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dna羟甲基化修饰在叶酸缺乏导致神经管畸形发生中的机制研究

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DNA羟甲基化修饰在叶酸缺乏导致神经管畸形发生中的机制研究

作者：曾雨冰首都儿科研究所

学位级别：硕士

研究背景:神经管畸形(Neural tube defects,NTDs)是一类预后不良的中枢神经系统先天性出生缺陷,其病因复杂且机制尚不明确。神经管闭合(Neural tube closure,NTC)是一个精细协调的过程,受遗传和营养环境因素的影响。当NTC过程某一环节... 详细信息

研究背景:神经管畸形(Neural tube defects,NTDs)是一类预后不良的中枢神经系统先天性出生缺陷,其病因复杂且机制尚不明确。神经管闭合(Neural tube closure,NTC)是一个精细协调的过程,受遗传和营养环境因素的影响。当NTC过程某一环节出现异常,可导致NTDs的发生。因此,深入研究NTDs的发病机制有助于全面了解其致病因素,有效防治NTDs发生,对提高人口质量有重要作用。叶酸(Folate acid,FA)缺乏是引起NTDs发生的主要营养因素。叶酸的异常代谢可引起NTC发生异常诱发NTDs。叶酸转化成四氢叶酸作为甲基供体参与一碳单位的转移过程,调节dna甲基化(dna methylation)修饰。dna甲基化作为重要的表观遗传修饰,参与哺乳动物生命周期中发育、代谢等调节过程。dna甲基化主要由dna甲基转移酶(dna methyltransferase,DNMT)催化。在DNMT酶的作用下,基因组CpG二核苷酸的胞嘧啶第5位碳原子共价结合一个甲基基团,形成5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine,5mC)。dna羟甲基化(dna hydroxymethylation)修饰由10-11易位(Ten-eleven-translocation,TET)蛋白通过级联氧化反应促进5mC转化为5-羟甲基胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine,5hmC),并逐步转化为5-甲酰嘧啶(5-formylcytosine,5fC)和5-羧基胞嘧啶(5-carboxylcytosine,5caC),引起dna羟基化修饰发生。既往研究表明,人体中5hmC在不同组织的分布具有明显差异,在脑组织中5hmC含量最高,5hmC在中枢神经系统中参与多种重要调节。研究表明叶酸缺乏可引起细胞氧化还原反应增多,导致异常的dna羟甲基化发生。然而,在叶酸缺乏情况下,dna羟甲基化修饰对NTDs发生中的调控作用及分子机制目前尚未明确。研究目的:探究叶酸缺乏条件下dna羟甲基化修饰在NTDs发生发展中的作用机制,利用表观遗传学方法研究叶酸缺乏对NTDs的发病影响,推动NTDs领域发病机理的新认识,提供NTDs预防治疗和药物筛选的新靶标,也为同类出生发育缺陷疾病提供重要的参考价值。研究方法:1.构建叶酸缺乏的小鼠胚胎干细胞(Mouse embryonic stem cells,mESCs)模型,利用转录组测序(RNA sequencing,RNA-seq)筛选差异表达基因,通过基因功能注释(Gene ontology,GO)及京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析预测叶酸缺乏引起的功能变化。2.叶酸缺乏mESCs模型中,RT-qPCR检测dna羟甲基化酶和dna甲基化酶的转录水平变化。3.羟甲基化dna免疫沉淀测序(Hydroxymethylated dna immunoprecipitation sequencing,hMeDIP-seq)和甲基化dna免疫沉淀测序(Methylated dna immunoprecipitation sequencing,MeDIP-seq)检测叶酸缺乏mESCs模型中5hmC和5mC的富集情况,利用生物信息学技术筛选发生显著变化的NTDs相关通路及下游基因。4.染色质免疫共沉淀测序(Chromatin immunoprecipitation sequencing,ChIP-seq)检测叶酸缺乏mESCs模型中组蛋白H3赖氨酸27位点乙酰化(Histone 3 lysine 27 acetylation,H3K27ac)的富集情况,采用生物信息学技术分析筛选出的NTDs相关基因在叶酸缺乏条件下H3K27ac富集水平变化。5.构建叶酸缺乏及叶酸回补mESCs模型,利用RT-qPCR和hMeDIP-qPCR检测NTDs相关基因的转录水平及dna羟甲基化修饰在NTDs相关基因中的富集变化。6.构建低叶酸喂养联合甲氨蝶呤(Methotrexate,MTX)诱导NTDs胎鼠模型,利用dna斑点杂交技术(dna dot blot)、免疫组化(Immunohistonchemistry,IHC)检测dna羟甲基化修饰、dna羟甲基化酶和dna甲基化酶的变化情况;利用RT-qPCR检测NTDs胎鼠模型中NTDs相关基因的转录水平变化。研究结果:***-seq结果显示,叶酸缺乏引起mESCs中基因发生显著差异变化,差异表达基因与氧代谢、细胞生长和发育、dna及组蛋白甲基化通路有关;RT-qPCR结果表明叶酸缺乏引起dna羟甲基化酶Tet1、Tet2和dna甲基化酶Dnmt1发生显著上调,dna羟甲基化酶

