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冬虫夏草与5种人工发酵菌丝体的dna分子鉴别方法

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药物分析杂志 2015年第8期35卷 1354-1357页

作者：张文娟王晓张萍魏锋马双成中国食品药品检定研究院北京100050

目的:建立冬虫夏草与人工发酵菌丝体的鉴别方法。方法:通过聚合酶链式反应(PCR),扩增基因组上的核糖体基因内转录间隔区(ITS),继而用限制性内切酶XhoⅠ对该聚合酶链式反应产物进行酶切,将酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳及紫外成像;通过聚... 详细信息

目的:建立冬虫夏草与人工发酵菌丝体的鉴别方法。方法:通过聚合酶链式反应(PCR),扩增基因组上的核糖体基因内转录间隔区(ITS),继而用限制性内切酶XhoⅠ对该聚合酶链式反应产物进行酶切,将酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳及紫外成像;通过聚合酶链式反应扩增线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)的编码基因,将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳及紫外成像。结果:冬虫夏草ITS的PCR产物能够被XhoⅠ酶切成2个片段。而5种人工发酵菌丝体中,有4种不能够被酶切;由于来源于冬虫夏草无性型中华被毛孢,百令胶囊可被酶切且切割条带大小与冬虫夏草组一致。冬虫夏草样品全部扩增得到COⅠ基因(COⅠ)片段,而5种人工发酵菌丝体均未扩增出该片段。结论:结合聚合酶链式反应限制性内切酶片段长度多态性法以及COⅠ聚合酶链式反应扩增,可以鉴别冬虫夏草与人工发酵菌丝体。

关键词：冬虫夏草 dna鉴别聚合酶链式反应(PCR) 内转录间隔区(ITS) 细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因

市售乌梢蛇及其常见混淆品的鳞片微形态鉴别研究

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中国现代应用药学 2020年第14期37卷 1698-1703页

作者：郭利霄齐兰婷苏畅郑倩赵建成侯芳洁郑玉光河北中医学院药学院河北省中药炮制技术创新中心石家庄050200 石家庄市食品药品检验中心石家庄050023 石家庄市中医院石家庄050051 河北师范大学生命科学学院石家庄050011 河北化工医药职业技术学院石家庄050026

目的通过对乌梢蛇的头部及体部鳞片的微形态鉴别,将乌梢蛇与其常见的混淆品进行区分,为乌梢蛇药材和饮片的鉴别提供依据。方法用VHX-6000数码成像显微镜对乌梢蛇及其混淆品的头部鳞片进行3D观察,采用景深合成技术与大图拼接技术相结合,... 详细信息

目的通过对乌梢蛇的头部及体部鳞片的微形态鉴别,将乌梢蛇与其常见的混淆品进行区分,为乌梢蛇药材和饮片的鉴别提供依据。方法用VHX-6000数码成像显微镜对乌梢蛇及其混淆品的头部鳞片进行3D观察,采用景深合成技术与大图拼接技术相结合,拍摄高清特征图。用光学显微镜对体部鳞片的端窝、薄膜囊、乳头突以及纵直纹理进行观察,并通过成像系统拍摄其特征图。最后通过dna条形码技术对以上结果进行验证,保证微形态鉴别的准确性和可靠性。结果市场上乌梢蛇品种混乱,主要有以下几种伪品:滑鼠蛇、灰鼠蛇、Cerberus rynchops(Colubridae)、王锦蛇、黑眉锦蛇等,与之前报道的伪品有所不同。结论通过微形态鉴别能够很好区分乌梢蛇及其混淆品药材和饮片,并且鉴别特征稳定不易发生变化。

关键词：乌梢蛇 3D景深合成技术微形态鉴别 dna鉴别

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基于微性状鉴别法的水蛭生药学研究

时珍国医国药 2021年第12期32卷 2930-2932页

作者：侯芳洁樊伟旭杨言言宋军娜河北中医学院河北省中药炮制技术创新中心河北石家庄050000

目的通过微性状鉴别的方法鉴定水蛭及其混伪品,结合dna鉴别佐证微性状鉴别的准确性,并对市售水蛭药材的重金属含量和酸碱度进行测定,综合评价市售水蛭药材的质量。方法采用3D景深合成技术和3D大图拼接技术对市售水蛭进行微性状鉴别,查... 详细信息

