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一种嗜热耐酸古细菌JP2菌株编码的热稳定dna连接酶的生物化学及酶学特性研究(英文)

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生物化学与生物物理进展 2006年第9期33卷 881-889页

作者：兰海燕刘纯 HENDRY PHIL 新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室乌鲁木齐830046 Molecular Science Division CSIRONorth RydeNSW1670Australia

对分离自巴布亚新几内亚地热活跃区的一种嗜热耐酸古细菌——JP2菌株中的dna连接酶基因进行了克隆、表达、纯化,并对其生物化学及酶学特性进行了研究.对其核酸及氨基酸序列的分析表明:JP2菌株的dna连接酶与古细菌种Sulfolobussolfatari... 详细信息

对分离自巴布亚新几内亚地热活跃区的一种嗜热耐酸古细菌——JP2菌株中的dna连接酶基因进行了克隆、表达、纯化,并对其生物化学及酶学特性进行了研究.对其核酸及氨基酸序列的分析表明:JP2菌株的dna连接酶与古细菌种Sulfolobussolfataricus和Sulfolobusshibatae的dna连接酶具有很高的同源性,尤其在与功能紧密相关的6个保守结构基序的一致性更高.JP2连接酶表现出高的dna缺口连接活性,在二价金属辅因子的选择方面,JP2连接酶更倾向于Mn2+离子而不是Mg2+、Ca2+及其他离子.不同温度时的热稳定性测试显示:JP2连接酶在50～80℃时为较适连接温度,当温度不超过85℃时,连接酶的活性在5h内保持相对稳定,但在90℃以上活性则很快降低.还分离纯化了JP2的分子伴侣——TF55,并将其应用于增加JP2连接酶的热稳定性研究.结果表明:在体外85℃时,分子伴侣未增加连接酶的热稳定性,可能的原因是在85℃体外状态下TF55本身就表现出不稳定性.

关键词： dna连接酶 Sulfolobus spp. 嗜热耐酸古细菌耐热性分子伴侣TF55

Thermus aquaticus dna连接酶的连接特性研究

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中国海洋大学学报（自然科学版） 2016年第5期46卷 50-55页

作者：于欣王静安然梁兴国中国海洋大学食品科学与工程学院山东青岛266003

为进一步研究Thermus aquaticus（Taq）dna连接酶的作用机理、开发以dna连接作为关键步骤的新生物技术,本文以含有超稳定发卡结构的dna（带有11nt长的单链部分）和另一条单链dna为连接底物,研究了片段长度、反应温度、连接位点的结构特... 详细信息

为进一步研究Thermus aquaticus（Taq）dna连接酶的作用机理、开发以dna连接作为关键步骤的新生物技术,本文以含有超稳定发卡结构的dna（带有11nt长的单链部分）和另一条单链dna为连接底物,研究了片段长度、反应温度、连接位点的结构特性、聚乙二醇（Polyethylene glycol,PEG）的添加等对连接的影响,探讨了Taq dna连接酶的连接特性。连接结果显示：单链dna的3’端同发卡结构I底物相连的连接率,比单链dna的5’端同发卡结构II底物相连的连接率更高;可以连接的最短单链dna片段的长度为6nt;在20～65℃范围内,一般连接率随温度升高而升高。在连接时,由2条底物通过互补配对形成的复合体的热稳定性对连接率影响不大,一般在连接温度远远高于该复合体的熔点（Melting Temperature,Tm）时仍有很高的连接率。在70或75℃时,虽然连接率有所降低,但仍然可以连接9nt的单链dna片段。研究还发现,在片段连接上,PEG 6000对较难连接的片段（6～7nt）有促进作用,对容易连接的片段（8～10nt）促进作用不显著,甚至有一定抑制作用。

关键词： Taq dna连接酶发卡结构短片段

额外的错配碱基提高T4 dna连接酶等位特异性连接（英文）

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中国生物化学与分子生物学报 2018年第8期34卷 854-860页