关键词：神经管畸形叶酸缺乏 dna羟甲基化 Shh信号通路 5hmC

dna羟甲基化在小鼠胚胎干细胞中的研究进展

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生物化学与生物物理进展 2011年第7期38卷 611-614页

作者：谭理复旦大学生物医学研究院表观遗传学实验室上海200032

简要总结dna羟甲基化在小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESC)中的最新研究进展.dna甲基化(dnamethylation)影响染色质的结构与功能,在发育与疾病发生过程中具有重要作用.2009年Tahiliani等发现TET1可以催化甲基化胞嘧啶(5-m... 详细信息

简要总结dna羟甲基化在小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESC)中的最新研究进展.dna甲基化(dnamethylation)影响染色质的结构与功能,在发育与疾病发生过程中具有重要作用.2009年Tahiliani等发现TET1可以催化甲基化胞嘧啶(5-methylcytosine,5mC)氧化为羟甲基化胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine,5hmC).dna羟甲基化(dnahydroxymethylation)被认为是调节dna甲基化的一种重要方式,成为了表观遗传学的研究热点之一.

关键词：小鼠胚胎干细胞 dna羟甲基化 Tet1

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dna羟甲基化测序技术

化学学报 2013年第1期71卷 26-35页

作者：赵超汪海林中国科学院生态环境研究中心环境化学与生态毒理学国家重点实验室北京100085

5-羟甲基胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine,5hmC)是继5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine,5mC)之后发现的第六种碱基,已在多种哺乳动物组织和细胞中检出.与5mC相比,5hmC的含量更低,但5hmC也具有非常重要的生物学功能.已有的研究表明,5hmC参... 详细信息

5-羟甲基胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine,5hmC)是继5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine,5mC)之后发现的第六种碱基,已在多种哺乳动物组织和细胞中检出.与5mC相比,5hmC的含量更低,但5hmC也具有非常重要的生物学功能.已有的研究表明,5hmC参与了染色体重新编程、基因表达的转录调控,并在dna去甲基化过程中发挥重要作用.另外,5hmC可能与特定肿瘤的发生密切相关,有可能成为肿瘤早期诊断的生物标志物.因此,发展可靠、灵敏和准确的5hmC检测技术至关重要.本综述针对dna羟甲基化的检测及测序技术进行了简要介绍.

关键词： dna羟甲基化 dna甲基化 dna测序技术

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dna羟甲基化调控动脉粥样硬化的研究进展

遗传 2020年第7期42卷 632-640页

作者：胡颖楚胡豪畅林少沂陈晓敏浙江大学宁波医院心血管内科宁波315000 浙江大学医学院杭州310029

dna羟甲基化作为一种表观遗传学修饰,对基因的表达调控起到了重要作用。近年来,越来越多的研究发现在心血管疾病中可见5-羟甲基胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine, 5hmC)和染色体10/11易位(ten-eleven translocation,TET)家族蛋白的异常改... 详细信息

dna羟甲基化作为一种表观遗传学修饰,对基因的表达调控起到了重要作用。近年来,越来越多的研究发现在心血管疾病中可见5-羟甲基胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine, 5hmC)和染色体10/11易位(ten-eleven translocation,TET)家族蛋白的异常改变,提示这些心血管疾病与dna羟甲基化的调控密切相关。dna羟甲基化水平与动脉粥样硬化常见的危险因素如衰老、性别、高血压和吸烟存在一定关联,并且和动脉粥样硬化发生过程中所涉及的免疫炎症反应以及内皮细胞和血管平滑肌细胞的功能相关。本文综述了dna羟甲基化和TET家族蛋白对于动脉粥样硬化的作用机制及研究现状,以期为动脉粥样硬化的发生发展及诊断治疗提供表观遗传学方面的研究思路。

关键词： dna羟甲基化动脉粥样硬化 5hmC TET 表观遗传学

早发冠心病血瘀证dna羟甲基化调控基因表达的作用机制及中药干预研究

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早发冠心病血瘀证DNA羟甲基化调控基因表达的作用机制及中药干预...

