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蒜鳞茎薄壁细胞衰退过程中内含物撤退机理的初步探讨

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蒜鳞茎薄壁细胞衰退过程中内含物撤退机理的初步探讨

作者：魏凤菊河北农业大学

学位级别：硕士

在由形态学角度初步推断蒜鳞茎薄壁细胞的衰退过程为PCD的前提下,本研究仍以蒜(Allium sativum L.)为材料,为从生化角度进一步证明该过程,利用琼脂糖电泳对薄壁细胞核dna进行了分析;同时利用电子显微镜技术,对休眠及解除休眠进程中薄壁... 详细信息

在由形态学角度初步推断蒜鳞茎薄壁细胞的衰退过程为PCD的前提下,本研究仍以蒜(Allium sativum L.)为材料,为从生化角度进一步证明该过程,利用琼脂糖电泳对薄壁细胞核dna进行了分析;同时利用电子显微镜技术,对休眠及解除休眠进程中薄壁细胞进行了酸性磷酸酶(Acid Phosphatase,APase)与三磷酸腺苷酶(Adenosine Triphosphatase,ATPase)的细胞化学定位,并进行了胞间连丝动态衍变的系统观察,以期探讨衰退细胞内含物撤退的机理。本试验的dna分析结果表明,随着休眠解除,核dna开始发生特异性降解,至萌芽期dna ladder表现越明显。这一结果为课题组的前期研究补充了生化角度的证据,进一步证明了蒜鳞茎薄壁细胞的衰退是一程序性死亡的过程,并为研究蒜鳞茎薄壁细胞内含物衰退的生理机制积累了资料。通过APase与ATPase的细胞化学定位观察发现,在蒜自收获后的整个发育过程中,两类酶随着发育时期的推进,呈现由成熟期、休眠期的少量分布到萌芽期的酶反应产物大量沉积的变化。成熟期薄壁细胞内的APase反应产物主要密集分布在初生纹孔场处,ATPase反应产物主要沉积于质膜和纹孔场周围,且呈连续分布,暗示着这一时期细胞间正进行着活跃的物质运输;休眠期两类酶表现出弱的活性状态,质膜、胞间连丝、细胞间隙以及细胞中的其他亚细胞结构上均只有少量的酶反应产物分布;随着休眠的解除,细胞内的各项生理活动逐步活跃起来,APase与ATPase活性相对增强,细胞间隙内出现带有酶活性的物质;直至萌芽期,酶活性显著增强,细胞间隙、胞间连丝及细胞核上有大量的酶反应产物出现,此时在细胞核上也可观察到大量分布的ATPase。通过酶的细胞化学定位研究,我们不难发现,在蒜鳞茎整个发育过程中,酶活性呈现明显的时空分布变化的动态特征,从而证明薄壁细胞的衰退是一个主动的、依赖能量的过程。表明细胞内物质的降解、转化与输出的加强有助于细胞内含物的彻底转移。在这一发育过程中,物质的运输途径——胞间联络也随着衰退进程的推进而发生着变化。胞间连丝由成熟期到萌芽期,长度增加,最终伸长的胞间连丝发生断裂,衍变为类外连丝。这种结构保证了衰退细胞内含物顺利的向存活细胞输出及彻底转移,最终为新生芽的生长作出贡献,实现物质的再分配与再利用。这一结果亦证明了类外连丝的出现是植物体发育进程中为适应特定时期生理功能需要的结果。结合以上试验结果可以推断,蒜在推陈出新的过程中,细胞内含物在APase等多种水解酶的作用下发生降解,由ATPase水解ATP来提供能量,动员各种运输成员使降解产物从正在发生程序性死亡的细胞(即邻近蒜辦内表皮的衰败细胞)发生如下变化:(1) 通过胞间连丝或类外连丝的共质体运输途径至维管束然后向下运输,为新生芽的生长提供营养;(2) 或者是经过细胞间隙的质外体途径运至生长中心,为幼芽的萌发生长提供营养。这种衰败细胞内含物的再分配和利用是一种完全受遗传程序控制的主动过程。

