efficient design of CRISPR-dCpf1 based systems for tunable multiplex gene regulation.

关键词： dnase features holds

SERO-EPIDEMIOLOGICAL STUDIES OF EPSTEIN-BARR VIRUS(EBV) INFECTION BY TESTING ANTIBODIES AGAINST EBV SPECIFIC dnase(EDAb) AS A METHOD FOR EARLY DETECTION OF NASOPHARYNGEAL CARCINOMA(NPC)

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Chinese Journal of Cancer Research 1997年第3期9卷 41-48页

作者：黄迪陈海峰成吕玲方思明马建山张锦明陈丽珍范顺发李经略

In 1987, a mass survey of EDAb was carried out in Sihui county of Gunagdong Province (the highest incidence area of NPC in China) and the city of Guangzhou using the methods previously established by our lab. In order to study the correlation between EDAb level and NPC, the titre of DEAb and their distribution in sera from 430 patients with NPC and 5030 normal persons were detected. It was found that the AER (level of EDAb was represented by the anti enzyme rate) of NPC patients gave a negative skew distribution and the Md=65.3% while the natural population (30 59 years old) gave a serious positive skew distribution and the Md is 7.9%. According to the pattern of EDAb distribution curve of 430 NPC patients and 2060 natural population. AER≥30% was defined as a cut off point between EDAb positive and negative. Using this value we got a rate of 90.7% (390/430) positive diagnosis in NPC patients, while in natural population the positive rate was 3.3% (68/2060), and in the IgA/VCA positive (1:5) normal person the positive rate was 6.0% (41/681). As to the other tumors including head and neck tumors the positive rate was 3.4% (7/204), similar to the natural population. After a period of 62 months of follow up surveillance, 15 of 224 EDAb positive normal persons found in the mass survey were diagnosed as NPC by histopathological examination. While in 4806 EDAb negative normal person only one case NPC patient was found in this period. 60% of these patients were diag nosed in their early stage of NPC. From these patients it was found that EDAb could appear in the sera of the patients as early as 62 months before NPC was definitely diagnosed. 2 of these patients were shown IgA/VCA negative and EDAb positive in mass survey. This suggested that in some of the precancerous patients EDAb could appear earlier than IgA/VCA. The signifi cance of the sera EDAb positivity of normal person was discussed.

关键词： Nasopharyngeal carcinoma Epstein barr virus dnase Antibodies Sero epidemiology.

dnase I对金黄色葡萄球菌生物膜形成的影响

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南方医科大学学报 2015年第9期35卷 1356-1359页

作者：徐巧玲孙凤军冯伟刘晓刘亚巍总参警卫局卫生保健处北京100017 第三军医大学西南医院药剂科重庆400038 北京医院消化科北京100005

目的研究dnase I对金黄色葡萄球菌生物膜形成的影响。方法采用分光光度计法检测金黄色葡萄球菌的生长曲线,菌落计数法分析金黄色葡萄球菌的粘附能力,96孔板结晶紫染色法检测金黄色葡萄球菌生物膜的形成。结果不同浓度dnase I对金黄色葡... 详细信息

目的研究dnase I对金黄色葡萄球菌生物膜形成的影响。方法采用分光光度计法检测金黄色葡萄球菌的生长曲线,菌落计数法分析金黄色葡萄球菌的粘附能力,96孔板结晶紫染色法检测金黄色葡萄球菌生物膜的形成。结果不同浓度dnase I对金黄色葡萄球菌的生长无影响,然而能显著抑制细菌生物膜的形成,并呈浓度依赖性。此外,dnase I能抑制不同生长期金黄色葡萄球菌的粘附性。与抗菌药物和dnase I单独应用相比,dnase I和抗菌药物联合应用更能显著抑制和分解金黄色葡萄球菌成熟生物膜。结论 dnase I可以有效抑制金黄色葡萄球菌生物膜的形成,并能增强抗菌药物对金黄色葡萄球菌生物膜的抑制作用。