作者：江雨洁湖南中医药大学

学位级别：硕士

目的:通过筛选dna羟甲基化差异基因,构建早发冠心病血瘀证易感基因调控网络,以方测证,探讨养心通脉方对早发冠心病血瘀证dna羟甲基化差异基因的表达作用,从基因表达-病证结合-中药干预的系统生物学角度出发为早发冠心病个体化差异预防... 详细信息

目的:通过筛选dna羟甲基化差异基因,构建早发冠心病血瘀证易感基因调控网络,以方测证,探讨养心通脉方对早发冠心病血瘀证dna羟甲基化差异基因的表达作用,从基因表达-病证结合-中药干预的系统生物学角度出发为早发冠心病个体化差异预防和临床治疗提供思路和方法。方法:（1）按照纳入/排除标准收集早发冠心病患者静脉血,使用dna羟甲基化芯片技术和m RNA芯片技术检测早发冠心病血瘀证dna羟甲基化差异基因表达谱和m RNA表达谱,筛选早发冠心病血瘀证dna羟甲基化易感基因,进行GO富集分析和通路富集分析。（2）按照纳入/排除标准招募早发冠心病血瘀证患者14例,随机分为中药组和西药组各7例,中药组在西药常规的基础上联合养心通脉方治疗,西药组用西药常规治疗,使用RT-q PCR技术检测两组治疗前后富含亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样区1基因（leucine rich repeats and immunoglobulin like domains 1,LRIG1）、微管蛋白β2A基因（tubulin beta 2A,TUBB2A）、p53与dna损伤调控1基因（p53 and dna damage regulated 1,PDRG1）的表达,对比两组治疗前后血脂、凝血功能、心电图、中医证候积分及LRIG1、TUBB2A、PDGR1的相对表达量,比较两组的治疗效果。结果:（1）早发冠心病血瘀证组与健康对照组相比,dna羟甲基化差异表达基因上调125个,下调669个,m RNA差异表达基因上调116个,下调300个,通过venny2.0取两者交集得到6个下调易感基因,其中LRIG1、TUBB2A、PDRG1差异倍数最大,可作为早发冠心病血瘀证dna羟甲基化候选易感基因。（2）GO富集条目共426条,分子功能结果显示dna羟甲基化差异基因在组蛋白去乙酰酶活性、NAD依赖性组蛋白去乙酰酶活性、钙粘蛋白结合参与细胞间粘附等途径中发挥生物学功能;生物学过程结果显示dna羟甲基化差异基因在细胞分化负调控、细胞发育负调控、多细胞生物过程负调控等途径发挥生物学功能;细胞组分结果显示dna羟甲基化差异基因在转移酶复合物、细胞黏附连接、细胞间连接等途径发挥生物学功能。（3）通路富集结果显示dna羟甲基化差异基因主要与内吞作用、核苷酸切除修复、紧密连接、长寿调节途径等通路相关。（4）通过养心通脉方干预发现:（1）血脂:两组治疗后的HDL-C均比治疗前明显升高,差异具有统计学意义;西药组治疗后的TC、LDL-C比治疗前升高,差异具有统计学意义,可能与遗传因素、个人体质、不良的饮食习惯等相关;组间比较结果显示,与西药组相比,中药组的TC、LDL-C治疗效果更佳。（2）凝血功能:中药组治疗后的PT比治疗前降低,西药组的PT、APTT比治疗前降低,差异具有统计学意义,可能与个人体质、遗传因素等相关;组间比较两组疗效无明显差别。（3）心电图:中药组的有效率为71.4%,西药组的有效率为57.1%,组间比较两组治疗效果无明显差别。（4）中医证候积分:中药组治疗后的血瘀证积分比治疗前明显降低,差异具有统计学意义,西药组治疗前后无明显差别,组间比较中药组活血化瘀效果优于西药组,差异具有统计学意义。（5）中药组LRIG1、TUBB2A治疗后的相对表达量比治疗前上调,差异具有统计学意义,PDRG1治疗前后无明显差别,西药组LRIG1、TUBB2A、PDRG1治疗前后无明显差别;组间比较发现中药组LRIG1表达量的上调比西药组显著,差异有统计学意义。结论:（1）早发冠心病血瘀证dna羟甲基化差异基因表达可能与细胞间粘附、细胞分化负调控、细胞间连接、内吞作用、紧密连接、长寿调节等途径相关。（2）养心通脉方对早发冠心病血瘀证治疗效果显著,具有降脂化瘀的功效。（3）养心通脉方能调控LRIG1、TUBB2A基因表达,但对PDRG1基因无明显调控作用,dna羟甲基化修饰的LRIG1、TUBB2A基因是早发冠心病血瘀证的易感基因。