关键词：蒜细胞程序性死亡 dna ladder APase ATPase 胞间连丝

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荒漠藻胞外聚合物抗肿瘤活性及其机理研究

荒漠藻胞外聚合物抗肿瘤活性及其机理研究

作者：马红樱西北师范大学

学位级别：硕士

目的:荒漠藻在自身的正常代谢过程中,不断地向周围环境中分泌以多糖、蛋白糖为主的胞外聚合物。这些胞外聚合物是它们适应荒漠环境的生命支持系统,具有抗干旱、抗氧化、抗辐射、抗盐碱,及粘结沙粒等生态学功能。本文以皮肤癌细胞A431为... 详细信息

目的:荒漠藻在自身的正常代谢过程中,不断地向周围环境中分泌以多糖、蛋白糖为主的胞外聚合物。这些胞外聚合物是它们适应荒漠环境的生命支持系统,具有抗干旱、抗氧化、抗辐射、抗盐碱,及粘结沙粒等生态学功能。本文以皮肤癌细胞A431为供试细胞,研究了M. vaginatus, P. tenue, S. javanicum、Desmoloccus olvaceus和Nostoc sp.五种荒漠藻胞外聚合物对其细胞凋亡过程的影响,目的在于发现这些聚合物的抗肿瘤活性及其发挥作用的机理。方法:使用MTT法检测聚合物对A431细胞存活率的作用,用倒置显微镜直接观察A431细胞形态方面的变化,透射电镜再次揭示了细胞超微结构的改变;利用流式细胞仪分析了对A431细胞的存活率和细胞线粒体膜电位的变化,采用免疫组化法观察了caspase-3、bcl-2和bax蛋白的表达情况,利用琼脂糖凝胶电泳检测了细胞dna的降解,并测定了A431细胞内超氧阴离子自由基(O)、SOD、CAT和POD酶活性的变化。结果:EPSs在体外能够杀死A431细胞,并且有剂量-时间-效应依赖关系,凋亡率随时间延长增加;EPSs会造成A431细胞在G/M期的停滞。线粒体膜电位的变化为:在作用24小时后,开始降低,到72小时彻底崩溃,96小时线粒体破裂。免疫组化结果显示EPSs能促进caspase-3和bax蛋白的表达,而抑制bcl-2蛋白的表达。96小时后,dna开始降解成小片段。形态结构的变化如下:A431细胞经EPSs处理后,首先细胞变小成圆形或月牙形,胞间连接消失;超微结构显示细胞表面微绒毛消失,有“胞浆出芽现象”。细胞核凝集,染色质固缩、边缘化,形成不同形状和大小的块状;最后核膜破裂,凝聚的染色质散布到细胞浆中,没有发现凋亡小体的形成。在凋亡过程中,细胞自由基含量升高,抗氧化酶也随着发生了变化。推论:荒漠藻胞外聚合物具有明显的抗肿瘤活性。在A431细胞的凋亡过程中,胞外聚合物引起的细胞周期阻滞和线粒体膜电位降低可能是细胞凋亡的主要原因,其诱发因素很可能是自由基参与活化的caspase-3和bax下调了bcl-2的表达,使得细胞内抗氧化系统失去平衡,最后导致了细胞凋亡。

关键词：胞外聚合物皮肤癌细胞细胞凋亡细胞周期 G2/M期停滞免疫组化 caspase-3 bcl-2 bax dna ladder 超微结构自由基

F-2毒素对体外培养猪卵巢颗粒细胞的毒害及VE的控毒研究

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F-2毒素对体外培养猪卵巢颗粒细胞的毒害及VE的控毒研究

作者：贺军宇湖南农业大学

学位级别：硕士

F-2毒素是一种由三线镰刀菌等真菌产生的霉菌毒素。它的雌激素样作用能诱发机体的雌激素过多症和生殖道的生理变异，导致动物的生殖发育毒性和免疫毒性，同时，F-2毒素能降低畜禽产品的品质，对人类健康存在潜在的威胁。为此我们开展了... 详细信息