作者：李书亚郜艳敏胡亚赛郝敏齐浩天津大学化工学院系统生物工程教育部重点实验室天津大学天津300072

连接是一种主要的dna处理过程。由于较低的商业成本以及核酸底物识别的灵活性,T4dna连接酶被广泛应用于生物分子工程,特别是特定核酸序列的等位特异性连接检测。本文评估了在T4 dna连接酶介导的连接反应中,引入额外的错配碱基对所产生... 详细信息

连接是一种主要的dna处理过程。由于较低的商业成本以及核酸底物识别的灵活性,T4dna连接酶被广泛应用于生物分子工程,特别是特定核酸序列的等位特异性连接检测。本文评估了在T4 dna连接酶介导的连接反应中,引入额外的错配碱基对所产生的影响。设计了超过150组dna/dna或dna/RNA带有的额外错配碱基对的组合。结果发现,引入额外的错配碱基对后,T4 dna连接酶在dna/dna连接中特异性可提高60倍以上,而在dna/RNA连接中特异性只能提高2倍。在等位特异性连接中,有的错配碱基对可使T4 dna连接酶的特异性提高600多倍。

关键词：等位特异性连接错配 T4 dna连接酶锁式探针

哺乳动物dna连接酶在dna双链断裂修复通路中的作用

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遗传 2016年第2期38卷 178-179页

作者：芦广庆段金志张昱北京生命科学研究所北京102206 北京协和医学院研究生院

保持基因组的完整性和稳定性对于生物体的存活是十分重要的。dna损伤来源于多方面，主要包括内源性的生理因素（如细胞代谢产物、dna复制错误、抗体类别转换等）和外源性因素（如uv照射、同位素辐射等）。基因组dna一旦发生损伤，机体内... 详细信息

保持基因组的完整性和稳定性对于生物体的存活是十分重要的。dna损伤来源于多方面，主要包括内源性的生理因素（如细胞代谢产物、dna复制错误、抗体类别转换等）和外源性因素（如uv照射、同位素辐射等）。基因组dna一旦发生损伤，机体内的dna损伤修复机制就会被激活。

关键词： dna连接酶断裂修复哺乳动物基因组dna dna损伤通路双链 dna复制

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T4dna连接酶对电转化效率的影响

中国现代医学杂志 2011年第17期21卷 1974-1976页

作者：王福利赵爱志韩月恒温伟红刘建平董青川秦卫军第四军医大学西京医院泌尿外科陕西西安710032 第四军医大学西京医院肝胆外科陕西西安710032 第四军医大学西京医院第四军医大学基础部免疫学教研室陕西西安710032

目的探讨T4dna连接酶影响电转化效率的机制并寻找提高电转化效率的方法。方法将1μg噬粒pDAN5加入到连接反应体系中并进行沉淀、热灭活以及酚氯仿抽提等各种处理后进行电转化。结果热灭活、酚氯仿抽提、热灭活后沉淀及热灭活后酚氯仿抽... 详细信息

目的探讨T4dna连接酶影响电转化效率的机制并寻找提高电转化效率的方法。方法将1μg噬粒pDAN5加入到连接反应体系中并进行沉淀、热灭活以及酚氯仿抽提等各种处理后进行电转化。结果热灭活、酚氯仿抽提、热灭活后沉淀及热灭活后酚氯仿抽提处理后的转化效率最高(4.6×108￣5.3×108),其次是沉淀处理(4.8×107),未处理的转化效率最低(4.4×106)。结论 T4dna连接酶的活性是导致电转化效率降低的主要原因,任何可以灭活该酶活性的方法均可显著地提高转化效率。

关键词： T4 dna连接酶电转化

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T4 dna连接酶酶活力测定方法

中国测试 2014年第2期40卷 64-66,81页

作者：周李华叶德萍王智唐祥凯中国测试技术研究院四川成都610021

工具酶的酶活力检测是工具酶产品质量控制的关键,研究和建立工具酶酶活力的测定方法是工具酶产品标准化制定的重点和难点。该文采用改进的粘性末端单位测定T4 dna连接酶酶活力。经验证,方法重复性好,稳定性佳,为建立T4 dna连接酶质量检... 详细信息

工具酶的酶活力检测是工具酶产品质量控制的关键,研究和建立工具酶酶活力的测定方法是工具酶产品标准化制定的重点和难点。该文采用改进的粘性末端单位测定T4 dna连接酶酶活力。经验证,方法重复性好,稳定性佳,为建立T4 dna连接酶质量检测标准奠定了基础。