关键词：早发冠心病血瘀证 dna羟甲基化养心通脉方 LRIG1 TUBB2A PDRG1

孕期急性砷暴露降低胎脑dna羟甲基化水平诱发神经管畸形

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孕期急性砷暴露降低胎脑DNA羟甲基化水平诱发神经管畸形

作者：陈旭安徽医科大学

学位级别：硕士

目的:本研究重点关注孕期砷暴露对胎鼠的致畸效应,探讨了胎脑dna羟甲基化水平改变及细胞周期阻滞在孕期砷暴露诱发胎鼠神经管畸形中的作用。方法:研究分为动物实验和体外实验两个方面。动物实验由两部分组成。实验一:探究孕期不同剂量... 详细信息

目的:本研究重点关注孕期砷暴露对胎鼠的致畸效应,探讨了胎脑dna羟甲基化水平改变及细胞周期阻滞在孕期砷暴露诱发胎鼠神经管畸形中的作用。方法:研究分为动物实验和体外实验两个方面。动物实验由两部分组成。实验一:探究孕期不同剂量砷暴露对胎鼠妊娠结局的影响,将GD8孕鼠分为三组,对照组腹腔注射生理盐水,低剂量组注射10 mg/kg的Na As O,高剂量组注射12mg/kg的Na As O。GD18上午处死孕鼠,记录活胎数、死胎数、吸收胎数、神经管畸形数。实验二:探究孕期砷暴露对胎鼠神经管畸形的影响,将GD8孕鼠分为两组,对照组给予腹腔注射生理盐水,处理组给予12 mg/kg的Na As O。GD12上午剖杀部分孕鼠,收集胎脑组织并制备病理切片,用LC-MS/MS检测胎脑组织5hm C及α-KG水平,用RT-PCR检测砷暴露对胎脑dna羟甲基化调控、细胞增殖及细胞周期相关指标的影响。GD18上午,处死剩余孕鼠并记录活胎数、死胎数、吸收胎数、神经管畸形数。体外用C17.2神经干细胞进行实验,运用CCK-8和RTCA实验检测C17.2细胞在不同剂量和不同时间砷暴露下的细胞活性和增殖指数。运用RT-PCR技术检测不同时间砷暴露对C17.2细胞增殖、细胞周期、dna羟甲基化调控以及活性氧生成的影响,流式细胞术检测不同时间砷暴露后细胞活性氧水平。结果:动物实验结果表明,孕期砷暴露可诱发胎鼠出现神经管畸形。GD12胎脑H&E染色发现砷暴露组胎脑组织细胞排列紊乱、分布疏松,界膜杂乱不规整。RT-PCR结果显示,砷暴露组胎脑PCNA、ki67 m RNA表达水平显著降低,同时,G0/G1周期调控蛋白CDK6、Cyclin D、CDK2、Cyclin E1的m RNA水平均降低且G2/M周期调控蛋白CDK1、Cyclin B1的m RNA水平也降低。进一步研究发现,孕期砷暴露组胎脑5hm C水平显著降低,胎脑α-KG水平有降低趋势。此外,砷对羟甲基化酶TETs系列基因表达水平也有抑制作用。体外实验中,CCK-8、RTCA的结果表明不同时间或不同剂量砷暴露均会抑制C17.2细胞增殖。RT-PCR结果显示砷抑制C17.2细胞周期调控相关基因Cyclin B1、p16 m RNA水平。同样,砷暴露降低了C17.2细胞羟甲基化酶TET1、TET2的m RNA水平。流式细胞术结果表明砷暴露明显升高细胞内活性氧水平。此外,砷暴露也抑制了C17.2细胞HO-1、SOD1的m RNA水平。结论:孕鼠腹腔注射暴露砷引起胎脑发育异常诱发胎鼠神经管畸形。胎脑发育受损可能是砷降低胎脑dna羟甲基化水平,扰乱细胞周期并抑制胎脑增殖所引起。