F-2毒素是一种由三线镰刀菌等真菌产生的霉菌毒素。它的雌激素样作用能诱发机体的雌激素过多症和生殖道的生理变异，导致动物的生殖发育毒性和免疫毒性，同时，F-2毒素能降低畜禽产品的品质，对人类健康存在潜在的威胁。为此我们开展了此项研究。研究目的：探讨F-2毒素对体外培养的猪卵巢颗粒细胞的毒性损伤作用，并应用维生素E作为一种控毒剂，来阐明对F-2毒素的控毒机制。为有效控制F-2毒素的体内毒性及研制有效的控毒制剂提供科学的理论依据。研究方法：以猪卵巢颗粒细胞为实验模型，采用一次性注射器吸取获得卵巢颗粒细胞进行体外培养;用噻唑兰(MTT)法检测浓度分别为80μg／ml、20μg／ml、5μg／ml、1.25μg／ml的F-2毒素对猪卵巢颗粒细胞的杀伤作用，同时检测在上述各F-2毒素组中加入50 mg／ml VE的各控毒组细胞活力;用单细胞凝胶电泳检测判定毒素组细胞是否产生了dna断裂和控毒组VE对细胞的保护作用;用黄嘌呤氧化酶法检测不同剂量F-2毒素组和添加了VE的控毒组对卵巢颗粒细胞内和细胞培养液内的SOD活性的影响;用硫代巴比妥酸法测定各实验组细胞培养液内的MDA含量;用dna ladder梯状带以判定卵巢颗粒细胞是否发生凋亡。实验结果：采用一次性注射器吸取获得卵巢颗粒细胞，其活率在85～95％之间;5μg／ml、20μg／ml、80μg／ml的F-2毒素对卵巢颗粒细胞的生长具有抑制作用，并有时间和剂量依赖性;80μg／ml、20μg／ml的F-2毒素能够使细胞dna严重受损，拖尾率分别达到82.67％和80.33％，VE能够控制F-2毒素对细胞毒害;各毒素组细胞培养液中的SOD活性都明显下降，MDA含量显著升高;在控毒组中，80μg／ml F-2毒素+50mg／ml VE的控毒组SOD活性下降，MDA含量升高，其他控毒组SOD活性正常，MDA含量稍有升高;在实验中没有检测到dnaladder梯状带。结论：F-2毒素能抑制体外培养的猪卵巢颗粒细胞的增殖，并能损伤细胞dna，导致细胞膜多不饱和脂肪酸脂质过氧化;维生素E具有较好的控毒作用，能提高攻毒卵巢颗粒细胞的抗氧化能力;F-2毒素的毒害机理可能是通过细胞膜脂质过氧化作用，破坏细胞膜，损害细胞dna。维生素E可能作为一种抗氧化剂或F-2毒素结构类似物，而起到保护细胞的作用。

关键词： F-2毒素卵巢颗粒细胞培养单细胞凝胶电泳维生素E dna ladder MTT SOD MDA

九节龙皂苷Ⅰ诱导口腔粘液表皮样癌高转移细胞株凋亡作用的研究

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九节龙皂苷Ⅰ诱导口腔粘液表皮样癌高转移细胞株凋亡作用的研究

作者：张桃莉第四军医大学

学位级别：硕士

目的: 研究九节龙皂苷Ⅰ(ardipusilloside I,ADS I)对口腔粘液表皮样癌高转移细胞株Mc3的增殖、凋亡及细胞周期的影响,初步探讨ADS I可能的抗肿瘤作用机制方法:以不同浓度的ADS I作用于口腔粘液表皮样癌Mc3细胞,采用MTT法观察ADS I对... 详细信息

目的: 研究九节龙皂苷Ⅰ(ardipusilloside I,ADS I)对口腔粘液表皮样癌高转移细胞株Mc3的增殖、凋亡及细胞周期的影响,初步探讨ADS I可能的抗肿瘤作用机制方法:以不同浓度的ADS I作用于口腔粘液表皮样癌Mc3细胞,采用MTT法观察ADS I对口腔粘液表皮样癌Mc3细胞增殖的影响;采用Hoechest 33342染色法和透射电镜(TEM)观察细胞形态学的变化;采用AnnexinV/PI双染色法检测细胞凋亡情况;采用流式细胞术PI单色标记法检测Mc3细胞周期的改变;采用dna琼脂糖凝胶电泳法检测凋亡特异性梯状dna;采用免疫组化法检测抗凋亡蛋白Bcl-2及促凋亡蛋白caspase-3表达的变化。结果:ADS I作用于Mc3细胞后,小剂量对细胞杀伤作用较轻,随着药物浓度的增加, ADS I能显著抑制Mc3细胞增殖而且呈明显的浓度、时间依赖关系,作用于Mc3细胞48h的IC50值为9.98ug/ml。Hoechest 33342染色法和透射电镜观察到细胞形态学上的变化,包括细胞皱缩,微绒毛消失,染色质固缩集聚至核膜周边呈新月形。流式细胞仪检测未经药物作用的细胞凋亡率为11.63±0.16%,2.5、5、10ug/ml ADS I作用24后的凋亡率为15.57±0.07%,25.63±0.18%,86.27±0.04%;细胞周期阻滞在S期;琼脂糖凝胶电泳结果显示,10ug/ml ADS I作用于Mc3细胞24后,可见凋亡细胞典型的梯状dna条带,Western blotting结果显示,caspase-3和Bax蛋白表达量增高,Bcl-2蛋白表达量降低。结论: 1. ADS I具有抑制口腔粘液表皮癌细胞增殖,阻滞细胞周期进程的作用,其抑制作用呈浓度时间依赖性。 2. ADS I有诱导Mc3细胞凋亡作用。 3. ADS I诱导细胞凋亡作用可能是通过引起细胞dna受损,上调caspase-3和Bax蛋白表达和下调Bcl-2蛋白表达而达到的。