关键词：金黄色葡萄球菌 dnase I 生物膜粘附抑制作用

dnase Ⅰ对非黏液型和黏液型铜绿假单胞菌生物膜的影响

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华中科技大学学报（医学版） 2007年第6期36卷 776-779页

作者：倪明余冰田德英陈红云李霞宋佩辉华中科技大学同济医学院附属同济医院感染科武汉430030 华中科技大学同济医学院基础医学院病原生物学系武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院检验科武汉430030

目的研究不同浓度dnase Ⅰ对非黏液型和黏液型铜绿假单胞菌生物膜形成及成熟生物膜的影响。方法分光光度计法检测25、501、00 U/ml的dnase Ⅰ对非黏液型铜绿假单胞菌PAOⅠ和黏液型铜绿假单胞菌PA17生长曲线的影响;改良平板培养法建立生... 详细信息

目的研究不同浓度dnase Ⅰ对非黏液型和黏液型铜绿假单胞菌生物膜形成及成熟生物膜的影响。方法分光光度计法检测25、501、00 U/ml的dnase Ⅰ对非黏液型铜绿假单胞菌PAOⅠ和黏液型铜绿假单胞菌PA17生长曲线的影响;改良平板培养法建立生物膜模型,分别在生物膜形成过程中及生物膜形成后用25、50、100 U/ml的dnase Ⅰ处理,扫描电镜观察PAO Ⅰ和PA17的生物膜形态。结果随着dnase Ⅰ浓度增加,PAO Ⅰ和PA17的对数生长期延迟,但最终不能抑制细菌生长;25 U/ml的dnase Ⅰ即可抑制不同类型铜绿假单胞菌生物膜形成且分解成熟生物膜,100U/ml的dnase Ⅰ可完全阻止铜绿假单胞菌生物膜形成并彻底分解成熟生物膜。结论dnase Ⅰ不能直接杀灭铜绿假单胞菌,但可有效抑制铜绿假单胞菌生物膜形成并分解成熟生物膜,对非黏液型和黏液型铜绿假单胞菌生物膜的影响无明显差异,作用效果呈浓度依赖性。

关键词： dnase Ⅰ 铜绿假单胞菌生物膜

甲胎蛋白基因的dnase Ⅰ敏感性和超敏感区与基因表达的关系

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实验生物学报 1989年第2期22卷 205-211页

作者：林鑫华李文裕中国科学院上海细胞生物学研究所

我们用大鼠AFP基因cDNA pRAF 87和5'端基因克隆片段为探针,分别探测了AFP基因活跃表达的胚肝组织、具表达潜能的成年肝组织以及不表达的肾组织AFP基因转录区和调控区的dnase Ⅰ敏感性和超敏感区。结果表明;胚肝组织和成年肝组织AFP基因... 详细信息

我们用大鼠AFP基因cDNA pRAF 87和5'端基因克隆片段为探针,分别探测了AFP基因活跃表达的胚肝组织、具表达潜能的成年肝组织以及不表达的肾组织AFP基因转录区和调控区的dnase Ⅰ敏感性和超敏感区。结果表明;胚肝组织和成年肝组织AFP基因在转录区和5'端调控区都显示出较高的dnase Ⅰ敏感性,而肾组织则不敏感。胚肝组织AFP基因存在三个dnase Ⅰ超敏感区:基因转录起始区,离转录起始区上游约-3 kb左右区域,另一超敏感区位于基因内部4.1 kb EcoR Ⅰ片段内。成年肝组织在转录起始区也存在一超敏感区,在基因内部4.1 kb EcoR Ⅰ片段显示较高的dnase Ⅰ敏感性。推测AFP基因上游-3 kb区域(1.5 kb HindⅢ片段区)dnase Ⅰ超敏感区可能与增强基因转录活性相关,而转录起始区超敏感区可能是维持细胞组织专一性表达所必需,基因转录区域内部dnase Ⅰ超敏感区可能与AFP基因维持具活跃表达或潜能表达的染色质空间结构相关。