关键词：砷神经管畸形 dna羟甲基化细胞周期阻滞活性氧

胃癌循环肿瘤dna羟甲基化检测和文献Meta分析

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胃癌循环肿瘤DNA羟甲基化检测和文献Meta分析

作者：申傲吉林大学

学位级别：硕士

研究目的:目前胃癌的诊断主要依靠内窥镜取病理及影像学手段,但上述技术均存在着一定的局限性,无法做到实时和无创监测。已广泛应用的肿瘤标志物虽可以一定程度上满足上述需求,但仍缺乏较强的灵敏度及特异性,在恶性肿瘤的诊断中仅起辅... 详细信息

研究目的:目前胃癌的诊断主要依靠内窥镜取病理及影像学手段,但上述技术均存在着一定的局限性,无法做到实时和无创监测。已广泛应用的肿瘤标志物虽可以一定程度上满足上述需求,但仍缺乏较强的灵敏度及特异性,在恶性肿瘤的诊断中仅起辅助作用。本研究希望通过液体活检技术结合dna羟甲基化这一新兴生物标志物,探索循环肿瘤dna（circulating tumordna,ctdna）羟甲基化检测在胃癌中的临床应用价值。第一部分胃癌中循环肿瘤dna羟甲基化检测方法:收集2020年1月至2021年1月间于吉林大学第一医院胃结直肠外科接受手术治疗的胃癌患者10例,告知并签署知情同意书后,术前使用PAXgene Blood ccfdna Tube试管留取外周静脉血7-10ml。同时,另行收集10例非胃癌样本作为对照组。提取血浆,采用Circulating Nucleic Acid Kit试剂盒提取ctdna,对质检合格的ctdna样品进行5-羟甲基胞嘧啶（5-hydroxymethylcytosine,5-hmC）文库构建及质量控制,之后以合成测序法进行测序。以5-hmC作为dna羟甲基化水平标志,比较分析胃癌和对照组外周血ctdna羟甲基化状态和基因分布和具体差异。结果:1、在胃癌和对照组中,ctdna的5-hmC主要富集在基因体的内含子区（胃癌组:54.97%;对照组:54.23%）,而在启动子区（胃癌组:1.70%;对照组:1.59%）和转录起始区（胃癌组:1.24%;对照组:1.26%）5-hmC相对较少;2、在全基因水平上,ctdna羟甲基化在胃癌组中的整体水平高于对照组（Cramer’s V=0.765,P＜0.01）;3、胃癌组与对照组比较,共发现1939个差异基因,其中949个基因dna羟甲基化升高,990个基因dna羟甲基化降低。其中差异表达前10位的基因分别:NUTM2B,RNASE6,TRIML1,FOXF1,MAFB,GLTPD2,CCNO,ANKRD49,ANKRD20A1和PPIAL4A（以log2fc的绝对值＞0.26为截断值）。结论:全基因体分布水平和标志性位点检测均显示,胃癌患者和对照组相比,ctdna羟甲基化水平存在显著差异;ctdna中的5-hmC是一种有潜力的胃癌诊断标志物。第二部分ctdna羟甲基化在恶性肿瘤诊断中应用的Meta分析研究方法:检索从建库至2021年11月1日期间,Pubmed、Cocrane Library、万方、中国知网、Embase、谷歌学术、维普中文期刊全文数据库和百度学术共8个数据库中ctdna中羟甲基化在恶性肿瘤临床应用中的全部文献。制定纳入和排除标准;整理文献信息,多层筛选后最终纳入合格文献。利用Review manager 5.3软件quadas-2量表对纳入文献进行质量风险评估;绘制文献基本信息表,整理归纳各个研究的真阳性（TP）、假阳性（FP）、真阴性（TN）、假阴性（FN）原始数值;利用Meta-Disc 1.4、STATAMP 13软件合并原始数据得出敏感度（SEN,Sensitivity）、特异度（SPE,Specificity）、阳性似然比（PLR,Positive likelihood ratio）、阴性似然比（NLR,Negative likelihood ratio）、诊断比值比（DOR,Diagnostic ratio ratio）等参数值或比值。根据异质性检验结果,更换合并效应模型并行异质性分析、评估异质性来源;依据合并后效应值制作综合受试者曲线（s ROC）,计算其曲线下面积（AUC）,同时使用STATAMP 13软件绘制Fagan’s nomogram图及似然比矩阵图以评估ctdna羟甲基化对于恶性肿瘤的诊断效能。结果:1.最终纳入2017-2021年发表的9篇文献,共包含23项研究,质量风险评估均为高质量;其中包括7种恶性肿瘤,分别是:非小细胞肺癌2项、神经胶质瘤2项、食管癌2项、胃癌2项、结直肠癌3项、胰腺癌6项和肝癌6项。涵盖中国及美国共计2484例恶性肿瘤患者和4298例对照。诊断阈值效应分析P=0.708＞0.05,提示各研究间不存在阈值效应;发表偏倚Deeks’test:P=0.06＞0.05,提示纳入文献不存在发表偏倚;2.结果表明:与对照相比,肿瘤患者血液中ctdna羟甲基化的基因分布和/或标志位点状态均存在显著差异。其中全基因水平dna羟甲基化水平升高（4/9）、4篇文献提示羟甲基化下降（4/9）、1篇相关信息缺如（1/9）;关于基因分布,dna羟甲基化分别集中在编码区的内含子（3/9）、编码区外显子（2/9）和非编码区（2/9）。2篇结果缺如（2/9）;这些差异性基因具有肿瘤特异性,同时亦包含了相当部分相同基因。3、ctdna羟甲基化应用