关键词： ADS I Mc3细胞 caspase-3 Bcl-2 dna ladder 凋亡

高温、失水胁迫下坛紫菜细胞程序性死亡分子机制的初步研究

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高温、失水胁迫下坛紫菜细胞程序性死亡分子机制的初步研究

作者：仵燕青集美大学

学位级别：硕士

坛紫菜(Pyropia haitanensis)广泛栽培于我国南方沿海,其在自然分布以及实际生产中都需经历高温、失水等逆境胁迫过程。本研究以本课题组选育的耐高温型品系Z-61为材料,对高温和失水胁迫下的坛紫菜细胞进行了形态学观察、dna ladder检测... 详细信息

坛紫菜(Pyropia haitanensis)广泛栽培于我国南方沿海,其在自然分布以及实际生产中都需经历高温、失水等逆境胁迫过程。本研究以本课题组选育的耐高温型品系Z-61为材料,对高温和失水胁迫下的坛紫菜细胞进行了形态学观察、dna ladder检测和TUNEL、DAPI染色观察。同时以坛紫菜转录组数据为基础,筛选出了坛紫菜细胞程序性死亡诱导通路的相关基因,通过RACE和普通PCR扩增获得了相关基因的全长,并对其进行了生物信息学分析和表达定量分析。综合以上结果,初步探讨了坛紫菜在高温和失水胁迫下细胞程序性死亡的调控机制,为坛紫菜的抗逆机制研究提供了新思路。主要的实验结果如下:*** ladder分析结果表明,高温胁迫下,在Z-61品系和野生型WT品系中均观察到了明显的dna ladder现象;TUNEL和DAPI染色结果进一步证明了高温胁迫下坛紫菜两个品系在不同温度处理时间点下都发生了细胞程序性死亡。同时,普通光学显微镜结果也发现高温胁迫下两个品系都出现了不同程度的细胞死亡。*** ladder分析结果表明,失水胁迫下,在Z-61品系和野生型WT品系中均观察到了明显的dna ladder现象,说明失水胁迫下坛紫菜可能会发生细胞程序性死亡。3.采用RACE技术和普通PCR扩增技术相结合,克隆得到了6条坛紫菜细胞程序性死亡相关基因的全长序列,分别命名为Ph Cyt c、Ph Cyt c1、Ph Cap L、Ph Cap L1、Ph IAP、Ph RZF。它们的序列长度分别为607、1223、1586、2109、704和702bp,可分别编码164、205、443、681、231和156个氨基酸的蛋白质。4.采用实时荧光定量PCR技术分析了6条基因在高温和失水胁迫条件下的表达水平变化,结果显示,坛紫菜Z-61品系中大部分基因的表达水平在高温和失水胁迫处理下都呈现为上调表达,而高温胁迫下WT品系中大部分基因则呈现为下调表达。由此推测,坛紫菜Z-61品系在应答高温和失水胁迫时都存在着完整的细胞程序性死亡分子调控通路。

关键词：坛紫菜高温胁迫失水胁迫细胞程序性死亡 DAPI TUNEL dna ladder 荧光定量PCR

Duck Enteritis Virus Induce Lymphocytes Apoptosis in vivo

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Duck Enteritis Virus Induce Lymphocytes Apoptosis in vivo