目的通过微性状鉴别的方法鉴定水蛭及其混伪品,结合dna鉴别佐证微性状鉴别的准确性,并对市售水蛭药材的重金属含量和酸碱度进行测定,综合评价市售水蛭药材的质量。方法采用3D景深合成技术和3D大图拼接技术对市售水蛭进行微性状鉴别,查阅相关文献比对鉴别,并测定其Cytb序列进行结果验证。采用ICP-MS法测定其重金属的含量及酸碱度。结果通过微性状鉴别可以区分水蛭及其混淆品,其不同品种的水蛭体背颜色及纹理、颚齿的形态、生殖孔所在的环节等微性状特征有明显区别。共鉴定出正品宽体金线蛭Whitmania pigra Whitman、伪品菲牛蛭Poecilobdella manillensis和Erpobdella bscur。dna鉴别结果与微性状鉴别结果一致。市售水蛭的砷(As)含量容易超标,酸碱度一般均符合规定。结论微性状鉴别可以准确的鉴别水蛭及其混伪品,该方法操作简便、快捷。

关键词：水蛭微性状鉴别 dna鉴别生药学

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基于微性状鉴别法的乌梢蛇质量评价研究

基于微性状鉴别法的乌梢蛇质量评价研究

作者：郭利霄河北中医学院

学位级别：硕士

目的:动物药是我国中药的重要组成部分,早在《神农本草经》中就有记载。由于动物药野生资源短缺、养殖技术不成熟等原因使其价格昂贵,市场上存在大量的伪品,甚至同科属动物来冒充正品,以假乱真,不易识别。快速鉴别动物药的真伪成为一个... 详细信息

目的:动物药是我国中药的重要组成部分,早在《神农本草经》中就有记载。由于动物药野生资源短缺、养殖技术不成熟等原因使其价格昂贵,市场上存在大量的伪品,甚至同科属动物来冒充正品,以假乱真,不易识别。快速鉴别动物药的真伪成为一个亟待解决的问题,本研究主要通过微性状鉴别的方法对乌梢蛇及其混淆品进行鉴别,并拍摄其3D高清特征图,再通过dna条形码鉴别对微性状鉴别结果进行验证。另外对其性状和显微、重金属含量、浸出物含量以及氨基酸相对含量进行系统研究,保障临床用药的安全性和有效性。方法:1.微性状鉴别:本研究对市售乌梢蛇进行收集,采用3D技术对乌梢蛇头部及体部的鳞片、鼻骨、顶骨、椎骨进行微性状鉴别。随机选取乌梢蛇及其混淆品椎骨(n=100),对其棘突的高度与整个骨骼高度比值进行测量,用SPSS22.0软件进行统计学分析。***条形码鉴别:采用聚合酶链式反应法(Polymerase Chain Reaction,PCR),提取样品的dna,利用Cytb引物进行PCR扩增并测序,MEGA5.1软件进行分析,并采用邻接法(NJ)构建系统聚类树。3.乌梢蛇及其混淆品的质量评价研究:对乌梢蛇及其混淆品性状和显微进行鉴别;电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)对其铅(Pb)、镉(Cd)、汞(Hg)、砷(As)进行含量测定;热浸法对乌梢蛇的醇溶性浸出物进行测定;采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)法对乌梢蛇及其混淆品的氨基酸相对含量进行测定。结果:1.市场上乌梢蛇的品种较为混乱,共有样品36份,12份为正品乌梢蛇Zaocys dhumnades(Cantor),其它均为混淆品。其中7份为滑鼠蛇Ptyas mucosa(Linnaeus)、8份为灰鼠蛇Ptyas korros(Schlegel)、3份为舟山眼镜蛇Naja atra Cantor、1份为黑眉锦蛇Orthriophis taeniurus Cope、1份为王锦蛇Elaphe carnata(Cunther)、3份为闪鳞蛇Xenopeltis unicolor Reinwardt、1份为Cerberus rynchops(Colubridae)与之前研究所报道的伪品有所不同。通过鉴别颊鳞、体部鳞片类型、鳞片端窝、薄膜囊、纵直条纹、基部指纹样纹理以及鼻骨和顶骨的形态、椎骨棘突的高度等可以将乌梢蛇正品与混淆品区分开。统计学分析结果显示,乌梢蛇的棘突高度与整个椎骨高度比值与其混淆品之间有显著性差异,其棘突高度最高,为2.82～5.80 mm,这与传统性状鉴别中“剑脊”一词相对应。2.经dna条形码鉴别并进行聚类分析,显示不同蛇类分成不同种类,每个品种均有良好的单系性。与微性状鉴别结果一致,证明微性状鉴别的准确性、可靠性,可以达到快速鉴别的目的。3.乌梢蛇重金属含量测定结果表明砷(As)含量易超标,个别样品As含量超出规定值5倍。醇溶性浸出物基本符合2015年版《中国药典》中醇溶性浸出物的规定。通过GC-MS法共检测到脯氨酸、D-脯氨酸、亮氨酸、D-亮氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、羟基脯氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、酪氨酸共16种氨基酸,相对含量最高的为甘氨酸,最低为异亮氨酸。其中丙氨酸的相对含量在正伪品中有显著性差异。结论:1.经dna分子验证,微性状鉴别的方法所寻找的乌梢蛇鉴别特征稳定,不易随外界的变化而改变。采用以上鉴别特征对乌梢蛇的药材、饮片都能进行准确的鉴别。2.乌梢蛇砷(As)的含量易超标,醇溶性浸出物基本符合2015年版《中国药典》规定。乌梢蛇与其混淆品的丙氨酸相对含量有显著性差异,其余氨基酸的相对含量无明显差异。3.微性状鉴别运用3D景深合成技术和3D大图拼接技术可以拍摄乌梢蛇的正品及其混淆品的3D高清特征图,为乌梢蛇的鉴别提供了有力的鉴别依据。该方法操作简单、使用方便、成本低,适合大面积推广使用,是现场快检的一种重要手段。