关键词： T4 dna连接酶酶活力测定

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耐辐射球菌dna连接酶的研究

耐辐射球菌DNA连接酶的研究

作者：乐东海浙江大学

学位级别：硕士

在耐辐射球菌基因组中有两个基因分别编码dna连接酶,一个是NAD依赖型dna连接酶(LigA),一个是ATP依赖型dna连接酶(LigB)。本文对其进行了生物信息学,突变和生化特性分析研究。结果如下: 1.系统进化和保守区域局部联配表明DRLigA在NA... 详细信息

在耐辐射球菌基因组中有两个基因分别编码dna连接酶,一个是NAD依赖型dna连接酶(LigA),一个是ATP依赖型dna连接酶(LigB)。本文对其进行了生物信息学,突变和生化特性分析研究。结果如下: 1.系统进化和保守区域局部联配表明DRLigA在NAD依赖型dna连接酶中与Thermus连接酶非常接近,而DRLigB与其它ATP依赖型dna连接酶关系很远,除了Nitrosomonas europaea(NE1884,真核dna连接酶Ⅲ的类似同源物)。 2.对DRB0100和DR2069进行了定向突变。DRB0100为纯合子突变,DR2069为持续的杂合子突变。因而,DRB0100是个非必需基因,DR2069是必需的。 3.在大肠杆菌中表达出两者的重组酶,均一性纯化后进行了生化鉴定。两种dna连接酶的最佳反应温度和pH值分别为60℃和7.0。它们的最佳MgCl浓度为5mM。各自的100℃热失活的半活性期大约为3分钟和5分钟。此外,DRLigB比DRLigA在粘性和平末端dna的连接上表现出更高的活性。

关键词： dna连接酶耐辐射球菌生物信息学突变生化特性

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dna连接酶的结构与功能

生命的化学 2001年第2期21卷 119-121页

作者：张波孟紫强山西大学环境医学与毒理学研究所山西大学生命科学系太原030006

在dna合成中，合成方向为5＇→3＇，即一条链上是连续复制的，而另一条链的复制是不连续的，必须先合成岗崎片段(真核细胞的岗崎片段为100 bp，原核细胞的为1 000 bp)。dna连接酶的作用就是催化岗崎片段的连接以完成dna的合成。另外，DN... 详细信息

在dna合成中，合成方向为5＇→3＇，即一条链上是连续复制的，而另一条链的复制是不连续的，必须先合成岗崎片段(真核细胞的岗崎片段为100 bp，原核细胞的为1 000 bp)。dna连接酶的作用就是催化岗崎片段的连接以完成dna的合成。另外，dna连接酶在dna修复过程中也起重要作用，如在切除修复中，切除损伤的dna片段，以未受损伤的链作为模板合成一条新的dna链后，dna连接酶将新合成的dna链与原来的dna链之间的缺口封闭完成dna的修复。dna链未封闭的缺口对细胞具有潜在的危险性，所以，dna连接酶不仅在细胞分裂时的dna合成中起重要作用，而且在保持基因组的完整性方面也是必不可少的。

关键词： dna连接酶蛋白质结构 dna复制切除修复功能

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dna连接酶及相关检测技术研究进展

中国优生与遗传杂志 2007年第8期15卷 5-9页

作者：易萍李力陈竹钦第三军医大学大坪医院野战外科研究所妇产科重庆400042

核酸检测技术已被广泛应用于分子遗传学、微生物学、免疫学和肿瘤学等方面的临床诊断.聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术大大促进了病原体、基因突变和基因型的分子诊断方法的发展,它将在临床诊断与分析中起着越来越... 详细信息

核酸检测技术已被广泛应用于分子遗传学、微生物学、免疫学和肿瘤学等方面的临床诊断.聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术大大促进了病原体、基因突变和基因型的分子诊断方法的发展,它将在临床诊断与分析中起着越来越重要的作用。[第一段]

关键词：核酸检测技术 dna连接酶聚合酶链式反应分子遗传学临床诊断微生物学诊断方法基因突变