关键词：甲胎蛋白基因 dnase I 基因表达

dnaseⅠ消化前后的链球菌抗原对寻常性银屑病外周血单一核细胞增殖反应的影响

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中华皮肤科杂志 2007年第12期40卷 733-735页

作者：蔡怡华郑捷上海交通大学医学院附属瑞金医院皮肤科 200025

目的观察DNA酶（dnase Ⅰ）消化前后的链球菌抗原对寻常性银屑病患者外周血单一核细胞（PBMC）增殖反应的影响。方法寻常性银屑病患者15例，正常人10例。取外周抗凝血，分离并培养PBMC，分别使用A型B溶血型链球菌全菌抗原（SA）和dnase... 详细信息

目的观察DNA酶（dnase Ⅰ）消化前后的链球菌抗原对寻常性银屑病患者外周血单一核细胞（PBMC）增殖反应的影响。方法寻常性银屑病患者15例，正常人10例。取外周抗凝血，分离并培养PBMC，分别使用A型B溶血型链球菌全菌抗原（SA）和dnase Ⅰ消化后的链球菌抗原（dnase Ⅰ—SA）刺激PBMC，72h后采用，H—TdR掺入法检测并比较PBMC增殖反应的差异。结果dnase Ⅰ—SA与SA比较，无论在高浓度还是低浓度时，前者刺激患者PBMC增殖反应的能力均明显低于后者（P〈0．01）；在正常人，高浓度时dnase Ⅰ—SA对PBMC刺激的增殖反应与SA比较差异无统计学意义（P〉0．05），但在低浓度时dnase Ⅰ—SA刺激后细胞增殖反应的能力低于SA（P〈0．05）。进一步比较患者和正常人对SA和dnase Ⅰ—SA刺激后增殖反应的差异，发现当抗原浓度为25μg／mL时，患者PBMC对SA刺激后的增殖能力显著高于正常人（P〈0．05）；患者PBMC对dnase Ⅰ—SA三种剂量刺激后的增殖反应与正常人比较差异无统计学意义（P〉0．05）；同时，患者对SA和dnase Ⅰ—SA刺激后增殖反应的差值高于正常人，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论链球菌DNA可能参与了感染诱发银屑病的发生。

关键词：银屑病链霉菌属 dnase Ⅰ 细胞增殖

基于纳米操纵和单分子成像及分析技术的DNA与dnase I相互作用的表面机械生化过程和动力学研究

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电子显微学报 2009年第2期28卷 141-145页

作者：王鑫艳王化斌周化岚李海亓文鹏李宾张益胡钧中国科学院上海应用物理研究所上海201800 中国科学院研究生院北京100049 Bio-X生命科学研究中心上海交通大学上海200030

本文采用了"多步的改进的动态分子梳"纳米操纵技术(multi-step modified dynamic molecular combing,MMDMC)实现样品制备获得不同拉伸程度单个DNA分子,利用原子力显微镜重定位成像和单分子分析,对反应前后不同拉伸程度DNA分子的dnase I... 详细信息

本文采用了"多步的改进的动态分子梳"纳米操纵技术(multi-step modified dynamic molecular combing,MMDMC)实现样品制备获得不同拉伸程度单个DNA分子,利用原子力显微镜重定位成像和单分子分析,对反应前后不同拉伸程度DNA分子的dnase I酶切产生缺口情况进行统计,在一定拉伸范围内讨论了在表面上dnaseI酶切反应速率变化的动力学信息。该不同拉伸程度的DNA与dnase I相互作用的表面机械生化过程对于生物分子多次反复相互作用研究体系具有代表性意义。

关键词：机械生化现象原子力显微镜 dnase I 纳米操纵单分子研究表面