关键词：乌梢蛇微性状鉴别 dna鉴别混淆品质量评价

金钱白花蛇及其混伪品的骨骼和鳞片微性状鉴别研究

同方学位论文库评论

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辽宁中医药大学学报 2024年

作者：侯芳洁林相武樊伟旭杨言言郑玉光孙宝惠河北中医药大学药学院中药鉴定与炮制教研室河北省中药炮制技术创新中心河北化工医药职业技术学院河北省药品检验研究院

目的：本实验对金钱白花蛇及其混伪品各部分的性状、微性状、显微特征及相关的理化指标进行研究，为其真伪鉴别和质量标准提供依据。方法：对市售金钱白花蛇进行收集，采用3D技术对金钱白花蛇头部及体部的鳞片、鼻骨、顶骨、椎骨进行微... 详细信息

目的：本实验对金钱白花蛇及其混伪品各部分的性状、微性状、显微特征及相关的理化指标进行研究，为其真伪鉴别和质量标准提供依据。方法：对市售金钱白花蛇进行收集，采用3D技术对金钱白花蛇头部及体部的鳞片、鼻骨、顶骨、椎骨进行微性状鉴别。随机选取金钱白花蛇及其混伪品前部与中部椎骨（n=20），使用SPSS 26.0对后关节突两尖端距离的最大值与前关节突两端的距离最大值的比值进行统计学分析。采用聚合酶链式反应法（PCR），提取样品的dna，利用COI引物进行PCR扩增并测序，MEGA 5.1软件进行分析，并采用邻接法（NJ）构建系统聚类树。结果：通过对鳞片、骨骼的微性状可以鉴别金钱白花蛇正品与混伪品。统计学分析结果显示，金钱白花蛇椎骨中后关节突两尖端距离的最大值与后关节突两端的距离最大值的比值小于其混伪品的比值。结论：通过微性状鉴别能很好区分正伪品的药材和饮片，并且鉴别特征稳定。

关键词：金钱白花蛇 3D景深合成技术微性状 dna鉴别醇浸出物