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Cryopreservation by Vitrification of Vitis vinifera cv. ＂Red Globe＂ Zygotic Embryos and Effect on the Expression of dna methyltransferase.Genes

引用

Journal of Agricultural Science and Technology(B) 2016年第6期6卷 387-399页

作者： Heriberto Garcia-Coronado Maria-Elena Baez-Flores Rosalba Troncoso-Rojas Marisela Rivera-Dominguez Martin-Emesto Tiznado-Hernandez Coordinacion de Tecnologia de Alimentos de Origen Vegetal Centro de Investigacion en Alimentacion y Desarrollo A.C. (CLAD)Hermosillo Sonora CP 83304 Mexico Facultad de Ciencias Quimico Biol6gicas Universidad Autonoma de Sinaloa Culiacan Sinaloa CP 80013 Mexico Coordinacion de Ciencia de los Alimentos Centro de Investigacion en Alimentacion y Desarrollo A.C. (CLAD) HermosilloSonora CP 83304 Mexico

Mexico is a large producer of table grape （Vitis vinifera L.） and therefore it is important to develop protocols to store the grape varieties germplasm. The objective of the present work was to design a protocol for the cryopreservation by vitrification of zygotic embryos of V. vinifera cv. ＂Red Globe＂ and evaluate possible epigenetics changes. The plant vitrification solution 2 （PVS2） was utilized before the utilization of liquid nitrogen （LN）. The effect of this protocol on embryo viability was tested by the triphenyl-tetrazolium chloride solution, as well as by the in vitro development of grape embryos into plantlet. A cdna expression library of grape zygotic embryos was created to isolate expressed sequence tags of several dna methyltrasferases. Gene expression of domains rearranged methyltransferase.type 1 （DMR1） and dna （cytosine-5）-methyltransferase.1 （MET1-2） isozymes was analyzed by quantitative reverse transcriptase PCR. The optimal conditions for vitrification were 10 min in 50% PVS2, followed by I0 min in 100% PVS2. Under these conditions, about 30% of plantlet was obtained from embryos after cryopreservation. It was recorded a reduction in the MET1-2 gene expression, which plays a role in the maintenance of dna methylation. It is possible to cryopreserve viable grape zygotic embryos, although the treatment seems to induce alterations in the normal dna methylation pattern of the zygotic embryo genome.

关键词： Vitis vinifera zygotic embryo cryopreservation vitrification dna methyltransferase.

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