盐胁迫诱导水稻根尖细胞程序性死亡过程中的核酸内切酶

第三届第八次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛

作者： Yuan Guiping,Cheng Anchun,Wang Mingshu, Han Xiaoying, Zhou Yi, Liu Fei, Guo Yufei,Liao Yonghong, Xu Chao, Wen Ming, Jia Renyong, Zhou Weiguang, Chen Xiaoyue Sichuan Key Laboratory of Animal Disease and Human Health,Avian Disease Research Center, Department of Animal Science and Veterinary Medicine,Sichuan Agricultural University,Yaan,Sichuan,625014,China

To investigate the mechanisms of duck enteritis virus (DEV) associated lymphocyte depletion in the lymphoid organs during acute infection of its natural host. The in vivo effects of duck enteritis virus on the immune systems of ducks were investigated. Fifty Peking ducks aged two months were inoculated subcutaneously with a virulent field strain of duck enteritis virus. The morphology of lymphoid organs of those infected ducks was observed by light microscope and electron microscope. Apoptosis was also identified by in situ terminal deoxynucleotidyltransferase-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL) and agarose gel electrophoresis *** results shows that the lymphocytes in thymus, bursa of fabricus and spleen underwent apoptosis and necrosis at the same time. DEV induced ultrastructural changes characteristic of apoptotic cell death since 24 h after infection. dna fragmentation of a 200bp ladder and TUNEL positive cells in lymphoid organs were also demonstrated. It was concluded that the apoptosis and necrosis of lymphocytes induced by DEV infection resulted in the depletion of lymphocytes, and the apoptosis of lymphocytes may play an important role in the pathogenesis of duck viral enteritis. These findings suggest that DEV can induce in vivo apoptosis of lymphocytes in ducks and support the notion that DEV infection may play an important role in the pathogenesis of duck viral enteritis.

关键词： Duck Enteritis Virus Apoptosis Lymphocytes Light Microscopy Electron Microscopy dna ladder TUNEL

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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盐胁迫诱导水稻根尖细胞程序性死亡过程中的核酸内切酶

作者：姜爱良南京农业大学

学位级别：硕士

以盐敏感水稻品种武运粳8号为材料,研究了盐胁迫对其根尖细胞程序性死亡(PCD)的诱导情况,确定了PCD的诱导条件。结果表明:高浓度盐胁迫(500 mmol/LNaCl)后,水稻根尖细胞呈现明显的PCD特征,例如:dna片段化,细胞核浓缩变形以及TUNEL阳性... 详细信息

以盐敏感水稻品种武运粳8号为材料,研究了盐胁迫对其根尖细胞程序性死亡(PCD)的诱导情况,确定了PCD的诱导条件。结果表明:高浓度盐胁迫(500 mmol/LNaCl)后,水稻根尖细胞呈现明显的PCD特征,例如:dna片段化,细胞核浓缩变形以及TUNEL阳性反应。这些细胞核事件从处理4 h后开始出现,随着时间延长,更加明显。此外,盐胁迫处理还能引起细胞色素c(Cytc)从线粒体释放到细胞质,该现象在胁迫处理2h即被观察到,早于上述细胞核事件。以上述实验体系为模型,研究了PCD对细胞质,细胞核中核酸酶活性的诱导情况,以及PCD相关核酸酶的性质分析。核酸酶活性电泳结果表明:500mmolNaCl处理水稻根尖2h后,细胞质,细胞核组分中都有新的核酸酶活性条带出现,根据其亚细胞定位和分子量分别命名为OsCyt20,OsNuc37。药理学研究发现,细胞质PCD相关核酸酶OsCyt20为Ca/Mg依赖型,最适pH在7.0,Zn、EDTA对其活性都有强烈抑制作用。体外酶切实验表明,包括OsCyt20在内的细胞质核酸酶都不能导致细胞核染色体dna发生特异性切割形成dna ladder。细胞核PCD相关核酸酶OsNuc37为Zn依赖型,最适pH在4.5—6.0,EDTA对其活性有强烈抑制作用。糖结合试验证明OsNuc37是一个糖蛋白。体外酶切实验表明,OsNuc37能够导致细胞核染色体dna发生特异性切割,形成dna ladder。综合上述研究结果,本文鉴定了一个新的细胞程序性死亡相关核酸内切酶OsNuc37。在盐胁迫诱导水稻根尖细胞PCD过程中,OsNuc37负责细胞核染色体dna的降解。本文的研究结果为进一步揭示植物细胞PCD的分子机制提供了依据。

关键词：水稻盐胁迫细胞程序性死亡 dna ladder 核酸酶

丙型肝炎病毒基因型及F蛋白与丙型肝炎慢性化、肝癌细胞凋亡的关系研究

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丙型肝炎病毒基因型及F蛋白与丙型肝炎慢性化、肝癌细胞凋亡的关...