关键词：循环肿瘤dna dna羟甲基化胃癌恶性肿瘤 Meta分析

液相色谱-串联质谱法分析大鼠血液中基因组dna羟甲基化水平

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质谱学报 2015年第3期36卷 249-254页

作者：陈光照杨柳青文娟葛苗苗张立坚蔡春广东医学院分析中心广东湛江524023 四川大学华西药学院四川成都610041

5-羟甲基胞嘧啶（5-hydroxymethyleytosine,5hmC）是由TET蛋白家族催化氧化5-甲基胞嘧啶（5-methylcytosine,5mC）生成的,对哺乳动物的基因转录和表达发挥着重要的调控作用.本研究建立了血液样品中5hmC的液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）... 详细信息

5-羟甲基胞嘧啶（5-hydroxymethyleytosine,5hmC）是由TET蛋白家族催化氧化5-甲基胞嘧啶（5-methylcytosine,5mC）生成的,对哺乳动物的基因转录和表达发挥着重要的调控作用.本研究建立了血液样品中5hmC的液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）测定方法,采用试剂盒法提取血液基因组dna,在甲酸环境下加热裂解,采用HILIC色谱柱分离,电喷雾电离和多反应监测模式定量.结果表明：5hmC在0.1～50 μg/L范围内线性关系良好,相关系数为0.999 4;高、中、低3个加标水平的平均回收率为95.87％,日内和日间的相对标准偏差分别为3.42％和4.12％;5hmC的检出限（LOD,S/N=3）为0.050 μg/L,定量限（LOQ,S/N=10）为0.100 μg/L.该方法准确、快速、稳定、灵敏,可用于血液样品全基因组中5-羟甲基胞嘧啶的检测分析.

关键词： 5-羟甲基胞嘧啶(5hmC) 液相色谱-串联质谱(LC—MS/MS) dna羟甲基化血液大鼠

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dna羟甲基化修饰与神经系统疾病

生命的化学 2016年第4期36卷 437-442页

作者：刘霞颜景斌上海交通大学附属儿童医院上海市儿童医院上海医学遗传研究所卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室上海市胚胎与生殖工程重点实验室上海200040

dna羟甲基化修饰主要是指5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine,5m C)在10-11易位(ten-eleven translocation,TET)蛋白家族的氧化作用下生成5-羟甲基胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine,5hm C)。5hm C不仅能在去甲基化过程中起重要作用,而且还参与了基因的表达调控。5hm C的含量有着高度的组织特异性,且目前在中枢神经系统中也发现了高水平的5hm C。与神经系统疾病相关的基因中存在明显的5hm C水平的改变,暗示着dna羟甲基化修饰很可能在神经系统疾病的发生与发展过程中起了重要作用。

关键词： dna羟甲基化 5hmC 神经系统疾病