作者：杨静静南京医科大学

学位级别：硕士

丙型肝炎病毒(HCV)感染所引起的丙型肝炎呈全球分布。据WHO估计,目前全世界约有1.8亿HCV感染者,且呈增长趋势,特别是在静脉注射吸毒人群(IDUs)中HCV的感染率远远高于一般人群,是重要的传染源。HCV感染所致的丙型肝炎慢性化率高达75%～8... 详细信息

丙型肝炎病毒(HCV)感染所引起的丙型肝炎呈全球分布。据WHO估计,目前全世界约有1.8亿HCV感染者,且呈增长趋势,特别是在静脉注射吸毒人群(IDUs)中HCV的感染率远远高于一般人群,是重要的传染源。HCV感染所致的丙型肝炎慢性化率高达75%～85%,可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化,部分患者可发展为肝硬化甚至肝细胞癌,对人类的健康和生命构成了严重威胁。HCV感染慢性化是病毒变异与宿主免疫相互作用的结果。HCV基因组呈现较高的变异性,表现为准种(quasi-species)变异和不同地区优势病毒株的基因型不同。变异的主要目的在于逃避宿主的免疫监视,从而能在宿主体内持续存在,形成慢性感染。HCV基因型分布存在地理性差异,我国大部分地区主要流行的HCV型别为基因1b型,其次为基因型2a。在南方城市基因1b型感染率占90%以上。国内外相关研究表明,基因1b型在慢性肝炎、肝硬化和肝癌中占绝大多数,提示基因1b型与HCV感染慢性化有关。丙型肝炎病毒属黄病毒属,全长约9.6kb,为一单股正链RNA,分为5’非翻译区(UTR)、一个开放读码框(ORF)和3’非翻译区,编码一个由3000多个氨基酸组成的复合蛋白前体,在宿主信号肽酶和病毒蛋白酶的作用下裂解产生至少10种基因产物:四种结构蛋白(Core、E1、E2、p7)和六种非结构蛋白(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B)。在HCV编码的十几种蛋白中,核心蛋白(Core,简称C)是HCV多聚蛋白前体经细胞信号肽酶剪切而产生的非糖基化蛋白,由191个氨基酸(aa)组成。该蛋白的氨基酸序列十分保守,具有调控多种细胞基因,影响细胞生长、增生及凋亡的能力。近年来外国学者在感染HCV的患者血清中发现了HCV F蛋白,是由HCV C基因编码的另一个产物,它是由C基因密码子核苷酸移位后产生的。其在HCV不同基因型的高度保守性和在患者体内抗体的存在,显示F蛋白在HCV生命周期中起重要作用。2003年Boulant在研究HCV 1b型C基因在***内的表达情况时,发现了双移位F蛋白(ARFP/DF)。DF蛋白以1b型C基因的AUG为启动子,按照C基因阅读框翻译到42位aa时,发生-2/+1框移位,然后按照C+1阅读框翻译,到达第144位aa时再次发生移位,重新按照C基因阅读框翻译,直至终止子。DF是部分F基因与部分C基因的嵌合性产物,是一种F-C蛋白嵌合体,在其产生过程中核糖体发生了两次移位。目前国内外尚无对DF的功能研究。为了研究HCV基因型与F蛋白抗体在江苏吸毒人群HCV患者中分布情况,探讨HCV基因型、F蛋白抗体与HCV感染慢性化的关系以及HCV1b型DF蛋白与肝细胞癌(HCC)之间的关系。我们进行了如下研究:第一部分丙型肝炎病毒基因型及F蛋白抗体与吸毒人群丙型肝炎病毒感染关系的研究目的:研究HCV基因型及F蛋白抗体与吸毒人群HCV感染慢性化之间的关系。方法:本研究对象为南京市强制戒毒所HCV抗体阳性强制戒毒人员360人,根据血样检测HCV RNA及ALT水平分为持续感染组168人(HCV RNA阳性,ALT≥40 U/L)及自限清除组192人(HCV RNA阴性,ALT<40 U/L)。分别应用HCV RNA基因分型检测试剂盒HCV和酶联免疫方法( MUREX HCVSerotyping 1-6 Assay)检测HCV基因型和HCV血清型;将本实验室纯化后的重组表达蛋白HCV-F/GST作为抗原包被酶联反应板,以两组待测血清标本为一抗,辣根过氧化物酶标记的抗人IgG抗体为二抗,以GST蛋白孔作为本底对照,ELISA间接法分别检测两组血清。结果:通过比较HCV持续感染者和自限清除者之间的人口学特征、HCV分型和F蛋白抗体分布差异,分析得出:持续感染组和自限清除组之间性别构成差异有统计学意义;持续感染组的基因1型及混合基因型所占百分比比自限清除组稍高,而基因2型却相反。两组间基因分型构成比有显著性差异(P<0.05);持续感染组的HCV-F抗体阳性率比自限清除组略高(36.3% vs 27.6%);采用单因素和多因素logistic回归分析,结果发现男性患者(OR=1.43;95%CI,1.03-2.49;P=0.032)、感染HCV基因1型(OR=4.18;95%CI,2.14-8.13;P=0.0001)、HCV-F抗体阳性(OR=1.73;95%CI,1.08-2.47;P=0.047)能够增加HCV感染慢性化的风险。结论:吸毒人群中男性患者、感染HCV基因1型或HCV-F抗体阳性更易导致HCV感染慢性化。由于国内外尚无HCV-F抗体与HCV感染转归的报道,且吸毒人群HCV基因型的感染呈现复杂趋势,开展HCV感染慢性转归影响因素研究,

关键词：丙型肝炎病毒 HCV基因型 F蛋白抗体 HCV持续感染自限清除慢性化双移位F蛋白 HepG2 凋亡肿瘤坏死因子α 流式细胞术 dna ladder

雷公藤内酯醇与传统抗肿瘤药联合抗人肝癌SMMC-7721细胞活性研究及机理探讨

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雷公藤内酯醇与传统抗肿瘤药联合抗人肝癌SMMC-7721细胞活性研究...

作者：吴世成武汉大学

学位级别：硕士

雷公藤内酯醇与传统抗肿瘤药物阿霉素和羟基喜树碱联合作用对体外培养人肝癌SMMC-7721细胞,主要检测指标是细胞形态观察,台盼蓝染色,MTT染色,dna ladder等,检测药物对肿瘤细胞的杀伤作用。 SD大鼠经济、易饲养、易获得,... 详细信息

雷公藤内酯醇与传统抗肿瘤药物阿霉素和羟基喜树碱联合作用对体外培养人肝癌SMMC-7721细胞,主要检测指标是细胞形态观察,台盼蓝染色,MTT染色,dna ladder等,检测药物对肿瘤细胞的杀伤作用。 SD大鼠经济、易饲养、易获得,且模型成功率高,自然消退率低,是建立移植性肝癌模型的理想选择。将人肝癌SMMC-7721细胞皮下种植在SD大鼠上,静脉注射雷公藤内酯醇,游标卡尺测量肿瘤体积大小,软件分析数值可靠性。 Caspase家族属于天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶,围绕活性中心位点半胱氨酸的氨基酸残基是保守的。正常情况下,胞质中的Caspase-3以无活性的酶原形式存在,只有当细胞凋亡时,才被激活为有活性的Caspase-3。测定肿瘤细胞培养时药物联合作用细胞时caspase-3表达情况,以探讨药物联合作用的分子生物学机理。与对照组相比,体外培养肿瘤细胞在用甲素处理后活细胞大幅减少,而甲素与阿霉素或羟基喜树碱联合作用比单独用一种药物的杀细胞效果要强得多。体内接种肿瘤细胞在用药后,肿瘤块体积较小且增长缓慢,而对照组肿瘤体积却大幅增长;雷公藤内酯醇与阿霉素或羟基喜树碱联合用药作用体外培养肿瘤细胞后,caspase-3表达明显上调。得出结论:雷公藤内酯醇对体外和体内培养的人肝癌SMMC-7721细胞有明显的促凋亡作用。它与传统抗肿瘤药联合作用该细胞时呈现强烈的协同作用;其对肿瘤细胞的杀伤作用与caspase-3的激活有关。

关键词：雷公藤内酯醇人肝癌SMMC-7721 细胞培养 dna ladder SD大鼠 caspase-3